Штамм дрожжей CaUDIDa маLтоSа - продуцент 4,14-диметилэргоста-8,24(28)-диен-3 @ -ола Советский патент 1991 года по МПК C12N1/16 C12P33/00 

Изобретение относится к микробиологическому производству и представляет собой новый штамм дрожжей C.maltosa, накапливающий 4,14-диметилэрогоста- 8,24(28)-диен-3 р -ол (4,14-диметилфекосте- рин), который может найти применение в качестве стандарта для хроматографии сте- ринов в научно-исследовательских работах, а также в косметической промышленности как заменитель ланостерина.

Целью изобретения является получение нового штамма дрожжей Candida maltosa ВКПМУ-827 продуцента 4,14-диметилэрго- ста-8,24(28)-диен-3 .

Описываемый C.maltosa ВКПМ У-827, происходит от штамма C.maltosa ВКПМ У- 241 и является мутантом, полученным под действием 6-М-гидроксиламинопурина (ГАП) и проявляющим более высокий уровень устойчивости по сравнению с исходным штаммом C.maltosa ВСБ-569.

Обработку клеток исходного штамма C.maltosa ВКПМ У-241 ГАП осуществляют на

плотной среде УАРД. С этой целью чашки Петри с агаризованной средой УАРД засевают исходной культурой с концентрацией 10 - 10 кл/мл. В центр чашки помещают диск фильтровальной бумаги, на которой наносят 3 мкл раствора мутагена в диметил- сульфоксиде (концентрация раствора 2 мг/мл). Чашки инкубируют 3 сут при 28 С и переносят методом реплик на среду с нистатином. Через 3 сут вокруг зоны действия мутагена вырастают нистатинустойчивые клоны, которые пересекают на среду с УАРД и повторно проверяют на устойчивость к нистатину. Далее из нистатинустойчивых штаммов выделяют стериновые фракции и анализируют их физико-химическими методами. Среди прочих мутантов был выделен один штамм, накапливающий значительное количество 4,14-диметилфекостерина.

Штамм Candida maltosa - продуцент 4,14-диметилэргоста-8,24(28)-диен-3 $ -ола депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов институ

Ј

О 00

Јь

со

00

та ВНИИГенетика, коллекционный номер У-827.

Штамм имеет следующие морфолого- культуральные и физиалого-биохимические характеристики.

Рост культуры на трех агаризованных стандартных средах:

а)среда УАРД. Величина клеток двухсуточной культуры (3,5 - 4,0)х(4,0 - 4,5) мкм. Диаметр колонии 15-суточной культуры 1,1 см. Через месяц культура формирует кольцо, Штрих светло-кремовый, выпуклый, пастообразный, гладкий с ризоидным краем. Пигмент в среду не выделяет;

б)среда сусло-агар. Величина клеток двухсуточной культуры (3,5 - 3,8)х(4,0 - 4,5) мкм. Диаметр колонии 15-суточной культуры 0,8 см. Штрих светло-кремовый, выпуклый, пастообразный, гладкий с резоидным краем. Пигмент в среду не выделяет;

в)среда минимальная. Величина клеток двухсуточной культуры (3,5 - 3,8)х(4,5 - 4,5) мкм. Диаметр колонии 15-суточной культуры 0,8 см. Штрих розовый, выпуклый, пастообразный, гладкий с ризоидным краем. Пигмент в среду не выделяет.

В тонком слое сред УАРД и сусло-агар образует характерный псевдомицелий,

На среде Городковой и среде с ацетатом натрия спор не образует.

Оптимальные значения температуры выращивания 28,2°С, рН 4,5.

Штамм C.maltosa ЕЗ.КПМ У-827 усваивает глюкозу, галактозу, сахарозу, мальтозу, лактозу, ксилозу, углеводороды, а также спирты - этанол, глицерин.

Источником азотного питания штамма являются аммонийные соли и аминокислоты. Нитраты и нитриты не усваивает.

Имеет окислительный тип метаболизма. Углеводы, аминокислоты, липиды и углеводороды окисляет до ацетил-КоА и далее через цикл трикарбоноаых кислот до СОг и Н20.

Устойчив к полиеновому антибиотику нистатину при концентрации его в среде 45 мкг/мл.

Штамм является устойчивым к нистатину мутантом.

Штамм хранится в холодильнике при +4°С на косяках с агаризованной средой следующего состава, г (на 1 л воды): агар- агар 20; пептон 20; дрожжевой экстракт 5: глюкоза 20. Срок пересева 1 - 2 раза в год. Штамм также может храниться в лиофиль- но-высушенном состоянии в запаянных ампулах на носителе Фаиб.

П р и м е р 1. Культивирование штамма C.maltosa,BKnM У-827 на среде УАРД состава (г/л): глюкоза 20; пептон 20; дрожжевой экстракт 5.

Культивирование дрожжей проводят в колбах Эрленмейера в 200 мл среды на ка- чалке 200 об/мин при температуре 28,2°С. Биомассу отделяют центрифугированием. С 1 л среды получено 12,2 - 0,2 г биомассы Выделение и анализ стериновой фракции проводят способом Бревина и Двадса в мо- дификации Вудса. Получают 11,47 - 1,5 мг стеринов, из них 6,88- 1,2-мг4,14-диметил- фекостерина (60%). Эргостерин, являющийся примесью, отделяют двойной перекристаллизацией в ацетоне. Пример 2. Культивирование штамма

с C.maltosa ВКПМ У-827 на среде с углеводородами нефти (г/л):

н-парафины1%

(NH4)2S043,5%

NHUH2P040,8

,5

MgS04 0,25

FeS04.7H200,015

ZnSCM.7H200,015

MnSCM.SHaO0,015

NaCI0,0063

при рН 5,5.

Условия культивирования те же, что в примере 1. Выделение и анализ стеринов проводят аналогичным методом, С 1 л среды получают 9,5 - 0,2 г биомассы. Выделяют 9,68 - 1.5 мг стеринов. Количество 4,15-ди- метилфекостерина составляет 5,81 - 1,2 мг (60%).

Достоинством предлагаемого штамма является то, что он способен усваивать н-парафины.

Штамм У-827 предлагается использовать в качестве продуцента 4,14-диметилэргоста- 8,24(28}-диен-3 /J -ола (4,14-диметилфекосте- рина), который может быть использован в качестве стандарта для хроматографии, а также как заменитель ланостерина в косметической промышленности.

Из нижеследующей таблицы видно, что в отличие от исходного штамма, содержащего преимущественно эргостерин, полученный штамм C.maltosa ВКПМ У-827 накапливает значительное количество метилированных стеринов.

Состав стериновых фракций исходного и мутантного штаммов C.maltosa приведен в таблице.

Формула изобретения Штамм дрожжей Candida maltosa ВКПМ

У-827 - продуцент 4; 14-дим етилэргоста-8,24 (28}-диен-3/ -ола.

Изобретение относится к микробиологическому синтезу стеринов, в частности новому их продуценту. Цель изобретения - получение нового штамма дрожжей Candida maltosa ВКПМ У-827 - продуцента 4,14-ди- метилэргоста-8,24(28)-диен-3 -ола. Получен штамм дрожжей Candida maltosa, накапливающий 4,14-диметилэргоста- 8,24(28}-диен-3 /б-ол и способный расти на непищевом сырье. Выход продуцируемого стерина 60%. 1 табл.