Способ определения инсулина в эритроцитах Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к эндокринологии, и может быть использовано для сравнительного определения количест инсулина, связьшаемого эритроцитами крови человека и животньпс как в условиях физиологической нормы, при проведении различных нагрузок, так и при различной патологии эндокринной и других систем.

Цель изобретения - повьшение точности способа.

Пример 1. 1,5 мл крови здорового донора подвергли центрифуг гированию при 2000 об/мин в течение 10 мин. Отобрали плазму и слой лейкоцитов. Добавили к 0,6 мл оставшейся эоитоомассы 6 мл физиологическог раствора. Центрифугированием -отделили супернатант, повторно произвели отмьшание клеток физиологическим раствором. 0,5 мл эритроцитарной массы перенесли в физиологический раствор, содержащий этанол в соотношении физиологический раствор - клетки - этанол 1:1:0,025 (0,5 мл эритроцитов, 0,5 мл физиологического раствора, содержащего 0,025 мл этанола). При перемепшвании инкубируют клетки в течение 50 мин. Отделили эритроциты и отобрали 0,15 мл супернатанта. Супернатант подвергли элект1 офорезу в 7%-цом полиакрйламидном геле (рН геля 8,3; трис-глициновая буферная система рН 8,9; сила тока 4 мА на трубку. Электрофорез продолжался в течение 62 мин, до выхода бромфенолового синего из геля. Гель помещают на 60 мин в 1%-ный раствор красителя амидо-черного 10Б на 7%-ной уксусной кислоте, излишки красителя от- мьшают 7%-ной уксусной кислотой. После от оавания гель денситометри- руют на микрофотометре ИФО-450. Площадь пика инсулина составила 120 усл.ед..

П РИМ е р2 2,2 мл цельной крови здорового донора центрифугировали и отделили эритроцитарную массу К 0,9 мл эритромассы добавили 9 мл

физиологического раствора. Отделили клетки центрифугированием. Повторили отмьшание, добавив к 0,9 мл эритроцитов 9 мл физиологического раствора. О,7,мл эритроцитарной массы перенесли в физиологический раствор, содержащий этанол в соотношении ,02 (0,7 мл эритроцитов, 0,7 мл

физиологического раствора, содержащего 0,028 мл этанола). Инкубируют клетки в указанном растворе в течение 50 мин.Отделяют супернатант и подвергают его электрофорезу в полиакриламидном геле аналогично примеру 1 . После окрашивания и отмьшания геля проводят денситометрирование. Площадь пика инсулина составила 336 усл.ед.

П р и м е р 3. У больного сахарным диаб-етом взяли 1,6 мл крови. Провели отмывание эритроцитов физиологическим раствором аналогично указанному в примерах 1 и 2. Отобрали 0,5 мл отмытой эритроцитарной массы и подвергли выдерживанию в физиологическом растворе, содержащем этанол. Соотношение клетки - физиологический раствор - этанол 0,5 мл : : 0,5 мл : 0,025 мл. Время экспозиции составляло 60 мин. Отделили супернатант и 0,15 мл его подвергли электрофорезу. После окраски и обесцвечивания провели денситометрирование геля. Площадь пика инсулина составила 32 усл.ед.

Формула изобретения

Способ определения инсулина в эритроцитах путем их отмьшания и окрашивания, отличающий- с я тем, что, с целью повьш1ения

точности способа, взвесь эритроцитов физиологического раствора и этанола в соотношении 1:1:0,020-0,025 инкубируют в течение 50-60 мин, центрифугируют, супернатант подвергают

электрофорезу в полиакрйламидном геле, а содержание инсулина определяют денситометрически.

Изобретение относится к медицине, точнее к эндокринологии, предназначено для сравнения количества инсулина, связьшаемого эритроцитами крови человека и животных в условиях физиологической нормы и при различных нагрузках. Цель изобрете- . ния - повышение точности способа. Дпя этого пробу крови здорового донора центрифугируют при 2000 д 10 мин.Отбирают плазму и слой лейкоцитов .Добавляют к оставшейся эритроцитар- ной массе физраствор. Центрифугированием отделяют супернатант, повторно отмывают клетки физраствором. Часть эритромассы переносят в физ- . раствор с этанолом в соотношении физраствор - клетки - этанол :0,025. Перемешивая, клетки инкубируют 50 мин. Отделяют эритроциты и отбирают 0,15 мл супернатаита, подвергают его электрофорезу в 7%-ном полиакриламидном геле (рН геля 8,3; трис-глициновая буферная система рН сила тока 4 мА на трубку) 62 мин до выхода бромфенолового синего из геля, помещенного на 1 ч в 1%-ный р-р красителя амидо-черного 10Б на 7%-ной уксусной кислоте. После отмывания гель денситометрируют на микрофотометре ИФО-450. Подсчет пика инсулина составляет 32- .336 усл.ед. (Л

ВНИИПИ Заказ 865/40

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Тираж 847

Подписное