Штамм гриба РеNIсILLIUм RUвRUм - продуцент пигмента - цветового аналога шток розы Советский патент 1992 года по МПК C09B61/00 C12N1/14 

Изобретение относится к биотехнологии и касается штаммов, рекомендуемых для производства пищевого красного красителя : - аналога шток розы.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является штамм Penlcllllum rubrum ВКМ 2625, полученный из ВКМ, Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР.

Недостатком этого штамма является его сравнительно низкая продуктивность.

Цель изобретения - получение штамма с высокой выработкой пигмента.

Новый штамм Penlcllllum rubrum М-180 получен с использованием традиционных генетико-селекционных приемов (ультрафиолетовое облучение с последующим отбором) из штамма Penlcllllum rubrum ВКМ 2625 - продуцента красного пигмента. Полученный штамм гриба Penlcllllum rubrum М180 депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов под F413.

Штамм Penlcljllum rubrum ВКПМ F-413 характеризуется следующими культурноморфологическими и физиолого-биохимическими признаками.

Культурно-морфологические признаки.

Шта.мм получен путем обработки Penicilllum rubrum ВКМ 2625 УФ-облучением с помощью бактерицидной лампы 2537А° в течение 180 с с последующим ртбором колоний с интенсивной пигментацией.

Для выделения нового штамма использована пептонно-глюкозная среда, г/л воды:

Агар-агар13.0

Пептон10.0

Глюкоза40.0

Штамм идентифицирован по ПидопличкоН.М.

Характеристика колоний на пептонноглюкозной среде с агаром.

Рост колоний при 2в°С (10-суточная культура) обильный, размер 4-5 см. круглые, красного цвета, с обратной стороны круглые, структура волокнистая. В среду выделяет красный пигмент, поверхность колоний розовая, биомасса темно-красная.

Пептонно-глюкозная среда без агара (2суточная культура) при 28°С.

Рост без-встрйхивания, на поверхности среды образует пленку без помутнения. При встряхивании на качалке среда мутнеет. При выращивании на агаризованной среде Чапека (2-суточная культура) при 28°С) образует оранжевые круглые колонии, диаметром 4-5 см. Поверхность колоний бархатистая. Типы вегетативного тела - мицелий.

Субстратный мицелий на пептонноглюкозной среде с агаром красный, размер 2,,8 мкм. Мицелий короткий, сморщенный, ветвистый.

Воздушный мицелий йа пептонно-глюкозной среде с агаром розовый, размер 2,0 1,8 мкм. Размножается спорами, В каждой метуле 3-8 конидий. Конидии круглые с гладкой поверхностью, размеры конидий 2,,8 мкм, Конидиеносцы до200 2,2-3 мкм, гладкие, отходят от субстрата или от воздушных гиф (мицелий), собраны в тяжи, Кистички двухъярусные,

Физиолого-биохимические признаки.

Дыхание аэробное. Температура роста: максимальная 37°С; минимальная 22°С; оптимальная 28°С, рН среды: максимум 6,8; минимум 6,0: оптимум 6,2,

Штамм обладает слабым спектром действия, В зоне диффузиц культуральной жидкости вирулентный фаг не содержится,

Утилизацию источника углерода изучали на фоне основной среды: 0,5% пептона и 0,1% К2НР04, 2 мл 1,6%-ного спиртового раствора бромкрезол пурпура. При рН 6,8 индикатор имеет пурпурный цвет, при 6,2 желтый.

Отношение штамма к источникам углерода и азота (+ - усваивает: - - не усваивает):

Источник углерода

Глюкоза+

Фруктоза+

Мальтоза+

Маннит+

Арабиноза+

СррбитДульцитЯблочная кислота+

Янтарная кислота+

Щавелевая кислотаИсточник азота

Пептон+

Мочевина+

Усвоение азота

минеральных солей +

(сернокислый аммоний)

Рост на без азотистой среде

Другие характерные физиологические особенности обмена: крахмал гидролизует, желатину не разжижает, молоко не пептонизирует. Штамм обладает непатогенными свойствами.

Рост: развитие штамма ингибируется под действием толуола, хлороформа, фенола, спирта, ультрафиолетовых лучей, а также при нагревании выше в течение 20 мин,

Штамм Penlcillium rubrum ВКПМ F-413 отличается от прототипа по морфологии гиф, длина которых резко укорачивается. Мицелий сморщенный, гранулярный,

П р и м е р. Посевной материал получают выращиванием в колбах в жидкой среде, следующего состава, г/л: К2НР04 1,0: MgS04 0,5: NaNOa 3,0: КС 0,5: FeS04 следы: сусло пивное 7°Б 1,0 л.

Состав перемешивают, измеряют рН (6,2), Приготовленную питательную среду разливают в колбы емкостью 750 мл по 100 мл, стерилизуют в автоклаве при 0,75 атм в течение 30 мин, охлаждают до 25°С, Посевным материалом для колбы служит 2-суточная культура. Для этого культуру выращивают на сусле-агаре в пробирке. Количество посевной культуры нормируется в соответствии с требованием, В колбы объемом 750 мл с 100 мл выше описанной среды производится смыв одного косяка. Колбы ставят при 200 об/мин и выращивают при 28°С в течение 4 сут. Чистая культура как посевной материал используется для засева посевного аппарата в количестве 5% от объема питательной среды. Затем культивируют 5 дней и передают в спецсосуды (лотки), содержащие питательную среду со следующим составом, г/л: К2НР04 1,0: MgS04 0,5: NaN03 3,0: KCI 0,5: FeSO4 следы; рисовая мучка 200,0: сусло пивное 7°Б 1,0 л.

Минеральные соли растворяют в сусле и замачивают рисовую мучку. Способ культивирования в спецсосудах поверхностный. Продолжительность,культивирования 8 сут при 28°С, Образовавшаяся пигментная масса служит источником для производства пищевого красителя,

П р и м е р 2, Культивирование предлагаемого штамма на среде прототипа для сравнительного анализа их пигментной активности.

Штаммы ВКПМ F-413 и ВКМ 2625 выращивали в пробирках со скошенной пептонно-глюкозной средой с агаром 2 сут и в колбы (объем 300 мл„ содержание среды 50 мл) производили с них смыв. Способ выращивания поверхностный, при 28°С, в течение 12 сут. Каждые два дня определяли пигментную активность обоих штаммов. Красящее вещество извлекали из 50 мл среды 100 мл 96%-ного спирта и 1 мл пигментно-спиртового раствора доводили до 100 мл и измеряли на КФК-2 оптическую плотность раствора при 490 нм, используя элемент 5 мм.

Оптическая плотность 100 мл пигментно-спиртового раствора 12-суточной культуры прототипа равнялась Э.5, а предлагаемого штамма - 13,2.

В таблице приведены данные сопоставительного анализа уроаня пигментной активности и выработки пигмента при проверке штаммов ВКПМ F-413 и ВКМ 2625.

Как видно из таблицы, предлагаемый штамм ВКПМ F-413 вырабатывает в 3-4 раза больше красящего вещества, чем штамм ВКМ 2625 (прототип), причем за период проведения опытов (1 год) не наблюдалось ни одного случая падения пигментной активности.

Фор мула изобретения Штамм гриба Penlcllilum rubrum ВКПМ F-413 - продуцент пигмента - цветового аналога шток розы.

Изобретение относится к биотехнологии и касается штаммов, рекомендуемых для производства пищевого~красного красителя - аналога шток розы. Цель изобретения - получение штамма с высокой выработкой пигмента. Штамм Pentcllllum rubrum ВКПМ F-413 получен путем генетико-селекцион- ных приемов, а именно обработкой мутагенами и отбором, из штамма PenlcMlium rubrum ВКМ 2625 - продуцента красного пигмента. Новый штамм обладает более высоким уровнем пигментной активности и по- зволяет получать.в 3-4 раза больше целевого продукта по сравнению с известным ранее штаммом. 1 табл.