Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для направленного транспорта лекарств и диагностических препаратов при заболеваниях печени и желчных путей.
Цель изобретения - упрощение способа, а также увеличение содержания препарата в тенях и их устойчивости.
Цель достигается тем, что гипоосмоти- ческий гемолиз осуществляют в дистиллированной воде при 0°С при соотношении клетки и лизирующего раствора 1:7, затем осаждают эритроцитарные тени центрифугированием, недостаточную жидкость сливают, к осадку добавляют препарат, растворенный в охлажденной до 0°С дистиллированной воде из расчёта 1:6-1:7, и инкубируют в течение 15-20 мин при 4°С.
Способ осуществляют следующим образом.
Периферическую венозную кровь в ко- личестве.б мл помещают в пробирку с гепарином (25 ЕД/мл). После удаления плазмы крови эритроциты дважды отмывают физиологическим раствором хлористого натрия путем центрифугирования при 3000 об/мин в течение 5 мин при 4°С. К осадку эритроцитов добавляют семикратный объем охлажденной до 0°С дистиллированной воды и центрифугируют при 8000 об/мин в течение 25 мин при 4°С. Насадочную жидкость, в которой содержится гемоглобин, отсасывают, к полученным теням эритроцитов прилисл
па ют семикратный объем антибиотика или другого препарата, растворенного в охлажденной до 0°С дистиллированной воде. Взвесь инкубируют в течение 15-20 мин при 4°С. Затем добавляют 1/9 объема 9%-ного хлористого натрия для восстановления целостности мембраны эритроцитов и инкубируют в течение 30 мин при 37°С.
Время центрифугирования при 8000 об/мин 25 мин является оптимальным, так как именно через этот промежуток времени тени хорошо выпадают в осадок. Об этом судили по светлой окраске надоса- дочной-жидкости.
В способе осуществляют раздельное получение .эритроцитарных теней и разведение препарата в дистиллированной воде. Затем (после удаления надосздочной жидкости) выполняют инкубацию эритроцитарных теней в растворе препарата. Это предупреждает связывание перпэрата гемоглобином и повышает выход конечного продукта.
Разработанные для способа режимы инкубации и объемные соотношения позволяют также повысить выход конечного продукта, устойчивость эритроцитарных теней к десорбции препарата в кровеносном русле. Так, соотношение клетки и лизирующего раствора 1:6 и более, а также температура раствора ниже 0°С способствует значительному разрушению эритроцитарных мембран и потери ими транспортных свойств. Однако уменьшение соотношения клетки и лизирующего раствора приводит к большой задержке гемоглобина в тенях, что не желательно, так как гемоглобин.связывает препарат. Выбранное соотношение 1:7 является оптимальным и, как показывают результаты, исследований, допустимым, не приводит к значительному разрушению эритроцитарных теней. Они сохраняют транспортные свойства и устойчивость к десорбции препарата в кровеносном русле. Сопоставление эффективности различных режимов инкубации позволило установить, что его длительность не влияет существенно на выход конечного продукта. Так, при инкубации в течение 5 мин содержание антибиотика в тенях составило 11,2 ± 0,5 мкг/мл, в течение 15 мин - 12,4 ± 0,3 мкг/мл, 30 мин - 12,4 ±0,4 мкг/мл.
При добавлении препарата в лизирую- щий раствор (согласно известному способу) выход конечного продукта был минимальным. Так, процент включения канамицина при растворении его в лизирующем растворе составил 4,7 ±0,6, а при включении по предлагаемой методике- 12,4 ±0,3 мкг/мл, т.е. почти в 3 раза-больше. При включении
билигноста по известному способу в эритро- цитарныетени и введении последних в вену контрастирования желчных путей не происходило. Включение билигноста (50%) в тени
по предлагаемой методике позволяет хорошо контрастировать желчные пути. Причем метод позволяет в 3-4 раза снизить расход дозы билигноста. Так, при традиционном внутривенном способе введения билигноста для контрастирования тени желчного пу- зыря требуется ввести 20-30 мл 50%-ного билигноста, а при использовании предлагаемого способа достаточно в эритроцитар- ные тени включить 6-7 мл билигноста.
Таким образом, обнаружен эффект - контрастирование желчных путей при внутривенном введении 6-7 мл 50%-ного раствора билигноста, предварительного включенного в эритроцитарные тени. Традиционное
внутривенное введение 6-7 мл билигноста не вызывает контрастирования желчных путей и для этого требуется не менее 20 мл 50%-ного раствора билигноста.
Для изучения устойчивости эритроцитарных теней-носителей, полученных по предлагаемой методике, на возможную, десорбцию и выделение антибиотика из теней в кровеносном русле, проводили специальные исследования с гентамицином. Эритроцитарные тени доноров с включенным гентамицином,дважды отмывалигфизиологическим раствором хлористого натрия и затем инкубировали в аутологичной плазме при 37°С в течение 25 мин. Содержание
гентамицина в надосадочной жидкости после первого отмывания эритроцитарных теней составило 0,4 ± 0,03%, после второго отмывания физиологическим раствором - 0,04 ± 0,007%. В плазме крови после инкубации в ней эритроцитариых теней, содержание гентамицина равнялось 0,2 ±0,008%, т.е. было минимальным, Количество гентамицина в самих эритроцитарных тенях после их двухкратного отмывания и инкубации
в аутологичной плазме крови составило 26,3 ± ±0,1% против 3,1 ±0,3% в зритроцитарных тенях доноров контрольной группы, где содержание препарата определялось тотчас после одюкратного отмывания эритроцитарных теней. Изложенное свидетельствует о достаточной устойчивости эритроцитариых теней на десорбцию и выделение гентамицина из теней в кровеносном русле.
Устойчивость эритроцитарных теней и
возможность доставки препарата в печень была изучена в эксперименте на беспородных собаках, у которых оперативным путем моделировали острый холецистит. Животных разделили на две группы: основную и
контрольную. В контрольной группе собакам вводили канамицин (30 мг/кг) традиционным внутривенным способом один раз в день. В основной группе канамицин вводили в аналогичной дозе (30 мг/кг), но предва- рительно включенный в аутологичные эритроцитарныетени, которые затем вводили внутривенно также один раз в день. Через 24, 48 и через 72 ч после последнего введения антибиотика животных выводили из опыта, выполняли релапаротомию, визу альный осмотр внутренних органов, а также фармакокинетические исследования концентрации канамицина в ткани печени и сыворотке крови общеизвестным методом диффузии в агар, в качестве тест-микроба использовали Baccillus subtilis ATCC 6633.
Фармакокинетические исследования выявили значительные различия в концентрации канамици-на в ткани печени в зависи- мости от способа введения препарата (таблица ).
Из таблицы видно, что при направленном транспорте канамицина в эритроцитар- ныхтенях в печень вткани печени создается длительная терапевтическая Концентрация препарата в сравнении с традиционным внутривенным способом введения. Это указывает на эффективность предлагаемого способа, а также на возможность использо- вания и устойчивость эритроцит рных теней. При традиционном внутривенном
способе введения препарата он не определяется в ткани печени.
Способ позволяет повысить в 2,5-3 раза концентрацию препарата в конечном продукте (12,4 ± 0,3 против 4,7 ± 0,6 в прототипе), упростить включение препаратов в эритроцитарные тени .(применение на всех этапах способа дистиллированной воды, вместо требующих специальных реактивов и времени для приготовления, а также малодоступных для широкой клинической практики растворов триса и фосфатного буфера), а также сохранить устойчивость эритроци- тарных тканей в кровеносном русле и. создать длительные концентрации препарата в печени. Это доказано специальными фар- макокинетическими исследованиями. Формула изобретения Способ включения водорастворимого препарата в тени эритроцитов путем гипо- осмотического шока нативных эритроцитов и инкубации их в растворе препарата, о т л ичающийс я тем, что, с целью упрощения способа, а также увеличения содержания препарата в тенях и их устойчивости, гипо- осматический шок осуществляют охлажденной до 0°С дистиллированной водой при соотношении 1:7, а для инкубации используют отмытые тени эритроцитов и охлажденный до 0°С водный раствор препарата, причем инкубацию проводят при 4°С не менее 15 мин.
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
Способ рентгенологического исследования желчевыводящих путей | 1989 |
|
SU1717105A1 |
Способ лечения холецистита в эксперименте | 1990 |
|
SU1797895A1 |
Способ лечения гнойно-воспалительных заболеваний печени и желчных путей | 1988 |
|
SU1641350A1 |
Способ детоксикации организма | 1989 |
|
SU1811857A1 |
Способ контрастирования внепеченочных желчных путей | 1986 |
|
SU1461410A1 |
СПОСОБ СОЗДАНИЯ ДЕПО ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ В ОФТАЛЬМОЛОГИИ | 2004 |
|
RU2268689C1 |
Способ рентгенодиагностики заболеваний желчного пузыря у больных с илеостомой - резервуаром | 1990 |
|
SU1748789A1 |
Способ рентгенологического исследования органов гепатодуоденопанкреатической области | 1983 |
|
SU1156641A1 |
СПОСОБ ВКЛЮЧЕНИЯ В ЭРИТРОЦИТЫ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ КОМПОНЕНТОВ МЕТОДОМ ПРОТОЧНОГО ГИПООСМОТИЧЕСКОГО ДИАЛИЗА | 2021 |
|
RU2791817C1 |
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ БРОНХОЛЕГОЧНОГО АППАРАТА БАКТЕРИАЛЬНОЙ ЭТИОЛОГИИ | 2005 |
|
RU2293554C1 |
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для направленного транспорта лекарств и диагностических препаратов при заболеваниях печени и желчных путей. Цель изобретения - повышение эффективности включения лекарственных и диагностических препаратов в эритроцитарные тениносители и устойчивости к десорбции препарата в кровеносном русле. Цель достигается тем, что проводят гипоос- мотический гемолиз в дистиллированной воде при температуре 0° при соотношении клетки и лизирующего раствора 1:7, затем осаждают эритроцитарные тени центрифугированием, надосэдочную жидкость сливают, к .осадку добавляют препарат, растворенный в охлажденной до 0°С дистиллированной воде из расчета 1:6-1:7 и инкубируют в течение 15-20 мин при 4°С. Способ позволяет повысить в 2,5-3 раза концентрацию препарата в конечном продукте, упростить процедуру включения препаратов в эритроцитарные тени, сохранить устойчивость теней к десорбции в кровеносном русле и создать длительные концентрации препарата в печени и желчных путях. 1 табл.
Pharm | |||
Sher., 1983 | |||
V, 20, p | |||
Двухколейная подвесная дорога | 1919 |
|
SU151A1 |
Авторы
Даты
1992-03-15—Публикация
1989-11-30—Подача