Способ оценки функциональной активности мононуклеарных фагоцитов у больных туберкулезом легких Советский патент 1992 года по МПК G01N33/534 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии туберкулеза.

Цель изобретения - повышение точности оценки состояния функциональной активности мононуклеарных фагоцитов у больных туберкулезом.

Способ осуществляют следующим образом.

Из периферической крови больного в градиенте фиколл-верографина выделяют мононуклеарные клетки. Моноциты получают методом адгезии клеток к пластику, для чего мононуклеары помещают по 500 тыс в лунки 96-луночного планшета. По окончании инкубации неприлипшие клетки удаляются от прилипших к пластику мб- ноцитов многократным промыванием теплой средой. Затем к моноцитам добавляют БЦЖ (50 мкг/мл) на 1,5-2 ч. После отмывания от БЦЖ в лунки к моноцитам вносят смесь Т- и В-лимфоцитов (по 10),

предварительно освобожденную от прилипающих клеток. Культивирование производят в сре-де РРМ1 1640 с 10%-ной эмбриональной телячьей сывороткой, 2 мМ L-глютамина, 50 мкг/мл гентамицина, 15 мМ Hepes, во влажной атмосфере с 5% С02 в течение 72 ч..3а 18 ч до окончания культивирования в лунки вносят по 1 МСи На-тими- дина. Учет включения в клетки радиоактивного тимидина проводят с использование Д-счетчика (Mark). Индекс стимуляции (ИС) пролиферации лимфоцитов, обусловленной антигенным воздействием, вычисляют по формуле:

число импульсов в опыте-число импульсов в контроле

ИСчисло импульсов в контроле

При увеличении индекса стимуляции с 0,28 ± 0,16 у здоровых лиц до 0,75 ±0,14 у больных говорят об активном участии моноцитов больных в процессах распознавания и презентации антигена Т-клеткам.

Пример 1. Больной Кондрашов М,Г. 25 лет, инфильтрационный туберкулез легкого в фазе распада. Включение радиактив- ного тимидина в пролиферирующие клетки фиксируется /3-счетчиком в виде радиоак- тивных импульсов. Получают счет импульсов в опытных (с добавлением антигена (АГ) и контрольных (без АГ) пробах, в Трех параллельных вариантах. Вычисляют среднее значение М и по формуле - индекс стиму- ляции пролиферации. Индекс стимуляции равен 0,6. Следовательно, функциональная активность моноцитов у больного снижена.

Положительный эффект (повышение точности) подтверждается результатами ис- следования 26 больных впервые выявленным туберкулезом легких.

В предлагаемом способе показано повышение точности исследования за счет воздействия АГ только непосредственно на .моноциты в отличие от прототипа, где АГ

воздействует и на Т-клетки, что вносит дополнительные ошибки при исследовании.

Формула изобретения

Способ оценки функциональной актив- кости мононуклеарных фагоцитов у больных туберкулезом легких путем добавления специфического антигена к исследуемой крови с последующей регистрацией реакции, отличающ и и с я тем, что, с целью повышения точности способа, из исследуемой крови выделяют моноциты, в качестве антигена используют БЦЖ, а регистрацию осуществляют с помощью радиоактивного тимидина и при увеличении количества меченых моноцитов выше 0,61 по индексу стимуляции по сравнению с. контролем, не содержащем БЦЖ, оценивают (функциональную активность моноцитов как повышенную.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии туберкулеза. Цель изобретения - повышение точности оценки функциональной активности мононуклеэр- ных фагоцитов у больных туберкулезом. Указанная цель достигается тем, что из исследуемой крови выделяют моноциты, в качестве антигена используют БЦЖ, а регистрацию осуществляют с помощью радиоактивного тимидина и при увеличении количества меченых моноцитов выше 0, по сравнению с-контролем, не содержащем БЦЖ, оценивают функциональную активность моноцитов как повышенную, а при снижении количества меченых моноцитов - как сниженную.