Способ определения иммуномодулирующей активности нейтрофилов Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 G01N33/483 

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и предназначено для изучения секреторных функций нейтрофилов в норме и при различной патологии..

Целью изобретения является упрощение, сокращение трудоемкости и продолжительности способа исследования сек- реторных функций нейтрофилов.;

Пример. Выделяют из пер,ифери-: ческой крови чистую популяцию нейтрофилов путем центрифугирования на двойном градиенте плотности фиколла-веро- графина (плотность нижнего раствора 1,093, верхнего - 1,077) влечение /; 40 мин при 1500 об/мин и 4 С. На границе между растворами образовалось

кольцо гранулоцитов, а между плазмой и верхним- раствором фиколла-верографи- на - слой мононуклеаров. После выделения клеточной суспензии гранулоцитов они отмывались средой 199 путем двукратного центрифугирования в течение 10 мин при 1500 об/мин; взвесь гранулоцитов из нижнего кольца разводят средой 199 с индикатором - феноловым красным до концентрации 5-Ю6 клеток в 1 мл и разливают поровну в две пробирки : в первую вносят взвесь частиц монодисперсного полистирольного латекса диаметром 1,7 мкм из расчета 108 частиц на каждые 5-10 нейтрофилов, во вторую пробирку - такой же объем среды 199.

О

4 Јь

4j

Установлено, что секреторные продукты могут менять рИ среды, а индикатор позволяет обнаружить изменения рН среды. Общепринятым индикатором для культур тканей, в том числе для среды 199, является феноловый крас- .ный; гранулоциты культивируют в течение 1 ч при 37°С в среде 199 с индикатором рН среды. После культивирова- ния содержимое пробирок центрифугируют в течение 10 мин при 1500 об/мин и повторно в течение 10 мин при 8000 об/мин. Супернатант пропускают через фильтр с диаметром 0,24 мкм для ркончательного удаления латекса. Супернатант (2,0 мл) исследуют на оптическую плотность. При снижении индекса экстинкции относительно пороговых значений 1,41 - 1,43 определяют сти- мулирующую активность нейтрофшюв, а при увеличении - супрессорную.

Данный способ является более простым по сравнению с прототипом за счет упрощения определения секреторных им- муностимулирующих функций нейтрофи- лов, кроме того, сокращается время определения.

Установлен неизвестный ранее феномен изменения цветности среды культи- вир ования под влиянием продуктов секреции нейтрофилов.

Формула изобретения

Способ определения иммуномодули- рующей активности нейтрофилов, включающий выделение чистой популяции нейтрофилов из крови, культивирование клеток в питательной среде в присутствии активатора и без него, выделение супернатанта нейтрофилов, о т л и ч a to PI и и с я тем, что, с целью упрощения способа при одновременном сокращении времени определения, к среде культивирования нейтрофилов добавляют индикатор рИ ере- ды, а определение активности нейтрофилов осуществляют в супернатанте фотометрически и при снижении индекса экстинкции ниже пороговой величины 1,41-1,43 опр еделяют стимулирующую активность нейтрофилов, а при увеличении - супрессорную.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и предназначено для изучения секреторных функций нейтрофилов в норме и при различной патологии. С целью упрощения, снижения трудоемкости и ускорения способа при. культивировании нейтрофилов к питательной среде добавляют индикатор рН среды, а полученный затем супернатант нейтрофилов (активированных частицами монодисперсного полистирольного латекса и неактивированных) исследуют фотометрически, определяют оптическую плотность его в краснот области спектра (при 540 нм) с последующим вычис- лением индекса изменения экстинкции еупернатанта по формуле величина экстинкции еупернатанта ИГиС- - Тпп величина экстинкциисреды 199 По величине ИИЭС судят о секреторной функции клеток. В качестве индикатора рН среды используют феноловый кр аснып. СО