Способ контроля аллергенности живых гриппозных вакцин Советский патент 1992 года по МПК A61K39/145 

Изобретение относится к медицинской промышленности, биотехнологии, вакцин- . но-сывороточному производству и может быть использовано при производстве вакцинных препаратов на основе куриных змб- - рионов.. . .Известен способ оценки аллергизирую- щих свойств инактисированных гриппозных вакцин путем сенсибилизации морских свинок оазльбумином с последующим сведением им инахтиз ированной гриппозной :; вакцины (ИГВ). При содержании в образцах

ИГВ овальбумина в концентрации выше 5 мкг/мл у морских свинок возникает выраженная анафилактическая реакция при парентеральном воедении препарата.

Известен также способ определения аллергенных свойств сорбированных гриппозных вакцин, содержащих овальбумин. Суть изобретения состоит в .определении гомо- цитотроггных р ёйгин ой и х антител, которые выявляются у экспериментальных хсиоо- тных нэ 7-8 сут после.всёдения испытуемых препаратов.i

-

Последний способ является базовым.

Недостатком известных способов яоля- ется то, что они не i/.oryr быть применены для оценки зллерглзиругащ лх свойстп хи- ; гриппозных вакцин, посколькуссе ИГВ вводятся парентерально (подкожно или

-. внутрихожно). Все известные методы проверки аллергенностй ззщин являются чрезвычайно трудоемкими и длительными. - Существуют подходы по оценке аллер- гизации ИГВ по появлению антител к оваль- бумину у привитых экспериментальных животных или по появлению в сыворотках - таких животных мкмунсглобулинов Е - IgE, однако применяемые при этом методы являются сложными и длительными, что затрудняет определение качества ИГВ по алле ргенности. -- :

Цель изобретения - повышение точно- . сти и ускорение способа. ..-

Дли этого испытуемые вакцины вводят собакам, предварительно сенсибилизированным овальбумьшом, в.веде аэрозоля. При определенной пороговой концентра- ,: ции овэльбумина в препарате живых грип- . позных вакцин (ЖГВ) у собак не развивается приступа бронхоспазма. При содержании овальбумина в ЖГВ выше пороговой величины у собак развивается

спазм бронхов, что выражается в виде реак- затрудненного выдоха. Выбор зкспе- рймеНтзл ьного животного обусловлен тем, .что собаки не болеют гриппом. . П р и м е р 1. Оценка чувствительности

. собак к овзльбумину. ---: ; : Используют беспородных собак - самцов в возрасте 3-4 лет, весом 20-25 кг. Сён- : сибилизацию овзльбумином {препаратом НПО Олеине пятикратной кристаллизации) проводят по следующей схеме: начальная доза 4000 мкг на каждую собаку . подкожно в холку, две недели дозу

увеличивали на 400 мзсг до достижения 2000 мкг, т. е. 5 инъекций с интервалом в 2 недели. Затем вводят трижды подкожно еженедельно по 2000 , после чего собак используют в эксперименте. Для поддержания уровня сенсибилизации за две недели до проведения эксперимента собак сенсибилизируют, вводят 1 раз в неделю по 400 мкг овальбумина.

Эксперимент проводят следующим образом.

Собак наркотизируют введением внутривенно тпопентала натрия 1%-ного50-100 мл на собаку. По достижении наркоза собак интубируют. с помощью у-образной трубки подключают к ультраззуковому ингалятору UZJ-50 (ГДР) и пнеп етахофзфу с трубой А Флейша (Швейцария) объемом 1 л/с: к

пневмо тахографу подключают самописец, на котором регистрируют показатели функции дыхания. Показателем нарушения бронхиальной проходимости является сииженив объемной скорости потока выдоха за 1 с более, чем 20-25% по сравнению с исходной. Для исключения неспецифических воздействий на бронхиальную проходимость и индивидуализацию этого показателя у собак записывают исходные показатели проходимости бронхов. Затем проводят ингаляцию 5 мл физиологического раствора и регистрируют с течение 15 мин, показатели проходимости бронхов. Это время выбрано

экспериментально с учетом воздухообмена и полного использования ингалируемого вещества. После этого собакам проводят ингаляцию овальбумином различных концентраций, приготовленных на физиологическом растворе. Используют следующие концентрации овальбумина а 5 мл физио ло- гического раствора: 100, 200, 500, 1000 и 2000 мкг (табл. 1).

Как следует из табл. 1 собаки обладают

индивидуальной способностью реагировать на овальбумин, что учитывают при испытании аллергизирующих свойств ЖГВ..Вместе с тем установлено, что минимально провоцирующая доза составляет 100 мкг в 5 мл, т.

е. концентрация, овальбумина 20 мкг/мл. Предварительные опыты с использованием меньших доз (25-50 мкг в 5 мл) не выявляют реакции у всех собак. Кроме того, как следует из табл. 1, максимальное удлинение продолжительности выдоха на ингаляцию плацебо (физиологический раствор) не превышает 25% от исходного уровня,

При проведении опытов по испытанию различных серий.ЖГВ получены результаты, представленные в табл. 2.

Пример 2. Условия эксперимента описаны ранее в примере 1. Собаке № 2 производят ингаляцию ЖГВ производства Одесского предприятия и ЛенНИИВС, содержащих различные концентрации овальбумина в 1 мл, и изучают реакцию бронхиального дерева на ингэлируемые ЖГВ (табл. 2).

. ...-.

Из табл. 2 следует, что экспериментальный препарат очищенной ЖГВ ЛенНИИВС не вызывает бронхоспастической реакции сенсибилизированной собаки (Увыд.25%). В то же время вакцина Одесского предприятия вызывает у эксперементального живо- тного четко выраженное снижение показателей бронхиальной проходимости ( 67,7% к 15 мин) и клинически выраженный бронхоспззм.

Пример 3. Изменение показателей бронхиальной проходимости после ингаляции ЖГВ приведены в табл. 3.

Условия эксперимента описаны ранее в примере 1. .5

Как следует из табл. 3, у сенсибилизированной собаки №г 2 экспериментальный препарат очищенной ЖГВ ЛенНИИВС не вызывает брокхоспастической реакции (/выд.25%). В то. время как у собаки hi 3 10 .вакцина Одесского предприятия вызывала резкое снижение показателей проходимости бронхоа( Д Увыд.б9% на 10 мин), что сопровождается клиническими признаками бронхоспазма (удлиненный выдох). Сухие 15 хрипы при аускультации.

Пример 4. Условия эксперимента описаны ранее в примере 1.

Из табл, 4 следует, что экспериментальная вакцина ЖГВ ЛенНИИВС не вызывает 20 значительного изменения показателей проходимости бронхов О/выд. 25%) у сенсибилизированной собаки № 5. После ингаляции ЖГВ Одесского предприятия отмечаются значительные изменения показателей проходимости бронхов у сенсибилизированной собаки № 4 ( Л ), которая нерезко реагировала и на ингаляцию чистого оваль- бумина(табл, 1).. Формула изобретения Способ контроля аллергенности живых гриппозных вакцин, включающий введение вакцины в организм животного, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, из животных используют собак, предварительно сенсибилизированных овальбумином, введение осуществляют ингаляционным способом, об аллергенности судят по снижению бронхиальной проходимости более, чем на 25% по отношению к исходному значению этого показателя. . . , . .

. -, % . .--.. - -:..

..;; , - Таблица.1.

Продолжение табл. 1

Продолжение табл. 1

Изобретение относится к медицинской промышленности, биотехнологии, оакцин- но-сывороточному проИхЗводству и может быть использовано при производстве вакцинных препаратов на основе куриных эмбрионов. Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа. Для этого испытуемые вакцины в виде аэрозоля вводят собакам, предварительно сенсибилизированным овальбумйном. При определенной пороговой концентрации овальбумина в препарате живой гриппозной вакцины (ЖГВ) у собак не развивается приступа бронхоспазма. При содержании овальбумина в ЖГВ выше пороговой вели-, чины у собак развивается бронхоспазм, что выражается в виде реакции затрудненного выхода. Выбор экспериментального животного обусловлен тем, что собаки не болеют гриппом. Изобретение может быть использовано для контроля различных вакцин с аэрозольным способом введения, в технологии производства которых используют куриные эмбрионы. 4 табл.., ....;; С «ч О СО векЗ

Та бл йца 2

Таблица 3

Таблица 4