Способ культивирования клеток биообъектов Советский патент 1991 года по МПК C12N1/20 C12N5/00 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к процессам культивирования микроорганизмов и культур клеток животных.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта за счет снижения травмирующего действия на клетки.

Способ осуществляют следующим образом.

Предварительно насыщенный стимулирующим газом перфторуглерод подают сверху вниз в реакционную зону и устанавливают в ней скорость течения перфторугле- рода в диапазоне 0,10 -0,25м/с, после чего однократно в начале процесса в обьекте реакционной зоны осуществляют капельное диспергирование культуральной жидкости в поток перфторуглерода. При этом в течение процесса культивирования в циркуляционном режиме за пределами реакционной зоныпроизводятрегенерацию

перфторуглерода и возврат отрегенериро- ванного перфторуглерода сверху вниз в реакционную зону, а по окончании процесса прекращают циркуляцию перфторуглерода через реакционную зону и после гравитационного расслоения культуральной жидкости и перфторуглерода поочередно осуществляют их отвод в коллектор фракций.

Пример. Культивируют клетки млекопитающих ВНК-21 в питательной среде (культуральной жидкости) на основе сернокислотного гидролизата казеина с добавками солей, витаминов, глюкозы, сыворотки крови крупного рогатого скота и четырех недостающих аминокислот (глутамина, цис- тина, триптофана, аргинина). Процесс культивирования ведут при 36 t 0,5°C в течение 72 ч, стимулирующий газ - кислород, а инги- бирующий газ-диоксид углерода. В качестве перфторуглерода используют перфтордекалин.

Ё

О 00 N СО СО (Л

Основные параметры, начальные и конечные характеристики пяти процессов культивирования приведены в табл.1.

П р и м е р 2. Культивируют клубеньковые бактерии рода Rhlzoblum для получения препарата Нитрагин в питательной среде (культуральной жидкости) на основе мелассы, кукурузного экстракта, минеральных солей (NaHC03,(NH4)2SO4, itfgSCM, K2HP04. соли железа, молибдена и др).

Процесс культивирования ведут при 28 - 30°С в течение 66 - 70ч, стимулирующий газ - кислород, а ингибирующий газ - диоксид углерода. В качестве перфторуглерода используют перфторметилдиметилцикло- гексан.

Основные параметры, начальные и конечные характеристики пяти процессов культивирования приведены в табл.2.

Сравнение данных табл. 1 и 2 показывает, что максимальный выход целевого продукта процесса культивирования (конечная концентрация и процент жизнеспособных микроорганизмов по окончании процесса)

0

5

0

5

обеспечивается оптимальными диапазонами скоростей перфторуглерода в реакционной зоне и диаметром капель культуральной жидкости: 0,10 0,25 м/с и 1 мм d 5 мм.

Формула изобретения Способ культивирования клеток био- обьектов путем подачи насыщенного газом перфторуглерода сверху вниз в реакционную зону, заполненную культуральной жидкостью с последующим, отводом перфторуглерода из нижнейчасти реакцией ной зоны, его регенерацией и возвратом сверху вниз в (реакционную зону.о т л ича ю- щ и и с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта за счет снижения травмирующего действия на клетки, перф- торуглерод подают со скоростью 0,1 - 0,25 м/с, в реакционной зоне осуществляют в начале процесса однократное капельное диспергирование культуральной жидкости в поток перфторуглерода, а регенерации подвергают весь объем отводимого перфоторуг- лерода.

Таблица

Таблица2

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к процессам культивирования микроорганизмов и культур клеток животных. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта за счет снижения травмирующего действия на клетки. Насыщенный газом перфторуглерод подают сверху вниз в реакционную зону со скоростью 0,1 - 0,25 м/с. В реакционной зо не осуществляют капельное диспергирование культуральной жидкости в поток перфторуглерода, при этом диспергирование проводят однократно в начале процесса. Скапливающийся в нижней части реакционной зоны перфторуглерод отводят на регенерацию и вновь вводят в реакционную зону сверху вниз. Процент жизнеспособных клеток 99,4 - 99,7. 2 табл.