Способ определения Т-и В-лимфоцитов на цитологическом препарате Советский патент 1992 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

барана и в тесте с анти- ©-сывороткой. После обработки препарата анти- 0-сывороткой крупноглыбчатая организация хроматина выявилась в 1-4% случаев, а клетки с мелкоглыбчатой, полиморфной организацией при увеличении в 900 раз (об. 60, ок. 15) на люминесцентном микроскопе или микроцитофлуориметре при 530 и 640 нм. Т-лимфоциты дифференцируют по наличию крупноглыбчатой организации хроматина в ядре, а В-лимфоциты - по мелкоглыбчатой, полиморфной . Определяют параметры интенсивности свечения ядер Т- и В-лимфоцитов в зеленой и красной областях спектра и вычисляют для них в отдельности индекс метаболической активности.

Таким образом, предлагаемый способ повышаетточность определения Т-и В-лимфоцитов за счет специфичности связывания красителя с исследуемой структурой хроматином, поскольку акридин оранжевый соединяется с нуклеиновыми кислотами. Кроме того, разрешающая способность метода флуоресцентного зондирования на порядок и более превышает чувствительность

методов микроскопии в видимых областях спектра, что также повышает точность исследования.

Способ может быть использован в лабораторной и клинической практике как экспресс-метод для определения Т-и В-лимфоцитов при различных состояниях с целью диагностики нарушений в системе иммунитета и их коррекции.

Формула изобретения Способ определения Т- и В-лимфоцитов на цитологическом препарате путем инкубации мазков с красителем и определением клеток по организации хроматина, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, на препарате выявляют клетки с кольцевым и диффузно расположенным хроматином, при этом качестве красителя используют акридиновый оранжевый в концентрации 1:500000, а окрашивание ПРОВОДЯТ, а течение 1-2 мин и при наличи в клеткахкольцевого хроматина определяют Т-лимфоциты, а при наличии в клетках диффузно расположенного хроматина - В-лимфоциты.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Целью изобретения является повышение точности способа. Цель достигается тем, что на препарате выявляют клетки с кольцевым и диффузно расположенным хроматином. При этом в качестве красителя используют акридиновый оранжевый в концентрации 1:500000, а окрашивание проводят в течение 1-2 мин. При наличии в клетках кольцевого хроматина определяют ее как Т-лимфоцит, а при наличии в клетках диффузно расположенного хроматина - как В-лимфоцит. Способ позволяет точно и быстро выявить эти две разновидности клеток.Способ относится к медицине, в частности к иммунологическим методам иссле- дования, и может применяться в клинической и лабораторной практике для количественной оценки популяций Т- и В- лимфоцитов.Целью изобретения является повышение точности способа.Способ осуществляют следующим образом.Мазки крови или мазки отпечатки на холоде обрабатывают раствором акридинового оранжевого в разведении 1:500000 в течение 1-2 мин. Влажные мазки накрывают покровным стеклом и исследуют с водной иммерсией при увеличении в 900 раз (ок. 15, об. 60) на люминесцентном микроскопе МЛ-2. Т-лимфоциты дифференцируют по кольцевой крупноглыбчатой организации хроматина, а В-лимфоциты определяют по диффузной, мелкоглыбчатой организации Последнего.Пример 1. 8 белых крыс интактных и 10 крыс на 7 сут после введения им 20 млрд. микробных тел Staphylococcus aureus штамм 75 забивали под легким эфирным наркозом. Отпечатки селезенки на холоде обрабатывают раствором акридинового оранжевого 1:500000, в течение 1-2 мин, накрывают покровным стеклом, помещают на предметный столик микроскопа МЛ-2.При рассмотрении препарата под водой иммерсией Т-лимфоциты определяют по кольцевому крупноглыбчатому расположению хроматина, а В-лимфоциты - по диффузному, мелкоглыбчатому. Параллельно проводят определение Т-лимфоЦитов* и В- лимфоцитов по известному способу, а также путем определения Е- и ЕАС-розеткообра- Зующих клеток.Дополнительно был проведен контроль распределения клеток на Т- и В-лимфоциты по организаци хроматина в тесте с ЕА- и ЕАС-розеткообразованием с эритроцитами-*^^ГО 00^>&