Способ определения инсулина в эритроцитах Советский патент 1991 года по МПК G01N33/534 

СП

С

Изобретение относится к клинической биохимии, а именно к количественному определению инсулина, локализованного на мембранах эритроцитов крови человека, и предназначено для использования в медицине. Цель изобретения - снижение трудоемкости и сокращение времени исследования. Способ заключается в отмывании эритроцитов крови физиологическим раствором с последующим добавлением 20%- ного раствора твин-20 в объемном соотношении 1:1, инкубированием его в течение 30-40 мин при 18-20°С. Далее осуществляют в полученном растворе радиоиммунологическое определение содержания инсулина. Положительный эффект способа обусловлен значительным снижением трудоемкости, а также сокращением времени исследования.

Изобретение относится к клинической биохимии, а именно к количественному определению инсулина, локализованного на мембранах эритроцитов крови человека, и предназначено для использования в медицине.

Цель изобретения - снижение трудоемкости и сокращение времени исследования.

Поставленная цель достигается тем, что после отмывания в физиологическом растворе эритроциты обрабатывают 20%-ным раствором твин-20 в объемном соотношении 1:1 в течение 30-40 мин при 18-20°С и в полученном растворе определяют содержание инсулина методом радиоиммунологического анализа,

Способ подтверждается следующими примерами.

Пример 1. Испытуемый А., м., 30 лет. Диагноз: практически здоров. Кровь в количестве 2,0 мл забирают из кубитальной вены и центрифугируют при 2000д в течение 15 мин. Плазму отбирают и к оставшейся эрит- роцитарной массе добавляют 10,0 мл физиологического раствора. Перемешивают, центрифугируют, удаляют супернатант и еще дважды отмывают клетки физиологическим раствором. К 0,2 мл эритроцитарной массы добавляют 0,2 мл 20%-ного раствора твин-20 и инкубируют 40 мин при 18-20°С, периодически встряхивая содержимое пробирки. Берут 0,1 мл полученного раствора и определяют в нем радиоиммунологическим методом содержание инсулина согласно инструкции, прилагаемой к наборам Содержание инсулина составило 538,9 ммоль/л.

VI

О ND СО

А

VJ

Положительный эффект способа подтверждается тем, что в предлагаемом способе по сравнению с прототипом более чем в два раза снижаются временные затраты и трудоемкость метода, за счет чего и дости- гается цель изобретения. Кроме того, предлагаемый способ позволяет проводить определение инсулина в эритроцитах в серии, состоящей из 100 проб, что дает воз- мо|жность использовать метод для проведения массовых обследований.

У одних и тех же пациентов проведено определение уровня инсулина в эритроцитах с помощью предлагаемого способа по сравнению с прототипом. При использова- нии предлагаемого способа уровень инсулина составил 116,44± 6,62 ммоль/л (п 10), по способу-прототипу - 58,73±1,58 ммоль/л (п 1iO). Следовательно, при использовании предлагаемого способа концентрации инсу- лина более чем в 2 раза выше, чем при применении прототипа, что указывает на более высокую точность предлагаемого способа. Это вполне объяснимо, так как при использовании твин-20 определяются все формы инсулина эритроцитов, в то время как в прототипе регистрируется только свободный инсулин эритроцитов человека.

Формула изобретения Способ определения инсулина в эритроцитах путем отмывания эритроцитарной массы физиологическим ра&твором с последующим количественным анализом, отличающийся тем, что, с целью снижения трудоемкости и сокращения времени исследования, к эритроцитарной массе добавляют 20%-ный раствор твин-20 в объемном соотношении 1:1, инкубируют 30-40 мин при 18-20°С и в полученном растворе производят радиоиммуннологическое определение содержания инсулина.