Способ получения растений-регенерантов ячменя, устойчивых к гельминтоспориозу Советский патент 1991 года по МПК A01H4/00 A01H1/04 

сл

с

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии и может быть использовано в селекционной практике при создании сортов злаковых культур, устойчивых к гельминтоспориоэу. Целью зобрете- ния является повышение устойчивости растений-регенерантов к патогену. Способ состоит в том, что получают регенеранты из каллуса, выращиваемого на питательной среде Мурасиге-Скуга в присутствии селективного агента-токсина гриба H.Sativum. 3 табл.

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии и может быть использовано в селекционной практике при создании устойчивых к фитопатогенам грибов - возбудителей болезней сортов злаковых культур, в частности ячменя.

Целью изобретения является повышение устойчивости растений-регенерантов к патогену.

Способ предусматривает выращивание каллусной ткани на среде Мурасиге и Скуга, содержащей селективный агент, с последующим получением регенерантов, при этом в качестве селективного агента используют токсин гриба Helmintosporlum satlvum.

Способ осуществляется следующим образом.

В качестве эксплантатов, которые высаживают на каллусогенную среду Мурасиге и Скуга в пробирки с различными концентрациями простерилизоваиного при помощи бактериального фильтра токсинов гриба Н.satlvum, используют незрелые зародыши ярового ячменя сортов Добрый и Дина. Перед высадкой эксплантаты стерилизовали в 5% раствора хлорамина 15 мин. Эксплантаты вносят в среду № 1 с токсином гриба H.sativum следующего состава: Маточный раствор № 1, г: NH4N038,25

КМОз9,5

MgS04 -7Н201,85

MnS04 -5Н200,12

Zn4S04 -4Н200,043

CuSO4 -5H200,000125

Доводят до 500 мл дистиллированной водой, откуда берут 100 мл. Маточный раствор Nfe 2, г: КН2ОР040,85

НзВОз0,031

4 О

Ю

О

KJ. 0,00415

Na2Mo04 2H20 0,00125 (растворяют отдельно в 10 мл подогретой НаО и берут 1 мл/л)

бНаО 0,000125 (растворяют отдельно в 100 мл, откуда берут 1 мл/л).

Доводят до 500 мл дистиллированной водой и берут 100 мл. Витамины, г:

Глицин0,07

Витамин Bi0,005

Витамин Be0,005

Витамин РР0,005

Растворяют в 100 мл дистиллированной H2U, откуда берут 10 мл.

2,4 Дихлорфенокеиуксусная кислота0,002 г

Хелат железа10 мл

Сахароза25 г

Аг.ар7 г

,332 г

Все компоненты смешивают и доводят до объема 1 л дистиллированной водой.

Образовавшийся каллус пересаживают на среду № 2 такого же состава, но без токсина. Затем культивирование выжившего каллуса ведут на органоченной среде № 3 следующего состава:

Раствор № 1100 мл

Раствор № 2100 мл

Хелат железа10мл

Витамины10мл

Гидролизат дрожжевой1,0 г

CaCi20,332 г

ИУК (индолилуксусная кислота)0,0005 г Кинетин0,01 г Гиберелловая кислота 0,05 г Сахароза15 г Агар7 г и доводят до 1 л дистиллированной Н20.

Эксплантаты культивируют на ср едах № 1 и 2 при освещенности 5-6 тыс. лк, при Т 26°С и 16-часовом фотопериоде, а на среде № 3 при Т 15 + 17°С, освещенности 10-15 тыс; лк, при фотопериоде 16 ч в течение 25-30 дней на каждой среде.

Полученные регенеранты в фазе 2-3 листьев высаживают в горшки со стерильным песком, затем в почвосмесь: дерновая земля - песок - торф 1:1:1 м устанавливают в

вегетационную камеру (Т 2-4°С) на 56-60 дней.

После яровизации и депонирования растений-регенерантов семена от них испытывают на устойчивость к гельминтоспори- озу.

П р и м е р 1. Выборку доз для введения токсина в 1 каллусогенную селективную среду определяют эмпирически. Для этого

первоначально устанавливают .процент ин- гибирования корней однодневных проростков семян ячменя токсином гриба (табл. 1). Исходя из концентрации, которая инги- бирует не менее 30% роста центрального

корня, подбирают дозы для введения в се--- лективную каллусогенную среду. Дозы подбирают эмперически примерно в 20-25 раз меньше найденной на проростках. Регене- рационная способность каллусов ячменя приведена в табл. 2.

П р и м е р 2, Полученные из выживших на селективной среде с токсином гриба каллусов регенеранты после выращивания на инфекционном фоне дают урожайность по сравнению с контролем в 1,6 раза выше.

Использование предлагаемого способа получения растений-регенерантов ячменя, устойчивых к токсину гриба H.sativum, обеспечивает по сравнению с известным способом следующие преимущества:

применение в качестве селективного фактора токсина гриба более экономично, он не содержит сопутствующих примесей, воздействие которых на каллус проявляется при использовании культурального фильтрата;

введение в питательную среду Мураси- га и Скуга определенных доз токсина гриба позволяет вести отбор регенерантов из минимального количества выживших каллусов.

Формула изобретения Способ получения растений-регенерантов ячменя, устойчивых к гельминтоспорио- зу, включающий выращивание каллусной

ткани на среде Мурасиге-Скуга в присутствии селективного агента с последующим получением регенерантов, отличающийся тем, что, с целью повышения устойчивости растений-регенерантов к патогену, в

качестве селективного агента используют токсин гриба Helmintosporium sativum.

Таблица 1

Воздействия фитотоксинов гриба H.sativum на длину корней однодневных проростков ячменя

Таблица 2 Регенерацйонная способность сортообразцов ячменя на селективной среде с токсином

Таблица 3

Показатели продуктивности при выращивании на инфекционном фоне семян, полученных от устойчивых к фитотоксинам гриба Н, sattvum растений-регенерантов