Способ определения нарушений обмена фосфолипидов при заболеваниях легких у детей Советский патент 1992 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к медицине, в частности к биохимии, и может быть использовано для контроля за состоянием липидного комплекса конденсата выдыхаемого воздуха в норме и при патологии, в частности, у детей.

Цель изобретения - упрощение и уменьшение его инвазивности.

П р и м е р 1. Больной С., 8 лет, диагноз: бронхиальная астма, смешанная форма, средней тяжести, период нестойкой ремиссии. С 2-месячного возраста проявления экссудативного диатеза на молочные смеси, в настоящее время эпизодически проявления пищевой аллергии по типу крапивницы. В 4-летнем возрасте появились впервые приступы удушья после перенесенного бронхита, В дальнейшем приступы провоцировались острой респираторной инфекцией, резкими запахами, контактом с собакой. При постановке скарификационных аллергопроб положительные результаты с домашней пылью (++), шерстью собаки (+++), яйцом курицы (++).

2 мл конденсата выдыхаемого воздуха поместили в.пробирку с притертой пробкой объемом 10 мл, подкислили 2-3 каплями соляной кислоты концентрацией в соотношении 1:1, затем экстрагировали 5 мл хлороформа в течение 1 мин осторожно встряхивая. Нижний хлороформный слой отделили с помощью пипетки Пастера после 30 мин выдержки на холоде (при 40° С). Для полноты реакции пробу экстрагировали 3 раза при тех же условиях. Объединенные хлороформные экстракты концентрировали

упариванием воздуха в токе азота при 45- 50°С на водяной бане. Сухой осадок подвергли метилированию по известному методу для проведения газохроматографического анализа.

Анализ метиловых эфиров проводили на газовом хроматографе серии Цвет-500 с пламенно-ионизационным детектором в изотермическом режиме.

Условия анализа спектра ЖКлипидов: стеклянная колонка размером 2 м и диаметром 3 мм, заполненная 5% ПЭГС на хроматоне N-AW-HMDS (зернение 0.125- 0,160 мм), температура, °С: колонки 186; испарителя 270, расход, мл/мин: газа-носителя (азот) 35; водорода 35; воздуха 200, скорость диаграммной ленты - 240 мм/ч, шкала чувствительности - 107 А, объем , пробы 1-2 мкл, продолжительность анализа 15 мин.

Количественную оценку проводили по методу нормировки площадей и определили доли кислот в %. Погрешность определения

±10%.- .

Условия анализа свободного холестерина (СХС): стеклянная колонка размером 1 ми диаметром 3 мм, заполнения 5% SE-30 на хроматоне N-AW-HMDS (зернение 0,125-0,160 мм), температура, °С: колонки 270; испарителя 290, расход, мл/мин: газа-носителя (азот) 45; воздуха 200; скорость диаграммной ленты 240 мм/ч, шкала чувствительности 107А, объем/, пробы 3-5 мкл, продолжительность анализа 5 мин.

Количественную оценку содержания СХС осуществляли методом калибровки. Индентификацию и количественный расчет проводили с помощью стандартного раствора холестерина с концентрацией 1 мг/мл, чувствительность определения 0,2 мкг/мкл.

После расшифровки хроматограмм получили. ЖК %: С 16:0-39,4; С ,6; С 18:0-31 И: С 18:2-7,9; С 20:4 - следы, СХС следы,

Приме р 2. Больная М., 5 лет, диагноз: астматический бронхит, ремиссия; рецидивирующая крапивница. У ребенка проявления экссудативного диатеза с 6-месячного возраста. После приема цитрусовых отек Квинке и проявления крапивницы в 2 года. С 4 лет проявления затрудненного дыхания на резкие запахи (впервые на запах ацетона). Затрудненное дыхание связано с цветением трав. Диагноз установлен впервые.

Исследования по предлагаемому способу проводили как в примере 1.

После расшифровки хроматограмм получили. ЖК %: С 16:0-49,7; С 18:0-23,3; С

18:1-23,3; С 18:2-0,5; С 20:4 - следы, СХС следы.

Примерз. Группа здоровых детей (5 чел.) в возрасте 5-7 лет в анамнезе которых отсутствовала бронхиальная астма, была набрана из травматологического отделения.

Условия анализа спектра ЖК липидов и СХС по примеру 1.

После расшифровки хроматограмм получили. ЖК %: С 16:0-35,3; С 18:0-12,3; С 18:1-23,8; С 18:2-18,6; С20:4-2, СХС 0,2-0,5 мг/мл.

В таблице представлены результаты реализации предлагаемого способа на группах детей с.заболеваниями легких и контрольной группе здоровых детей.

Преимущества предлагаемого способа: упрощение стадии экстракции общих липидов (исключение этапа выделения фосфолипидов) позволяет сократить время на этапе подготовки проб к газохроматографи- ческому анализу, что обеспечивает экс- прессность способа; атравматичность способа позволяет проводить многократные отборы конденсата у детей для осуществления контроля в процессе лечения; способ исключает трудоемкий метод тонкослойной хроматографии; может быть ис- пользован и для выявления лиц с

повышенным риском развития бронхоле- гочной патологии, способ прост и легко выполним средним медицинским персоналом.

Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я

Способ определения нарушений обмена фосфолипидов при заболеваниях легких у детей, включающий отбор биологической жидкости, получение экстракта общих липидов и анализ жирокислотного состава фосфолипидов, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и уменьшения его инвазивности, в качестве биологической жидкости используют конденсат выдыхаемого воздуха, в экстракте дополнительно

определяют содержание свободного холестерина и при снижении содержания жирных кислот С 18:2 и С 20:4, а также содержания холестерина ниже контрольного уровня определяют нарушение обмена

фосфолипидов.

Жирокислотный спектр липидов и содержание холестерина в липидных экстрактах конденсата выдыхаемого воздуха у детей

Изобретение Относится к медицине, в частности к биохимии, и может быть использовано в клинической практике для контроля за состоянием липидного комплекса конденсата выдыхаемого воздуха в норме и при патологии, в частности, у детей. Целью изобретения является упрощение способа и уменьшение его инвазивности. Способ состоит в отборе конденсата выдыхаемого воздуха с последующей экстракцией липи- дов в конденсате выдыхаемого воздуха из подкисленных растворов хлороформа. После метилирования определяют спектр жирных кислот липидов и уровень свободного холестерина из одной биологической пробы. В случае снижения содержания жирных кислот С 18:2 и С 20:4, а также содержания свободного холестерина в липидном экстракте ниже контрольного уровня определяют нарушение обмена фосфолипидов. Способ значительно проще известного и отличается атравматичностью. 1 табл. Ј

Достоверные отличия от контрольной группы при р 0,01.