Способ определения скорости образования костной ткани Советский патент 1991 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии и ортопедии.

Цель повыпение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Животному внутривенно дважды вводят тетрациклин гидрохлорид в дозе 20 мг/кг веса животного с интерва- лом 10 дней. Через 3 дня после второй инъекции извлекают кость и выпиливают из нее поперечный срез толщиной 2 мм.

Образец фиксируют 1 сутки в 60%- ном спирте. Образец инкубируют в 5%-ном растворе основного фуксина в 60%-ном спирте в течение 1,0-1,5 ч, затем обезвоживают в батарее спиртов восходящей концентрации (70%,

90% и 3 смены абсолютного спирта по 24 ч в каждой смене).

Образец заключают в метилметакри- лат, проводят через следующие смены по 24-ч в каждой: 1/2 абсолютный спирт - 1/2 стабилизированный метил- метакрилат (мономер): три смены стабилизированного метилметакрилата (мономера): предполимеризованный метилметакрилат:свежий предполимеризованный метилметакрилат в форме для затвердевания. В этой среде образец помещают на 2-3 сут в термостат при температуре 37°С, располагают в цент-, ре будущего блока в вертикальном положении, на две формы, исследуемой стороной вниз.

Готовый блок обтачивают, придавая ему форму цилиндра диаметром

о: ос

4

о

5-7 см и высотой 1 см. Изучаемую сторону блока шлифуют на шлифовальном круге для выделения поверхности шлифа и получения параллельности поверхнос- тей блока. Параллельность поверхностен констролируют путем измерения толщины блока в трех равноудаленных точках у его краев.

Поверхность кости полируют па фотобумаге до исчезновения царапин, Микр оскопируют поверхность кости под флюоресцентным микроскопом с возбуж- даюцим фильтром (максимум пропускания в диапазоне 420-460 нм) и барьер- ным фильтром (максимум пропускания 520 нм) .

При увеличении микроскопа бОх фотографируют все участки коечной ткани, заключенные между двумя полос- ками маркера, и определяют их плгщаль путем накладывания сетки и подсчета квадратов, приходящихся на эту копь. Квадраты, частично занятые , считают как 0,5 кв&драта.

При увеличении микроскопа 10х с помощью сетки, встроенной в окуляр iirH наложенной на поверхность образ- iii, определяют общую площадь гостной ткани шлифа путем подсчета квад- ратов, приходящихся на кость. Квадраты, частично занятые костью, считают как 0,5 квадрата.

Ипнфуют, контролируя параллельност поверхностей, и .штем полируют поверхность блока, с тем чтобы получить последующий шлиф кости, расположенный на расстоянии 150-200 мкм от предыдущего .

Аналогичным способом исследуют заданное количество серийных поверхностей (заданный объем костной тка-- ни) .

Суммируют площади новообразованной кости всех шлифов.

Суммируют площади костной ткани всех шлифов.

Скорость образования костной ткани определяют из отношения полученных показателей.

Пример 1. Животному внутривенно вводят тетрациклин гидрохлорид из расчета 20 мг/кг веса. Через 10 сут повторно вводят такую же дозу гетра- .циклина гидрохлорида. Через 3 сут извлекают поперечный срез середины диафиза правой малой берцовой кости толщиной 2 мм и фиксируют его в спирте в течение CVTOK Да

t

5

0 5

0

Q

5

-0

5

5

лее инкубируют его в 5%-ном растворе основного фуксина в 60%-ном спирте в течение часа и заключают в метилмет- акрилат. Для этого образец последовательно проводят через следующие среды: 70%-ный спирт, 90%-ный спирт, три смены абсолютного спирта, 1/2 абсолютного спирта - 1/2 стабилизированного метилметакрилата (мономера). три i смены стабилизированного метилметакрилата (мономера), предполимериэо- вапный метилметакрилат, свежий пред- полимеризованный метилметакрилат в форме, соответствующей будущему блоку. Р каждой смене перед окончательным помещением в форму для затвердения образец находится в течение суток. Затвердевание происходит в течение 2-3 сут в термостате при 37 С, После этого затвердевший блок извлекают из формы, обтачивают его для придания формы цилиндра диаметром 5-6 см и высотой 1 см. Образец располагается в середине блока, причем его изучаемая поверхность примыкает к одной из поверхностей блока. Эту поверхность блока шлифуют на шлифовальном круге е для получения ее параллельности с противоположной поверхностью и выделения костной поверхности. Параллельность поверхностей контролируется измерением толщины блока в трех равноудаленных точках у его краев. После стого полируют костную поверхность на фотобумаге до исчезновения цара- гин и проводят микроскопию костной говерхности под флюоресцентным микроскопом при падающем освещении. При зтом фотографируют все участки кости, заключенные между полосками маркера, три увеличении микроскопа 60х. На фотографиях при увеличении 240х определяется площадь кости, заключенной между полосками маркера, путем наложения сетки и подсчета квадратов сет- и, приходящихся на нее. Площадь но- iообрззованной кости данного шлифа составляет 0,22 мм2. При микроскопии три увеличении микроскопа 10х с помощью сетки, встроенной в окуляр, определяют площадь костной ткани путем подсчета квадратов сетки, приходящих с я на кость. Площадь кости составляет 7,41 мм2.

Далее шлифуют и полируют поверх- i ость блока, с тем чтобы тпучит еле дующий шлиф когти, расположенный на расстоянии 150 мкм от предыдущего. По

516

лученный шлиф исследуют как списано вьше. Площадь новообразованной кости в нем составляет 0,27 мм2, а общая площадь кости - 7,50 мм2. Аналогичным спогоо м получают и исследуют еще 18 илифов проходя таким образом 1 мм длины кости.

Суммарная площадь костной ткани, образованной за период между введе-, ниями маркера во всех шлифах, составила 5,41 мм2. Суммарная площадь костной ткани во всех шлифах - 150,01 мм

Скорость образования костной ткани определяют путем нахождения отноше ния между полученными показателями (она составила 0,036).

Пример 2. Животному внутривенно вводят тетрациклин гидрохлорид из расчета 20 мг/кг веса. Чзрез 10 сут повторно вводят такую же дозу тетрациклина гидрохлорида. Через 3 сут извлекают поперечный срез середины диафиза правой малой берцовой кости толщиной 2 мм, фиксируют его в 60%-ном спирте в течение суток, инкубируют в 5%-ном растворе основного фуксина в 60%-ном спирте в течение 1,5 ч и заключают в меттшметакри- лат. Дистальную поверхность среза поэтапно шлифуют. Поверхности шлифов изучают с помощью флюоресцентного микроскопа. Расстояние между соседними шлифани составляет 200 мкм. Всего исследуют 5 шлифол, что соответствует толщине среза кости 1 мм. При микроскопии каждого шлифа фотографируют костную ткань, заключенную между двумя полосками маркера (т.е. кость, сформированную за период меж- ду введениями маркера). Площадь сформированной кости определяют на фотографиях с помощью сетки. Кроме этого, для каждого шлифа при малом увеличении микроскопа с помощью сетки, встро

46

енно и окуляр, определяют площадь костной ткани. Площадь костной ткани равна разности общей площади среза кости и площади костно-мозговой полости.

Суммарная площадь образованной за 10 дней кости для изученных шлифов составила 1,3 мм2, а суммарная площадь костной ткани - 37,3 мм2. Ско- i

1,3 мм2 рость костеобразования: -%- 2

ММ

0,035, или 3,5%. Таким образом, кость, сформированная за 100 дней составляет 3,5% в обцем объеме кости.

Применение способа позволяет повысить точность определения скорости образования костной ткани по сравнению с прототипом за счет оценки объемной скорости образования кости.

Формула изобретения

Способ определения скорости образования костной ткани, включающий введение экспериментальному животному маркера и оценку его отложения, о т- личающийся тем, что, с целью повышения точности способа, образец констной ткани инкубируют в течение 1,0-1,5 ч в 5%-ном растворе основного фуксина в 60%-ном этиловом спирте, готовят плифы серийно через 150-200 мкм, определяют суммарную площадь костной ткани, образованной за период между введениями маркера во всех шлифах, определяют суммарную пло- цадь костной ткани во всех шлифах, находят отношение полученных показателей и определяют скорость образования костной ткани.

Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии и ортопедии. Цель - повышение точности способа. С этой целью животному вводят костный маркер, образец костной ткани экспериментального животного инкубируют в течение 1-1,5 ч в 5%-ном растворе осчовного фуксина в 60%-ном этиловом спирте. Затем готовят серийно срезы через 150-200 мкм. После этого определяют суммарную площадь костной ткани, образованной за период между введениями маркера во всех шлифах, определяют суммарную площадь костной ткани во всех шлифах. Затем находят отношение полученных показателей и определяют скорость образования костной ткани. Применение способа позволяет повысить точность определения скорости образования костной ткани по сравнению с прототипом за счет оценки объемной скорости образования кости. Ј (Г.