Способ получения 4-андростен-3,17-диона или 1,4-андростадиен-3,17-диона Советский патент 1991 года по МПК C12P33/16 C12P33/00 C12R1/32 

Изобретение относится к биотехнологии и может найти применение в промышленном масштабе для синтеза фармакологически эффективных стероидов.

В соответствии с изобретением транс- Формацию проводят с применением культур микроорганизмов, которые применяют обычным способом для разложения боковых цепей стеринов.

Пригодными культурами являются, например, бактериальные культуры, способные к разложению боковых цепей стеринов.

Особенно предпочтительны в качестве микроорганизмов Mycobacterlum species

NRRL B-3805, Mycobacterlum species NRRL B-3683, Mycobacterlum phlei NRRL B-8154 и Mycobacterlum fortuitum NRRL B-8153, с помощью которых разложение о. -ситостерина может быть осуществлено без применения дополнительных ингибиторов, замедляющих 9 а-оксилирование.

При культуральных условиях, обычно применяемых для этих микроорганизмов, выращивают в пригодной питательной среде при аэрации погруженные культуры. Затем к культурам добавляют субстрат а -ситостерин (растворенный в пригодном растворителе или, предпочтительно, в виде эмульсии) и подвергают ферментации до доа NJ

SQ

ю XI

vj

СО

стижения максимальной конверсии субстрата, о

Пригодными растворителями для субстрата являются, например, метанол, этанол, монометиловый эфир гликоля, диметилформамид или диметилсульфок- сид. Можно, например, осуществить эмульгирование субстрата, при этом последний в тонкоизмельченном виде или в смешивающемся с водой растворителе (например, метаноле, этаноле, ацетоне, монометиловом эфире гликоля, диметил- формамиде или диметилсульфоксиде) растворяют при энергичном перемешивании в воде (предпочтительно не содержащей солей Кальция), содержащей обычные эмульгирующие агенты. Пригодными эмульгирующими агентами являются неионоген- ные эмульгаторы, например, аддукты этиленоксида или сложные эфиры жирных кислот и полигликолена. В качестве примера пригодных эмульгаторов можно назвать имеющиеся в продаже смачивающие агенты: тетин (Teginp), твин (Tweerr) и спан (SpanR).

Оптимальные концентрации субстрата, продолжительность добавления субстрата и продолжительность ферментации зависят от структуры применяемого субстрата и вида применяемого микроорганизма. Значения этих величин, как это вообще необходимо делать при микробиологической конверсии стероидов, следует определять в каждом конкретном случае путем проведения предварительных опытов, как известно специалистам в данной области.

Производные 4-андростен-3,17-диона, которые могут быть получены по предлагаемому способу являются известными ценными промышленными продуктами, которые в настоящее время применяются в промышленном масштабе для синтеза фармакологически эффективных стероидов.

П р и м е р 1. Двухлитровую эрленмейе- ровскую колбу с 500 мл стерильной питательной среды с рН, 6,7 содержащей, %: Дрожжевой экстракт1

Двунатриевый гидрофосфат0,45

Калиевый дигидрофосфат0,34

Твин 800,2

заражают суспензией Mycobacterium species NRRL В-3805 и в течение трех дней встряхивают при 30°С при 190 об/мин.

Десять эрленмейеровских колб (емкостью 500 мл) со 100 мл стерильной питательной среды с рН 7,0 содержащей, %:

Экстракт кукурузной замочки2,5

Диаммониевый гидрофосфат0,3

Соевая мука0,25

,25

заражают 5 мл посевной культуры Mycobacterium species NRRL В-3805 и в течение 24 ч встряхивают при 30°С при

230 об/мин. Затем в каждую колбу с культурой добавляют 100 мг а -ситостерина, растворенного в 3,0 мл диметилформамида, и подвергают дальнейшей ферментации в течение 96 ч при 30°С.

Соединенные культуры экстрагируют этиленхлоридом, экстракт концентрируют в вакууме, остаток очищают методом хроматографии в колонке над силикагелем и получают после перекристаллизации из

диизопропилового эфира 16 мг 4-андро- стен-3,17-диона сТпл 171-173°С.

Наряду с этим рекуперируют 385 мг непревращенного а -ситостерина.

П р и м е р 2. При условиях, описанных в примере 1, но с применением Mycobacterium species NRRL B-3683 получают в целом 1000 мг конвертированного а -ситостерина, обрабатывают его и получают кроме 630 мг непревращенного а-ситостерина, 140 мл 1,4-андростзди- ен-3,17-диона с Тпл 139-141 °С.

Формула изобретения Спог.об получения 4-андростен-3,17-ди- она или 1,4-андростадиен-3,17-диона общей формулы

О

35

О

в которой - обозначает простую или двойную связь, предусматривающий трансформацию соответствующего субстрата-стероида культурой микроорганиз-. ма, способного к расщеплению боковой цепи замещенных в 17 положении алкилом с последующим выделением и очисткой целевого продукта хроматографией, о т л ичающийся тем, что, в качестве субстрата используют а -ситостерин формулы

НО

ггО4 jCtT Г

Н СН,

а трансформацию осуществляют штаммами Mycobacterium species NRRL В-3805, Mycobacterium species NRRL B-3683. Mycobacterium phlel NRRL B-8154 или Mycobacterium fortul- tum NRRLB-8153

Изобретение относится к биотехнологии и может найти применение в промышленном масштабе для синтеза фармакологически эффективных стероидов. Способ включает трансформацию ег-сито- стерина штаммами Mycobacterlum species NRRL B-3805, Mycobacterlum species NRRL B-3683, Mycobacterium phlei NRRL B-8154 или Mycobacterlum fortuitum NRRL B-8153 до достижения максимальной конверсии субстрата. Используемые для трансформации микроорганизмы обеспечивают разложение боковых цепей стеринов. Процесс осуществляют без применения дополнительных ингибиторов, замедляющих 9 а-ок- силирование. После трансформации культуры экстрагируют, концентрируют, подвергают хроматографической очистке с последующей перекристаллизацией целевого продукта. Непревращенный в процессе а -систостерин рекуперируют. (Л