Способ дифференциальной диагностики хронического активного гепатита и хронического персистирующего гипатита Советский патент 1991 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к гепатологии

Цель изобретения - повышение точности способа

Способ осуществляют следующим образом

У больного с предполагаемым хронк- еск лм гепатитом в стадии обострения утром нзтошак т гиложении лежа осуществляют забор венозной крови в количестве 10 20мл Затем определяют показателе хоагулогрэммы, уровни билирубина грансамин&з, щелочной фосфатазы, гэмма-глутамил грансп птидазы, общего белка и его фракций, иммуноглобулинов Т- и В-пимфоцитов крови осадочные пробы, изучают клинический анализ крови и при

их изменении относительно нор Н1 rnjri ii- cnipvoT хосчическнй гепзг L стад к oboС1 Ов -ИЯ

Послс того допоп1-1И1 nsnO измерч JT ypOLP b 1|5оопе тина с плазме чрог.- по известной М1тодмке, например иммунофе л- Mehih-iM способом.

С О1 мл плазмы, полученьим из ном рочи (свежей или хранившейся не LO- лее трех месяцев в замороженном состоянии при температ ре-20иС), оззморахивают пои чОм-чтной темпера /ре & течение 30 мич 1атем плазму ра:-чо/зчт в 1000 раз дня чего вначале к 0,99 мл 0,85%-i.oir раствора хлористого натрия добавляют 0,01 мл плазмы, тщательно перемешивают. После этого к 0,1 мл полученного раствора добавляют 0,9 мл ФСБР с твин-20.

Затем готовят материал для калибровки Отрицательный контроль, Кроме того, во время размораживания плазмы готовят растворы конъюгата, отмывающий, субстратную смесь согласно инструкции.

Прилагаемые к тест-системе планшеты предварительно тщательно ополаскивают сильной струей водопроводной воды, после чего лунки заполняют на 1-2 мин отмывающим раствором, затем вновь промывают проточной водой. .Процедуру повторяют три раза.,

Затем в лунке А1 и А2 вносят Отрицательный контроль, а в лунки 81, В2, С1, С2 и т.д. - соответственно 6, 5-е и т.д. разведения материала для построения калибровочной кривой. Исследуемые образцы вносят в оставшиеся лунки - по 0,2 мл каждого образца в две лунки горизонтального ряда,

После внесения исследуемых образцов в планшет его помещают в термостат на 1 ч при 36° ±1.

Затем проводят первую отмывку планшета согласно указанной выше схеме, также троекратно. После промывки, используя многоканальную автоматическую пипетку, вносят по 0,2 мл конъюгата во все лунки планшета и ставят его на повторное прогревание в термостат на 1 ч при той же температуре. Вторую промывку планшетов проводят аналогично первой.

Субстратную смесь (по 0,2 мл в кажд°ую лунку планшета) быстро вносят, используя многоканальную автоматическую пипетку.

Затем планшет выдерживают при комнатной температуре в течение 10-15 мин, после чего быстро многоканальной автоматической пипеткой в каждую лунку планшета вносят по 50 мкл 50%-ной серной кислоты для остановки ферментативной реакции. После этого содержимое лунок перемешивают на автоматическом встряхивателе,

Учет результатов проводят на многоканальном спектрофотометре Tutertek Multiscan из комплекта оборудования для иммуноферментного анализа фирмы Flow (Великобритания) при длине волны 492 нм, Построение калибровочной криабй и определение концентрации ФН в исследуемых образцах плазмы проводят с использованием на IBMPC AT.

При снижении концентрации фибропектина в 1,15 раза и менее относительно нормы диагностируют хронический персистирующий гепатит, а в 1,65 раза и более - хронический активный гепатит.

В табл. 1 представлены результаты определения уровня фибропектина плазмы

крови у здоровых лиц, больных хроническими активным (ХАГ) и персистирующим (ХПГ) гепатитами.

Из табл. 1 видно, что при хроническом активном гепатите уровень фибропектина

плазмы крови существенно понижается в сравнении с таковым характерным для хронического персистирующего гепатита, что в принятых в интервалах его изменений (менее чем в 1,25 раза при хроническом персистирующем гепатите, чем более в 1,65 раза при хроническом активном гепатите) обеспечивает дифференциальную диагностику хронических активного и персистирующего гепатитов.

Примеры осуществления способа.

П р и м е р 1. Больной С., 30 лет, поступил в гастроэнтерологическое отделение с жалобой на чувство тяжести в правом подреберье, слабость, повышенную утомляемость. Считает себя больным в течение двух лет после перенесения острого вирусного гепатита В. При объективном осмотре отмечалась бледность кожных покровов. Со сто- роны органов грудной клетки - без

патологии. Печень в пределах нормы с ровным плотноэластичным безболезненным краем. Селезенка не увеличена. Лабораторные данные - анализ крови:эритроциты 4,3 10 /л, Нв 133 г/л, цветной показатель

(ЦП)Q,9; лейкоциты 4,5 109/л зоз-1%, п.ад. 2%, сегм. 67, лимф. 26, мон. 3; СОЭ 6 мм/г, тромбоциты 200 109/л, АСТ2.13 ммоль г/л, АЛТ 2,83 ммоль г/л; щелочная фосфатаза 30,3 е/л, билирубин 14,8 мкмоль/л. прямой

3,6 мкмоль/л, непрямой 11,2 мкмоль/л, про- тромбиновый индекс 83, время рекальцифи- кации 100, конц. фибропектина 2.44 г/л, фибриноген Б++, тромботест VI, ФАК 180; общий белок 72 г/л, альбумин 51,2%, глобулин ai 5,7%, 32 9,8%,/315 4%, у 17,9%; А/Г 1,5; IgA 3,2 г/л, IgM 1,8 г/л, IgG 15 г/л. Дополнительно у больного был определен уровень плазменного фибропектина, который составил 264 мкг/мл, что в 1,25 раза

ниже нормы. Данные инструментального обследования (эхосонография, гепатос- цинтиграфия) дополнительной информации не дали. Таким образом, в данном случае лабораторные данные не позволили дифференцировать ХПГ и ХАГ. Проведена пункционная биопсия печени. 8 результате морфологического исследования больному выставлен диагноз ХПГ,

что соответствует снижению уровня фибропектина в плазме.

П р и м е р 2. Больной Р., 38 лет, поступил в гастроэнтерологическое отделение с жалобами на слабость, чувство тяжесш в правом подреберье, повышенную утомляемость периодическую ломоту в суставах, повышение температуры тела до 37,7-37,8 градусов.

В анамнезе острый вирусный гегмтит 8 около 10 лет назад.

Объективно: бледность кожных покровов; суставы не изменены; сердце и легкие без особенностей; живот мягкий, при пальпации болезненный в правом подреберье; нижний край печени выступает на 4 см из- под края реберной дуги; поверхность печени гладкая, край закруглен, чувствителен при пальпации; селезенка у края реберной дуги чувстительна при пальпации.

Лабораторные данные - клинический анализ крови: эр4,1 х 10 г/л, Нв 142 г/л, ЦП 1,0;лейк. 6,5х 109/л,э-3%, п-4%.с-65%, л 22%, м. -6%, СОЭ - 21 мм/ч; тромб. 210х х 10 /л, АсАТ - 1,0 ммоль г/л. АлАТ 2,56 ммоль г/л., щелочная фосфатаза 87,5 е/л, билирубин общий 28.7 мкмоль/л, прямой 5,5 мкмоль/л,, протромбиновый индекс 79%, время рекальцмфикэции 100; фибриноген 3,5 г/л, фибриноген , тромботест Vi, ФАК 220; общий беле с 75 г/л; альбумин 48,7%, глобулин ai 5,3%, а2 6,6%, /3 12,7%, }31,4% А/Т коэф. С,96 IgA 2,4 г/л, IgM 2,1 г/л, IgG 16 5 г/л. Дополнительно у больного был определен уровень плазменного фибропектина. оторыи составил 201 мкг/мл, что в 1,65 рзза ниже показателя нормы, что соответствует уровню ФН при ХАГ. Инструментальные методы обследования (гепатосцинти рафия, зхосо- нос коп и я) не позволили провести дифференциальную диагностику между двумя морфологическими формами хронических гепатитов- ХПГ и ХАГ. Кроме того, была проведена пункционная биопсия печени. Микроскопическое из/ченке полученного биоптага позволило подтвердить диагноз ХАГ,

П р и м е р 3. Больной X,, 21 лет, поступил в гастроэнтерологическое отделение с жалобами на субфебрилитет, слабость, носовые кровотечения, аргералгии.6 лет назад перенес ОВГ В. Указанные жалобы беспокоят около полу ода. При обьектиз- ном осмотре: кожные покровы бледные,

со стороны органов грудной клетки - без особенностей, печень 1-2 см, с плотным ровным безболезненным краем; селезенка не увеличена. Лабораторные данные - анализ крови: эритроциты 3,82 1012/л, Нв 131 г/я, ЦП 1,0, л 5,8 109/л, баз.-1, э-3, п-2, с 45, л-42. м-7, СОЭ 20 мм/ч, тромбоциты 187 Win, ACT 1,2 ммоль г/л, АЛТ 1,3 ммсль г/л, щелочная фосфатаза 105,3 г/л,

билирубин оЬщгй 185 мкмоль/л, прямой 5,4 мкмоль/л. непрямой 13.1 мкмоль/л, протромбиновый индекс 92%, время рекаль- цификации 330, конц. фибриногена 3,55 г/л, фибриноген Б1, тромботест У ФАК

240; общий белок 66,2 г/л, альбумины 52,0%. глобулины ai 4%, 32 8%; ft 10,0%,y 26,0%;.А/Г 1.08. igA 2,8 г/л; IgM 3,1 г/л, IgG 24,5 г/л. Уровень фибропектина в плазме крови составил 183,3 мкг/мл, что в 1,8 раза

ниже нормы. На эхосонографии выявлено незначительное увеличение размеров печения и повышение ее акустической плотности. Таким образом, при невысокой лабораторной активности процесса уровень фибропектина свидетельствует о наличии у больного ХАГ. Произведена пункционная биопсия печени. Морфологические изменения соответствуют денному диагнозу.

Использование предложенного способа по сравнению с прототипом позволяет повысить точность диагностики снижает необходимое.ь проведения пункционной биппс -и течени.

а ,абл. 2 приводятся данные сравнения

ггпто и.-.з и предлагаемого способа по точности у больных хроническим персистирую- щгм (ХПГ и хроническим активным (ХАГ) гепа /тамм Точность контролировали по

данным пункционной биопсии печени.

со о о м у л а изобретения Способ дифференциальной диагностики хронического активного гепатита и хроничс-;к.ога персие тирующего гепатита клиникс-оиохимчческим гутем. о т л и ч а ю- щ и и с г тем, что, с целью повышения точности способа, дополнительно опреде- jr-iioT хочцонтрзиию фибропектина плззмы крови и при ее снижении в 1,25 раза и менее относительно кормы диагностируют /.рониис кчй пврсистирующий гепатит, а л р-1 снижении в 1,6 раза и более - хронический зюивный гепатит.

Таблица 1

Изобретение относится ч медицине, в част-юс|И к (долью изобрв ени - ччпяется повышение точности способа Для этого у больных с хроническим гепатитом определяют в ппазме концентрацию ф лбропектина методом твердофазно о мммуноферментного анализа. Для исследования достаточно 0,01 мл плазмы При снижении уровня с| ибропектмна в 1,25 рзх и менее относительно нормы диагностируют хронический персистирующий гепатит я при снижении в 1,65 раза и более - хронический активный Точность диагностики хроиическо.о пер систирующего гепатита увеличивается ча 33% а хронического -«ктивнот - на 29% по сравнению , прогот по Способ имеет гь.ую АС точное)Ь мто и - икциончг би /.1 2 таСп

Таблица 2