Способ определения состояния иммунитета у женщин Советский патент 1992 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к-иммунологии, акушерству и гинекологии.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим об- „разом.

Отсасывают цервикальную слизь из цервикального канала в стерильную пипетку. Помещают клетки в сбалансиро- ванный фосфатный буфер с добавлением 1-глютамина, глюкозы и буфера Hepes (можно и просто фосфатный буфер) . Клетки отмывают центрифугированием в течение 10 мин при 1500 об/мин, доводят лЬ концентрации 105 кл/мл (ядро- содержащих клеток), .помещают на тёмна- вую адаптацию на 40 мин в термостат при 37°С. Определяют в течение 2 мин спонтанную хемилюминесценцию (люминол- зависимую) и в течение 2 мин индуцированную латексом хемилюминесценцию в хемилюми-нометре. При этом используют полистирольный монодисперсный латекс

/ 1,5-1,75 мкм, а люминол в конечной концентрации 50 мкг/мл ,буфера.

Подсчитывают индекс ХЛ нейтрофилов по формуле

1{хп индуцированная.Л спонтанная ХЛ

по кoтopo гy определяют состояние имму- .нитета (местного) у женщины.

Пример 1, 3-а Р.Х., 28 лет.

Диагноз: неосложненная инфекцией беременность 7-8 недель.

У-а С .10., 28 лет . Диагноз : неосложненная беременность 25-26 недель.

М-а С.Ю., 23 года. Неосложненная беременность 36 недель.

Исследовали хемилюминесценцию нейтрофилов цервикальной слизи в соответствии с заявляемым способом.

У женщин брали цервикальную слизь из цервикального канала в фосфатный буфер того же состава; однократно отмывали в буфере при 1500 об/мин в течение 10 мин. Подсчитывали, число ядО)

СЯ 4 СП

росодержащих клеток, доводили концентрацию до 1Q кл/мл и подвергали темно- вой адаптации.

Ex tempore готовили раствор люми- нола на фосфатном буфере того же состава из расчета 50 мкг люминола (фирмы SiRma) на 1 мл раствора. Вносили во флаконы (фирмы Becman) по 1 мл раствора люминола и подвергали темно- вой адаптации.

Затем после темновой адаптации и стабилизации клеток во Флаконы вносили по 0,1 мл раствора клеток в концентрации 10б кп./мл (10 кл/мл раст- jj вора люминола) и флаконы с клетками помещали в хемилюминометр - :счетчик Бета-1.

В течение первых двух минут прово17164454 :

стирольного монодисперсного латекса 1,7 мкм (концентрация Частиц Ю10 на мл), конечная концентрация составила 10° частиц на 1 мл раствора лю- нинола. Латекс вносили в избытке. Необходимость этого обусловлена тем, что частицы должны одновременно реагировать с клетками; с этой же целью суспензия частиц и клеток тщательно перемешивается. Флаконы вновь ставили в счетчик- и измеряли уровень уже индуцированной., латексом ХЛ нейтро- филов в течение 2 мин. Затем юпреде- i ляли уровень спонтанной ХЛ нейтрофи- лов за 1 мин путем сложения количества импульсов в 1-ю и 2-ю минуту регистрации и деления полученной суммы на 2, получая средний уровень ХП

10

Изобретение относится к иммунологии, акушерству и гинекологии. Цель - повышение точности способа исследопания иммунитета у женщин. Для этого выделяют нейтр-офилы из цервикал.ьной слизи, определяют их спонтанную хемилюминесценцию, активируют нейтрофилы полистирольным моно- дисперсным латексом диаметром 1,5- 1,75 мкм с последующим определением , индуцированной латексом хемилюминес- ценции, в сравнении с нормой определяют состояние иммунитета у женщин.

дйли измерения спонтанной хемилюминес о нейтрофилов за 1 мин. Вычисляли инценции нейтрофилов. Через 2 мин во сЬлаконы вносили 10 мкл взвеси полидекс индуцированной ХЛ нейтрофилов по формуле

количество импульсов в 1. мин после добавления латекса

НИлЛ-;-----------,

количество импульсов в 1 мин при спонтанной ХЛ

В данном примере ИНХЛ вычисляли следующим образом:.

Количество импульсов/мин за 1-ю минуту после индукции

- ------- - - - --- -« ---™-..«- .j.

количество ими/мин за 1-ю минуту до индукции

Получили следующие результаты 3-а-Р.Х., 7-8 неделе. Спонтанная ХЛ нейтрофилов (СХЛ) цервикальной слизи 3371,5 имп/мин. Индекс индуцированной ХЛ нейтрофилов цервикальной слизи 0,63.

У-а С.Ю. 25-26 недель. СХЛ цервикальной слизи 412,0 имп/мин. ИИХЛ нейтрофилов цервикальной слизи 1,2.

М-а С.Ю. Спонтанная ХЛ нейтрофилов цервикальной слизи 5849,0 имп/мин; Индекс индуцированной ХЛ нейтрофилов цервикальной слизи 13,6 усл.ед.

, Полученные результаты показывают, что в течение беременности у женщин с неосложненной беременностью активность нейтрофилов цервикальной слизи повышается от I до III триместра беременности, следовательно, объективно отражает состояние защитных сил беременной женщины.

Изучение состояния ХЛ нейтрофилов цервикальной слизи у беременных женщин с инфекционными осложнениями по нейтрофилов за 1 мин. Вычисляли индекс индуцированной ХЛ нейтрофилов по формуле

количество имп/мин. за 2-ю минуту по сле индукции

количество имп/мин. за 2-го минуту до индукции

5

0

казало большую информативность изучения ХЛ нейтрофилов цервикальной слизи.

Это иллюстрируется следующим примером .

П р и м е р 2. Больная Р., 26 лет. Диагноз: беременность 36 недель. Цер- вицйт. Угроза преждевременных родов.

Изучение состояния иммунитета проводили в соответствии с заявляемым способом,

Получили следующие результаты: СХЛ 5 нейтрофилов цервикальной слизи

1556,0 имп/мин,- Ш1ХЛ нейтрофилов цервикальной слизи 172,4.

Полученные данные свидетельствуют о резком усилении индуцированной ХЛ нейтрофилов цервикальной слизи.

У этой женщины развиваются преждевременные роды (гнойно-септических осложнений у роженицы на было выявлено).

ПримерЗ. Р-ва Л.Н., 15 лет. Беременность 38 недель. Кольпит.

Показатели ХЛ нейтрофилов:

СХЛ нейтрофилов цервикальной слизи 528,0 имп/мин, ИНХЛ нейтрофилов цер- викзльной слизи 0,54.

0

5

У данной больной отмечена низкая .: спонтанная и индуцированная ХЛ нейтро- - филов цервикальной слизи. Низкие значения ХЛ нейтрофилов цервикальной слизи заставляют предположить развитие послеродовой инфекции.

Предлагаемым способом было обследовано 48 беременных женщин в различные периоды беременности и 10 небере- JQ менных здоровых женщин.

У 3 из беременных женщин, обследо- ванных в соответствии с предлагаемым способом при исследовании ХЛ нейтрофилов цервикальной слизи были пред- сказаны преждевременные роды, а у 4 - развитие инфекционных послеродовых осложнений. Все 7 предположений в последующем подтвердились.,

Предлагаемый способ, значительно ; 20 сокращая длительность и трудоемкость исследования иммунитета у женщин,

одновременно обладая высокой информативностью за счет получения данных о состоянии местного иммунитета, может найти широкое применение в клинической лабораторной практике.

ч.

Формула изобретения

Способ определения состояния иммунитета у женщин путем выделения нейтрофилов, определения их спонтанной хемилюминесценции, индукции нейтрофилов латексом с последующим расчетом изменений спонтанной и ин-v. дуцированной хемилюминесценции по сравнению с нормой, отличаю- щ и и с я тем, что, с целью повышения точности, нейтрофилы выделяют из цервикальной слизи, а активацию их осуществляют латексом диаметром 1,5-Т,75 мкм.