Способ диагностики ишемической болезни сердца Советский патент 1981 года по МПК A61B10/00 

(54) СПОСОБ ДИАгаОСТИКИ ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ СЕРДЦА

Изобретение относится к медицине, а имению к способам диагностики и контроля за эффективностью лечения ишемической болезни сердца. Известен способ диагностики ишемической болезни сердца путем вьще ления из крови эритроцитов с последукяцим определением в них содержания фрсфолиговдов . Однако известный способ не поз.воляет достаточно точно и дифференциро вано поставить диагноз клинических форм заболевания. Цель изобретения - повышение точности способа. Указанная цель достигается тем, что согласно способу диагностики ише a{чecкoй болезни сердца путем выделе ния из крови эритроцитов с последую09IM определением в них содержания фо фолипидов, дополнительно определяют свободный (олестерин, аолестерина, свободные жирные кислоты и при содержании общих фосфолипидов 18,8523,4%, свободного холестерина 50,65-51,37%, эфиров холестерина 17,3621,35%, свободных жирных кислот 0,810,89% от общего количества липидов диагностируют ишемнческую болезнь сердца. Способ осуществляют следующим образом. Из локтевой вены берут 1,5 мп крови, смешиваот ее с 0,2мп 3,6%-ного раствора цитрата натрия и центрифугит руют в течение 15 мин при 3000 об,/мин; После этого из полученного центрифуг гата отсасывают плазму, а к эритроцитам, находящимся в осадке, добавляют 10 мп физиологического раствора хлористого натрия и содерзйимое перемешивают. Затем вновь эритроциты осаждают центрифугированием при тех же условиях (п-3000 об/мин, мин) и указанный процесс отмывания эритроцитов осуществляют еще два раза. После третьего отмыва.ния берут 0,5 мп эритроцитов и гемолизируют их добав- лением 0,5 мл дистиллированной воды. Полученный гемолизат переносят в плос кодонную колбу с 10 мл хлороформметаноловой смеси (2:I) и экстрагируют ли пиды в течение двух часов при постоянном перемешивании. Затем смесь фильтруют через обезжиренный бумажный фильтр, колбу дваждь1 промывают 2-3 мл хлороформ метаноловой смеси (2:1) . К полученному фильтрату дог бавляют 2 мл дистиллированной воды, встряхивают и оставляют в холодильника до разделения смеси на 2 фазы. Затем верхний водньй слой отсасывают, а нижнюю хлороформную фазу выпаривают в вакууме при подогревании не вьпое 40 С, Для этой цели наиболее подходят конические колбы, в которых липидный экстракт находится в узкой нижней час ти. После упаривания сухой липидный остаток сразу же растворяют 0,25 мл хлороформ-метаноловой смеси (2:1) и используют для осуществления процесса тонкослойной хроматографии. Для разделения липидов на классы используют готовые пластинки Silufol UV 25, изготавливае№ 1е в Чехословакии на которых нанесен тонким слоем си- ликагель, закрепленный крахмалом. Раз деление липидов осуществляют одномерной восходящей хроматографией в системе растворителей : н-гексан-эфир ледяная уксусная кислота (80:20:1), Предварительно пластинки трижды про1ллвзаот в этой же системе раствори- телей. Используют пластинки размером 15x15см, KOToiftie разрезают на 2 части и на каждой из них разделяют 2 образца липидов. Липидный экстракт по 0,05 мл наносят в виде узкой полосы длиной около I см, отступая на 1,5см от края. Для нанесения используют мик ропипетку с оттянучтям концом с введен ной внутрь нитью. Это дает возможност наносить липидный экстракт узкой полосой, не повреждая тонкого слоя сили кагеля. Пластинку помещают в вертикальном пбложении в хроматографическую камеру с системой растворителей, .насыщенную его парами. В качестве хроматографической камеры может быть использована стеклянная банка с прите той крышкой. Высота камеры 15-20 см. Систему растворителей наливают в хроматографическую камеру в таком количестве, чтобы высота слоя не превышала 1 см. Тонкий слой на хроматографической пластинке должен пропитываться растворителями на высоту 10 см считая от линии.нанесения экстракта липидов. Для этого требуется 20-25 мин. После пропитывания растворителем хроматографические пластинки извлекают из камеры, высушивают на воздухе до исчезновения запаха растворителей и проявляют опрыскиванием 10%-ным спиртовьпм раствором фосфорномолибденовой кислоты. Указанный раствор готовят растворением фосфорномолибденовой кислоты в 96° этиловом спирте при подогревании до кипения, а затем фильтруют. После опрыскивания фосфорномолибденовой кислотой (10%-ным спиртовым раствором) пластинки нагревают в сушильном шкафу при в течение нескольких минут до появления интенсивного окрашивания пятен липидов в синий цвет на желтом фоне. Длительное нагревание может привести к окрашиванию в синий цвет фона, что в дальнейшем будет мешать при денситометрии, В эритроцитах здоровых людей на хроматограммах обнаруживают ПЯТЬ:пятен, которые идентифицированы с известными представителями липидов и по цветным реакциям. На старте остаются фосфолипиды (первое пятно), второе пятно соответствует свободному холестерину, третье - свободным жирным кислотам, четвертое - триглицеридам и пяток - эфирам холестерина. Интенсивность окраски пятен липидбв на хроматограммах оценивают на денситометре, например типа БИАН, в отраженном свете. Полученные количественнь1е данные при денситометрии каждой фракции липидов суммируют и их сумму принимают за 100%, а из полученной суммы высчитывают процентную концентрахщю каждой фракции липидов. Пример 1. У обследуемо го Ц., у которого при объективном клиническом обследовании не выявлено патологии сердечно-сосудистой системы, взята кровь и по указанной методике из зритрощ{тов выделены липиды, разделены на классы и определены количественно. Содержание в эритроцитах у данного обследуемого эфиров холестерина составило 47,18%, триглицеридов 3,89% , сво(5одиых жирных кислот 1,73%, свободного холестерина 31,16% и фосфолипидов 15,15%, Пример 2, Больной И. Клинический диагноз: Ишемическая болезнь сердца 1 степени. Стенокардия напряжения. При исследовании липидов эритроцитов оказалось, что эфиры холестерина составляют 20,22%, триглицериды 7,20%, свободные жирные кислоты 1,39%, свободный холестерий 47,09%, а фосфолипиды 24,10%,

Пример 3, Больная Н. Клинический диагноз: Ишемичная болезнь сердца II степени. Стенокардия покоя Содержание в эритроцитах эфиров холестерина составило 15,93%, триглицеридов 9,73%, свободных жирных кислот 0,88%, свободного холестерина 49,56% и фосфолипидов 23,90%,

П р и м е р 4, Больная М,Клинический диагноз: Острый инфаркт миокарда При исследовании по предложенной методике липидов эритроцитов оказалось что содержание эфиров холестерина сотавляет 30,89%,триглицеридов 5,02%, свободных жирных кислот 1,54%, свободного холестерина 39,77% и фосфолипидов 22,78%,

Способ применен на 53 .больных и 20 здоровых людях. При этом установлено, что применение предложенного способа позволит получить более четкие, достоверные данные по изменению липидного спектра эритроцитов у .больных ишемической болезнью сердца по сравнению с плазмой крови. Так, у больных с ишемической болезнью сердца достоверно понижается процентное содержание эфиров холестерина, свободных жирных кислот и увеличивает- ся содержание свободного холестерина и фосфолипидов по сравнению с конролем, причем содержание эфиров холестерина снижается, менее выражено при остром инфаркте миокарда 29,Оt t2,63% против 37,55± 2,04% в контроле , более значительно - при ишеми- ческой болезни сердца, стенокардии напряжения 2l,35t 1,52% и наиболее резко - при ишемической болезни

сердца, стенокардия покоя 17,36tl,19% что позволяет не только диагностировать ишемическую болезнь сердца, но дифференцировать ее клинические формы. Таким образом, предложенный способ обеспечивает более точную, достоверную и быструю биохимическую диагностику ишемической болезни сердца по сравнению с известным способом.

15

Формула изобретения

Способ диагностики ишемической болезни сердца путем выделения из крови эритроцитов с последующим Определением в них содержания фосфолипидов, отличающийся тем, что, с целью повьппения точности способа, дополнительно определяют свободный холестерин, эфиры холестерина, свободные жирные кислоты и при содержании общих фосфолипидов 18,85-23,4% свободного холестерина 50,65-51,37%, эфиров холестерина 17,36-21,35, свободных жирных кислот 0,81-0,89% от общего количества липидов диагностируют иигемическую болезнь сердца.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

I, Боринский Ю. Н, и СидоренковМ,И, Некоторые показатели липидного обмена в мембранах эритроцитов в плазме крови при коронарном атеросклерозе и инфаркте миокарда,- Советская медицина, 1975, № 10, 143/145.