Штамм бактерий BacILLUS SUвтILIS, используемый для получения препарата для профилактики и лечения воспалительных процессов и аллергических заболеваний Советский патент 1992 года по МПК C12N1/20 A61K35/74 C12N1/20 C12R1/125 

Изобретение относится к биотехнологии, к средствам для профилактики и лечения патологических процессов, а именно гнойно-воспалительных заболеваний различной локализации и пищевой аллергии,

Целью изобретения является новый штамм Bacillus subtilis 534. Способность проникать из желудочно-кишечного тракта и концентрироваться в тканях патологического очага, выделяя антибактериальные вещества, протеолитические ферменты, иммуномодуляторы, позволяет повысить эффективность и лечение (и профилактику) гнойно-воспалительных процессов различной локализации и пищевой аллергии. Штамм выделен из негнойной раны больного и депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов под № 1666 D.

Штамм В. subtilis BKM № B-1666D характеризуется следующими свойствами.

Культурно-морфологические свойства. Палочки. Величина клеток односуточной агаровой культуры (2-4) х (0,6-0,8) мкм. Бактерии подвидные. Споры образуют, капсулы не образуют. По Граму окрашиваются положительно. Колонии на мясо-пептонном агаре шероховатые, с фестончатыми краями, со слабым розовым оттенком, диаметром 2-12 мм. Штамм размножается при 15-50°С, оптимум роста 36-37°С. На мясо-пептонном

XI Ю СО

о

бульоне при 37°С через 18-24 ч образует белесоватую пленку на поверхности и небольшой придонный осадок, состоящий из пленок. На гретой среде Тароцци через 24- 48 ч инкубации при 37°С отмечается рост в виде нежной белесоватой пленки, растет при 7% хлорида натрия.

Биохимические свойства. Вызывает гидролиз крахмала, редукцию нитратов. Расщепляет без выделения газа глюкозу, сахарозу маннит, мальтозу, дульцит, галактозу, ксилозу, лактозу. Рамнозу, лизин аргинин, орнитин не ферментирует. Сероводород и индол не образует. Аце- тилметилкарбинол и каталазу выделяет. Чувствителен к бензилпенициллину, ампициллину, эритромицину, мономицину, лин- комицину, тетрациклину, не чувствителен к полимиксину.

Штамм продуцирует антибиотик широ- кого спектра действия, подавляющий рост стафилококков, стрептококков, протея, си- негнойной палочки, дрожжевых грибков. Выделяет протеолитические ферменты, расщепляющие белки.

В 200 бактериологических матрац разливают по 250 см3 3%-ного стерильного мя- со-пептонного агара. В каждый из них с соблюдением асептики вносят по 10см3 взвеси производственного штамма В. subtilis BKM № B-1666D, содержащей по 100 млн. клеток в 1 см3 0,9%-ного раствора натрия хлорида. Матрацы закрывают ватно- марлевыми пробками и помещают в термостаты с температурой 36-37°С. Через 24 ч с соблюдением асептики выросшую культуру смывают стерильным раствором 0,9%-ного раствора натрия хлорида из расчета 100 см на 1 бактериологический матрац. Полученную взвесь разливают в 500 см3 стеклянные флаконы. 24 ч при давлении 70 Па проводят лиофилизацию. Стабилизаторы при этом не оказывают существенно влияния на лечебный эффект. Они могут быть различными: 0,9%-ный раствор натрия хлорида, 5%-ная глюкоза, сахарозо-желатиновая смесь и др.

В 1 мг полученного препарата (споро- бактерин) содержится 250 млн. живых клеток штамма В.subtilis BKM № B-1666D. Препарат подавляет рост золотистого ста- филококка в зоне 30 мм, протея в зоне 28 мм, дрожжевого грибка в зоне 32 мм.

Препарат назначается людям внутрь по 5-10 млрд, клеток в течение 10 сут. Исполь- зуется для профилактики и лечения гнойно- воспалительных процессов различной локализации (гнойные раны, остеомиелит, сепсис, пневмония и др.), пищевой аллергии, дисбактериоза.

Пример. Больная А., 59 лет. Диагноз: обострение хронического тонзиллита. Больна в течение двух суток. Отмечает непереносимость антибиотиков, сульфаниламидов. При употреблении в пищу молока и моркови появлялись диаррея и крапивница (высыпания на коже). Внутрь назначен препарат на основе живой культуры штамма В. subtilis BKM Мг B-1666D в дозе 5 млрд. клеток один раз в сутки. Явление обострения тонзиллита купированы на 4 сут. Лечение продолжено еще в течение 6 дней. Осмотрена через 6 мес. Клинически здорова. Употребляет в пищу в умеренных количествах молоко и морковь. Пищевой аллергии не отмечает.

П р и м е р 2. Больная М., 56 лет. Диагноз: костный панариций II пальца левой кисти, лимфаденит. Больна 2 мес. Дважды проводилось вскрытие гнойника, выполнялась операция секвестрэктомия. Получала антибиотики широкого спектра действия перевязки с антисептиками. Больной предложена ампутация пальца. II палец резко отечен, цианотичен (синюшен). В области средней фаланги рана около 1 см в диаметре.. Грануляции бледные, покрыты фибрином. Отделяемое серозно-гнойное. Увеличены и болезненны лимфоузлы в области локтевого сустава. При бактериологическом исследовании выделены золотистый стафилококки бактерии рода Pseudomonas. Внутрь назначен препарат на основе живой культуры штамма В. subtilis BKM № B-1666D по 5 млрд. клеток в 2 раза в сутки. Производились перевязки с 10%-ным раствором натрия хлорида. Штамм В. subtilis BKM N2 B-1666D выделен из крови и из раны через сутки. Через 3 дня рана очистилась, на 9 сут она заэпителизировалась.

П р и м е р 3. Больная Г., 48 лет. Диагноз: хронический сепсис, воспалительный инфильтрат левого предплечья, сахарный диабет средней тяжести, дисбактериоз.

Больна в течение 1,5 лет. После микротравм и без видимых причин стали возникать фурункулы, абсцессы и флегмоны на конечностях и грудной клетки. Перенесла 9 операций вскрытия и дренирования гнойников. В результате длительного применения антибиотиков развился дисбактериоз, беспокоили чередование диарреи и запоров, метеоризм. Соблюдала диету и постоянно получала инсулин. Во время очередного обострения и формирования воспалительного инфильтрата осмотрена в клинике. Из крови выделен золотистый стафилококк. В течение 10 сут проведено лечение бактериальным препаратом на основе живой культуры штамма В. subtilis BKM № B-1666D по . клеток два раза в сутки. Препарат

назначался внутрь. Другие антибактериальные препараты больше не получала. Через 2 сут воспалительный инфильтрат исчез. В посеве крови обнаружен только штамм В. subtilis BKM Ns B-1666D. Нормализован стул.

П р и м е р 4. Для предупреждения гнойно-хирургической инфекции препарат давался внутрь по 1 капсуле (5 млрд. клеток) в сутки в течение 10 дней 9 больным с открытыми переломами конечностей, 7 - со случайными ранами мягких тканей, 12 - после плановых оперативных вмешательств (остеосинтеза). Для лечения споробакте- рин в дозе 1-4 капсулы в сутки внутрь в течение 10 дней применен у 14 больных с острым обострением хронического остеомиелита, у 14 - гнойными ранами, у 6 - с гнойно-воспалительными процессами в области спиц компрессионно-дистракцион- ных аппаратов, у 1 - черепно-мозговой травмой, пневмонией, менингитом, пролежнями, у 1- с хроническим сепсисом на фоне сахарного диабета, у 2 - с тонзилитом, у 1 - с гайморитом. По показаниям у 12 больных с обширными нагноительными процессами курс лечения через 3-7 сут повторялся.

У 9 больных, ранее длительно получавших антибиотики, были клинические проявления дисбактериоза: боли и вздутие живота, чередование запоров и жидкого стула. Кроме того, у 7 больных отмечена непереносимость одного или нескольких антибиотиков, сульфаниламидов, а у одной - пищевая аллергия на рыбу, цитрусовые, морковь, помидоры.

В период лечения споробактерином все больные антибиотики и другие антисептические препараты не получают. Хирургическое лечение, дезинтоксикация, стимулирующую терапию проводят по показаниям и не отличаются от методов, принятых в клинике.

При профилактическом приеме спор- бактерина по 1 капсуле внутрь нагноение раны отмечено у одного из 28 больных. У этого пострадавшего с открытым переломом голени вследствие некроза кожи образовался струп, который постепенно отторгся. Рана зажила вторичным натяжением. В то же время у больных, не получавших споробактерин, гнойно-воспалительные процессы встречались чаще (р 0,05). Так, в клинике нагноения открытых переломов наблюдались в 36%, случайных ран мягких тканей - в 14%, послеоперационных ран после остеосинтеза - в 7% наблюдений.

Штамм В. subtilis высеян из крови у 27 из 28 больных, а из раны у 26 из 28 больных.

Осложнений при профилактическом применении споробактерина не отмечено, что подтвердили клинические наблюдения и данные анализов.

Из 36 больных с гнойными ранами (в том

числе с остеомиелитом, хрониосепсисом) стафилококк в монокультуре и составе микробных ассоциаций высеян у 26, сине-гнойная палочка - 6, кишечная палочка - у 4,

0 протей - у 3, прочие бактерии - у 8. К действию пяти и более антибиотиков были устойчивы 76% полученных штаммов. Через сутки после первого приема наблюдалось значительное увеличение количества гной5 ного отделяемого. Раны быстро очищались от некротизированных тканей. В последующем менялся характер раневого секрета, его количество уменьшалось из гнойного он постепенно становился серозно-гнойным с

0 легкой примесью разложившейся крови. Через 1-3 сут после начала лечения появлялась ярко-розовая грануляционная ткань, исчезали отек, лимфаденит, лимфагоит, активизировалась эпителизация.

5 Заживление гнойных ран наступило у 23 из 36 больных, стихание воспалительного процесса (нормализация температуры тела, очищение раны от некротизированных тканей, уменьшение количества гнойного отде0 ляемого и др.) у 11. В последующем раны зажили и свищи закрылись у 9 из них. Только у 2 больных (с обострением хронического остеомиелита и с нагноением в области спицы аппарата Илизарова) лечение.Споро5 бактерином было безуспешным. У последнего нагноение в области одной спицы стихло, но вновь возникло в области другой спицы. При лечении пневмоний, менингита, хрониосепсиса, тонзиллитов

0 гайморита стойкое выздоровление получено у всех больных.

Аллергических реакций, несмотря на предрасположенность к ним ряда больных, не наблюдали, Клинические проявления

5 дисбактериоза стихли у всех 9 больных через 1-4 сут. Учитывая, что до применения споробактерина 21 больной в течение 6- 42 дней без положительного эффекта лечился протеолитическими ферментами,

0 антибиотиками и другими антисептиками, полученные результаты следует признать хорошими.

Препарат таким образом, на основе штамма В. subtilis BKM Ns B-ISC1666D обла5 дает выраженной лечебной активностью при гнойно-хирургической инфекции: подавляет рост возбудителей, способствует очищению ран от некротизированных тканей, ускоряет процессы заживления. Он может быть использован для лечения других

воспалительных процессов, вызываемых бактериальной микрофлорой: пневмоний и тонзиллитов и др.

При профилактическом лечении препаратами уменьшается число нагноений ран и открытых переломов.

Осложнений при лечении препаратом не отмечено, клинические проявления пищевой аллергии и дисбактериоза купируются.

Формула изобретения Штамм бактерий Bacillus subtilis В KM B-1666D, используемый для получения препарата для профилактики и лечения воспалительных процессов и аллергических заболеваний.

Изобретение относится к биотехнологии, к средствам для профилактики и лечения патологических процессов, а именно гнойно-воспалительных заболеваний различной локализации и пищевой аллергии. Целью изобретения является штамм Bacillus subtilis 534, способный/проникать из желудочно-кишечного тракта и концентрироваться в тканях патологического очага, выделяя антибактериальные вещества, про- теолитические ферменты, иммуномодулято- ры, что позволяет повысить эффективность профилактики и лечения гнойно-воспалительных процессов различной локализации и пищевой аллергии. Штамм Bacillus subtilis 534 депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР под № 1666 D. Препарат из штамма обеспечивает усиление лечебного эффекта за счет проникновения бактерий в очаг повреждения, где они вырабатывают биологически активные вещества, тем самым подавляя развитие инфекции и способствуя очищению от некротизированных тканей.