Способ количественного определения полиэтиленоксида Советский патент 1981 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к способам количественного определения полиэтиленоксида, и мо жет быть использовано в терапии, хирургии, экспериментальной к клинической фармакологии, в биологии, в том числе криобиологии. Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ количественного определения полиэтиленоксида путем инкубации пробы с нитратпикратом натрия с последующей экстракцией органическим растворителем и фотометрии полученного продукта, основанный на спектрофотометрическом определении комплексов полиэтиленоксйдов с катион ми натрия после экстракции их в виде пикратов в I,2-дихлорэтан. 50 мл водной пробы переносят в делительную воронку на 250 мл со стоп-краном, добав ляют 50 мл нитратпикрата натрия (56,6 г нитрата натрия и 0,92 г высушенной в эксикаторе под вакуумом с пятиокисью фосфата пикриновой кислоты растворяют в 0,1 н.растворе едкого натра в мерной колбе на 100 мл, объем доводят до метки), перемешивают и дают постоять в течение 1 ч.Затем добавляют 5 мл 1,2-; ихлорэтана, энергично взбалтывают в течение 3-х мин,органи ческий слой переносят в коническую центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 10 мин при 2000 об/мин. Параллельно ставят контроль с 50 мл дистиллироЬанной воды. Спектрофотометрируют при 378 км в 1-2 см кварцевых кюветах против контроля. Чувствительность способа 1-0,1 мг/л с точностью от - 6 до «8% по анализам в воде t Известный способ разработан на примере п-тертнонилфенилового эфира полиоксиэтилёна и не пригоден для определения полиэтиленоксида в сложных биологических субстратах, например, крови, растительных соках и, следовательно, не обеспечивает возможности определения токсико- и фармакокинетики, фармакодинамических свойств введенного полиэтиленоксида в организм животного Или человека. Воспроизведению способа мешают имеющиеся в этих биологических сч.тсмах белки и некоторые сахара, обладающие способностью обраэовьгоать комплексы с нитратпикратом натрия, а также красный цвет гемоглобина. К недостаткам способа относится и невозможность добиться полного растворения пикриновой кислоты и нитрата нат рия в 0,1 н.едком натре в указанных соотношениях, Цель изобретения - определение поли этиленоксида в биологических жидкостях Поставленная цель достигается тем, что в предлагаемом способе количественного определения полиэтиленоксида путем инкубации пробы с нитратпикратом натрия с последующей экстракцией органическим растворителем и фотометрии полученного раствора, к пробе перед инкубацией последовательно добавляют хлорид бария, 1-2,5%-ного раство ра гидроокиси бария, 5-6%-ного раствора сульфата цинка, образовавшийся осадок удаляют, а супернатант обрабатывают 10-20%-ным раствором сульфата меди, 12-25%-ным гидроокиси калия, затем смесь инкубируют 15-20 мин при перемешивании и полученньй осадок уда ляют. Способ осуществляют следующим обра зом. К 0,5-1 мл биологического материала, содержащего полиэтгиленоксид для осаждения белков, последовательно добавляют 0,5-1 мл 20-10%-ного хлорида бария, 1-2 мл 1-2,5%-ной гидроокиси бария, }-2 мл 5-6%-ного сульфата цинка. Смесь перемешивают после добавлеНИН каждого реагента, оставляют стоять 10-15 мин и затем центрифугируют 15-20 мин при 2500-3000 об/мин. Недостаток переносят в другую пробирку и для осаждения Сахаров добавляют 24 мл 20-10%-ного сульфата меди CuSO/ и 2-4 мл 25-12%-ной гидроокиси кальция Са(ОН)2, смесь энергично взбалтывают 15-20 мин, затем центрифугируют 510 мин при 2000-3000 об/мин. Лишенньй белков и Сахаров надосадок переносят в другую пробирку и добавляют 3-5 мл комплексообразующего реагента нитратпикрата натрия (1,5-2,2 М нитрата нат рия и 0,015-0,01 М пикриновой кислоты на 0,15-0,1 н.едком натре), смесь взбалтывают и экспонируют в течение 50-60 мин. Затем прибавляют 4-5 мл 8 274 1,2-дихлорэтана, энергично взбалтывают втечение 3-5 мин. Центрифугируют 1015 мин при 2000-2500 об/мин. Органический слой перекосят в другую пробирку и определяют оптическую плотность спектрофотометрически при 378 нм. Расчет католичества ПЭО проводят по калибровочной кривой. Пример. К 1 мл крови, взятой из вены после внутривенного введения ПЭО-3500, последовательно добавляют 1 мл 10%-ного хлорида бария, 2 мл 255%-ной гидроокис.ч бария, 2 мл 5%-ного сульфата цинка. Смесь перемешивают после добавления каждого реагента и спустя Ш мин после прибавления последнего из них центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. Недостаток переносят в другую центрифужную пробирку, добавляют 2 мл 20%-ного сульфата меди и 2. мл 25%-ной гидроокиси кальция, смесь взбалтывают первые 5 мин непрерывно и последующие 10 мин периодически, затем центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин. Надосадок переносят в другую пробирку, добавляют 5 мл реагента нитратпикрата натрия. Смесь тщательно перемешивают, выдерживают в течение 1 ч при комнатной температуре, Затем добавляют в 5 мл I,2-дихлорэтана, энергично взбалтывают в течение 3-х мин и центрифугируют 10 мин при 2000 об/мин. Оптическую плотность органического экстрата определяют спектрофотометрически (на спектрофотометре СФ-16) при 378 нм и толщине слоя I см. Плотность исследуемого образца составляет 0,115, что по калибровочной кривой соответствует 0,046 мг ПЭО-1500 в данном объеме крови. Предлагаемый способ обеспечивает возможность определения полиэтиленоксида в малых объемах (до I мл) слож-г ных биологических материалов (например, кровь, стекловидное тело, соки растений, амниотическая жидкость и др.). Способ специфичен - положительную реакцию дают только вещества, содержащие оксиэтильные (CHjj--CH2-О) группы. Положительной реакции не дают спирты, альдегиды, кетоны. Способ высокочувствителен обеспечивает определение полиэтиленоксида в концентрациях 0,0025-0,01%. Предлагаемый способ позволяет повысить точность определения токсикои фармакокинетики и фармакодинамических свойств полиэтиленоксидов при

введении их в организм человека и животных и тем самьм способствовать разработке национальных доз препарата при его парентеральном введешш.

Формула изобретения

Способ количественного определения полиэтиленоксида путем инкубадщи пробыло с нитратпикратон с последующей экстракцией органическим растворителем и фотометрии полученного продукта, отличающийся тем, , с целью определения полиэтиленоксида в is

биологических жидкостях, к пробе перёд инкубацией последовательно добавляют хлорид бария, 1-2,5%-ного раствора гидроокиси бария, 5-6%-кого раствора сульфата цинка, образовавшийся осадок удаляют, а супернатант обрабатьшают 10-20%-ным раствором сульфата меди, l2-25Z-Hbw гидроокиси калия, затем смесь инкубируют 15-20 мин. при первчевмвании и полученный осадок удалюот.

Источники И1|формации, принятые во внимание при экспертизе

I. Hyly trleste AnaJyt. 1976, V. 101, p. 198-200.