Способ работы с контейнерами при консервировании биоматериала Советский патент 1992 года по МПК F25D3/10 

Изобретение относится к способам низкотемпературного консервирования биоматериалов, размещаемых в контейнерах, а именно к способам работы с этими контейнерами, расположенными в жидком азоте, и может найти применение в медицине, микробиологии и научно-исследовательской ла бораторной практике.

Целью изобретения является повышение сохранности контейнеров при отогреве путем предотвращения затекания в них жидкого азота.

Способ осуществляют следующим образом.

Контейнер фиксированной формы и объема заполняют до 0,85 ч. объема подготовленным для криоконсервации биоматериалом, например клеточной суспензией, через один из открытых штуцеров. Штуцер закрывают крышкой или пробкой так, чтобы достигалась изоляция содержимого контейнера от внешней среды. Контейнер устанавливают и выдерживают вниз штуцерами так, чтобы штуцеры и пространство внутреннего объема контейнера над штуцерами были заполнены клеточной суспензией, и выдерживают не менее 2 мин так, чтобы стенки контейнера, образующие пространстве, свободное от клеточной суспензии, очистились от биологического материал за счет его стекания. Не меняя положения, контейнер помещают в жидкий азот и подвергают охлаждению в соответствии с режимом, необходимым для замораживания клегоччсй

О 01 О Ч О

Р

суспензии. Такое их положение обеспечивает формирование в штуцерах ледяного затвора из биоматериала. После замораживания биоматериала контейнеры помещают на хранение в жидкий азот. Затвердевший биологический материал изолирует контейнер or последующего затекания азота при хранении в жидком азоте. При необходимости декон- сервации из жидкого азота контейнер переносят в нагревающее устройство, например водяную баню, с заданной температурой, размещая вверх или вниз штуцерами до достижения оттаивания биологического материала, штуцеры открывают и биомагериал используют по назначению.

Пример. Эритроциты получали HJ донорской крови, заготовленной на среде Глюгицир путем центрифугирования 400 мл донорской крови при 2000 об/мин 10 мин, удаления слоев плазмы белых клеток крови респирацией. Осадок эритроцитной массы смешали с криоконсервантом в равных объема, центрифугировали 1800 об/мин 10 мин. Недостаточный слой (0,8 ч.) удалили, остаток перемешали и перенесли 230 мл из флакона в алюминиевый контейнер (270 i-. л) для замораживания крови Штуцеры завинтили тефлоновыми пробками. Контейнер перевернула вниз штуце ,:;ми и поставили в штатив на 2 мин, после чего перенесли в жидкой азог и заморозили содержимое контейнера, располагая контейнер в жидком & юте вниз штуцерами, и оставили на хранение в течение 120 дней. Контейнер извлекали из жидкого азота и поместили в воду на 60 с при Л2° С. Тефло- новые пробки свинтили со штуцеров и произвели отмывание размороженных эритроцитов растворами с применением центрифугирования известным способом. Отмытые эритроциты ресуспендировали во взвешивающем растворе в соотношении обьемов 1:1. Контейнер отмыли от остатков зри1 роцитной массы, стерилизовали 3 ч при 140° С с использованием повторно в соответствии с предложенным способом крио- консервации. В отмывочных средах, эритроцитной массе и ресуспендирующем растворе определили содержание гемоглобина и установили, что в процессе криокон- сервации разрушилось 11% эритроцитов, а содержание свободного гемоглобина составило 70 мг % в ресуспендирующей среде.

Время выдерживания контейнера в перевернутом положении менее двух минут недостаточно, поскольку в этом случае не обеспечивается сохранность контейнера в области тефлоновой пробки, что обусловлено неполным заполнением контейнера вязкой массы эритроцитного концентрата.

затеканием в него ходкого азота. Это обусловлено тем, что в условиях погружения металлического, главным образом алюминиевого, контейнера с биоматериалом, частично заполняющим контейнер, происходит бысгроц охлаждение металлических частей при медленном охлаждении пробок, выполненных из фторопласта. При этом осуществляется конденсация воздуха в незаполненном биообъек

том объеме и образование вакуума в этой масти. Если контейнер расположен штуцерэ- ми и крышкой вверх или если он выдеожэн в перевернутом положении недостаточное время, происходит втягивание жидкого азота в незаполненную часть контейнера через полости, образующиеся между пробкой и штуцером, особенно при изношенной резьбе фторопластоаой пробки.

При отогреве контейнеров г. биоматериалом жидкий азот при испарении, превращаясь Е газ, увеличивает объем в 700 раз. Быстрое YS..M «ение объема газа в незаполненной биомзтериалом части контейнера вызывает разрушение или деформацию контейнера.

При выдержке контейнеров перед по- «ещением к идли л азот шту:;.;.-р.р вниз бопее 2 мин ит штуцеров выходит воздух, Я тулеры заполняются жидким бизмзтериалом, которой при погружении э азот замерзает и образует тоердотетьный за твор внутри штуцере, который имеет плотное здгез /В .се сцепление со стемкз- ми штуцера всг.едсгяме липкости

фозы биомятеоиала :i существенного коэффициента расширения бмом&териала вследствие зэморзживяния.

В результате .аостигаегся гер.с .иззция контейнера и жидкий азот пе п(шиает в

незаполненную С-иоматериалсм часть контейнера.

Данный способ работы с контейнера- ми при консервировании б -тч1этери ала обеспечивгет высокую сохранность контейнеров и содержащегося в них Оиомзте- риала.

Формула изобретения Способ работы с контейнерами при консервировании биоматериала, предусматривающий заполнение контейнеров жидким биоматериалом через штуцеры, перекрытие последних пробками, помещение контейнеров в жидкий азот, хранение и отогрев, о тличающийся тем, что, с целью повышения сохранности контейнеров при отогреве путем предотвращения затекания в них жидкого азота, после заполнения биоматериалом и перекрытия пробками контейнеры устанавливают и выдерживают

штуцерами вниз не менее двух минут, и а няи для формирования в штуцерах ледяною жидкий азот помещают в таком же положе- затвора из биомэтериэда.

Изобретение относится к способам низкотемпературного консервирования биоматериалов, размещаемых в контейнерах, а именно к способам, работы с этими контог- мерами, располагаемыми в жидком пзоче. может нзйш применение с медицине микробиологии и научно-исследовательской лабораторной практике. Целью изобретения является повышение сохранности контпй- нероз при отогреве путем предотвращения затекания в них жидкого азота. Конгейсер заполняют жидким биоматериалом через штуцеры, перекрывают последние пробка ми, переворачивают v выдерживают шг/порами вниз не менее двух минут. При этом из штуцеров выходит воздух и они эамо. ся жидким бисматеризлом, который при погружении Б азот замерзает и .;1 твердонмьный затвор внутри . В результате достигается герметизации контейнера, и жидкий азот не проникает в незаполненную биоматериалом часть контейнера. Ь-.