СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПИРОГЕНАЛА Советский патент 1965 года по МПК C12P39/00 

Изобретение относится к способам получения пирогенала, используемого в качестве пирогенного препарата. Сущность предлагаемого способа заключается в том, что микробную массу культур Sal. typhose и Ps. aeruginosa гидролизуют, надосадочную жидкость отделяют и упаривают с последующим многократным переосаждением целевого продукта органическим растворителем. Для выращивания культур в реакторе отбирают гладкие формы колоний, крупные, серые, не образующие пигмента. Посевной материал готовят в матрицах на мясопептонном агаре. Культуру из чашек пересеивают в пробирки, через двое суток смывают водой и засеивают матрицы. Реактор засеивают двухсуточной культурой. Выращивание проводят нри 37°С, постоянном перемешивании и аэрации в течение 40-42 час. . Полученную микробную массу суспендируют в дистиллированной воде из расчета 0,5 л воды на 10 г сухой массы и доводят рН среды до 7,8-8,0 добавлением 2 н. щелочи. К смеси добавляют 0,025 г фермента и проводят гидролиз в бутыли емкостью 10 .л в течение 5 суток. Для предохранения смеси от прорастания добавляют 30-40 мл толуола. Во время гидролиза рН среды поддерживают на исходном уровне добавлением щелочи. Через 2,5 суток добавляют еще 0,025 г фермента. По окончании гидролиза осадок отделяют от гидролизата сепарированием или центрифугированием. Гидролизат упаривают в вакууме при 45- 50°С до /6 первоначального объема. Концентрат осветляют центрифугированием и при энергичном перемещивании вливают в десять объемов 96-градусного этанола, содержащего 0,5а/о ацетата натрия. Выпавший осадок после 18-20 час отстаивания отделяют центрифугированием, четыре - пять раз растворяют в небольщих порциях (по 20 мл) нагретой до кипения воды, каждый раз отделяя раствор центрифугированием. Нерастворивщийся осадок отбрасывают, а водные растворы, соединенные вместе, вливают при энергичном перемещивании в щесть объемов 950/о-ного фенола, нагретого до GO-65°С. Выпавший осадок через 18-20 час отделяют центрифугированием и вновь несколько раз обрабатывают горячей водой. Соединенные водные вытяжки вливают в шесть объемов 95э/о-ного фенола при 60-65°С. Выпавший осадок отделяют центрифугированием, многократно обрабатывают нагретой до кипения водой и диализуют против водопроводной воды до полного удаления фенола. После дополнительного диализа против дистиллированной воды в течение суток диализат 3 центрифугируют. Осадок отбрасывают, а активное вещество выделяют вливанием надосадочной жидкости в десять объемов 96-градусного этанола, содержащего 0,5о/о ацетата натрия. Выпавший пирогенал отделяют центрифугированием, промывают спиртом, ацетоком, эфиром и высушивают в вакуум-эксикагоре. 4 Предмет изобретения Способ получения пирогенала, отличающийся тем, что микробную массу культур Sal. typhose и Ps. aeruginosa гидролизуют, надосадочную жидкость отделяют и упаривают с последующим многократным переосаждением целевого продукта органическим растворителем.