Способ оценки перекисной резистентности эритроцитов Советский патент 1992 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для оценки состояния антиоксидантной системы организма.

Целью изобретения является ускорение и упрощение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

В центрифужную пробирку, содержащую 50 мкл антикоагулянта (оксалат 1,34%- ного натрия), вносят 400 мкл взятой из пальца капиллярной крови, эритроциты осаждают путем центрифугирования образца при 1000 об/мин в течение 10 мин, после чего плазму осторожно отсасывает. Осадок эритроцитов взбалтывают легким потряхиванием пробирки и автоматическим дозатором добавляют к взвеси эритроцитов в аутоплазме 2000 кмл 1,5%-ного раствора гипероксида водорода на физиологическом растворе, согретого предварительно до комнатной температуры. Содержимое каждой пробирки размешивают стеклянной палочкой и инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин. Затем в каждую пробирку автоматическим дозатором вносят по 2000 мкл дистиллированной воды, вновь перемешивают стеклянной палочкой содержимое каждой пробирки и тотчас ставят центрифугировать в течение 15 мин при скорости 3000 об/мин. По окончании центрифугирования пробирки осторожно выни41

I

00

00

мают, надосадочную жидкость фотометри- руют против воды, используя фоЧоэлектро- колориметр ФЭК-5. кюветы с длиной светового пути 3 мм. Используют зеленый светофильтр.

По найденной величине экстинкции вышедшего из разрушенных эритроцитов гемоглобина определяют процент гемолиза, принимая за 100 гемолиз эритроцитов, полученный из такого же объема крови от здоровых людей после добавления к нему 4 мл воды (инкубация осадка эритроцитов в дистиллированной воде 30 мин, центрифугирование при 3000 об/мин).

Специальными исследованиями установлено, что у здоровых людей при данных условиях определения величина гемолиза колеблется от4 до 12% от величины полного гемолиза эритроцитов в таком же объеме крови, вызванном добавлением к ним 4 мл воды. При получении результатов выше 12% диагносцируют сниженную переписную ре- истентность эритроцитов.

П р и м е р 1. Гр. А.. 58 лет, практически здоров. Берут 400 мкл крови из пальца в центрифужную пробирку, содержащую 50 мкл антикоагулянта. Эритроциты осаждают центрифугированием при 1000 об/мин в течение 10 мин. Осадок после удаления плазмы взбалтывают и добавляют 2000 мкл 1,5%-ного раствора перекиси водорода в физиологическом растворе, согретого до комнатной температуры. Содержимое пробирки размешивают стеклянной палочкой и инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин. Затем в пробирку вносят 2000 мкл дистиллированной воды, вновь перемешивают стеклянной палочкой и центрифугируют в течение 15 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость фо- тсметрируют против воды, используя ФЭК- 5. кюветы с длиной светового пути 3 мм при

зеленом светофильтре. Величину гемолиза рассчитывают по отношению к полному гемолизу эритроцитов, содержащихся в таком же количестве взятой для

исследования крови после добавления к ней 4000 мкл дистиллированной воды . Найденная величина составила 8%, что соответствует нормальному уровню.

П р и м е р 2. Гр. Б., 48 лет, жалуется на

дискомфорт со стороны кишечника. Предлагаемым способом определена величина переписного гемолиза, которая составила 52%. После коррегирующей терапии витаминными препаратами она снизилась до

22%. т.е. произошло частичное восстановление резистентности эритроцитарных мембран к действию перекиси водорода.

По сравнению с известным предлагаемый способ проще в осуществлении, не требует термостатирования и отмывания эритроцитов от плазмы, в результате чего сокращается время его выполнения.

Формула изобретения

Способ оценки перекисной резистентности эритроцитов путем калориметрического определения вышедшего из клеток гемоглобина в условиях действия перекиси водорода, отличающийся тем, что, с

целью ускорения и упрощения способа, к 1 части капиллярной крови с антикоагулянтом добавляют 5 частей 1,5%-ного раствора перекиси водорода на физиологическом растворе, инкубируют в течение 30 мин при

комнатной температуре, создают гипоос- мию давлением 5 частей дистиллированной воды, подвергают гипергравитации центрифугированием в течение 15 мин при 3000 об/мин и при доле экстинкции гемоглобина

выше 12% от общего его содержания диагностируют сниженную перекисную рези- стентность эритроцитов.

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для оценки состояния антиоксидантной системы организма. Цель изобретения - ускорение и упрощение способа. Способ осуществляют следующим образом. К 1 части капиллярной крови с антикоагулянтом добавляют 5 частей 1,5%-ного раствора перекиси водорода на физиологическом растворе. Смесь инкубируют 30 мин при комнатной температуре, затем добавляют 5 частей дистиллированной воды и центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. По найденной величине экстин- кции вышедшего из разрушенных эритроцитов гемоглобина определяют процент гемолиза и при его значениях выше 12% диагностируют сниженную пе- рекисную резистентность эритроцитов. Способ прост в осуществлении, не требует термостатирования и отмывания эритроцитов от плазмы, в результате чего сокращается время его выполнения.