СПОСОБ ОЧИСТКИ ДИФТЕРИЙНОГО ТОКСИНА ДЛЯ РЕАКЦИИ ШИКАВОЕСОЮС!;Д;^' Г;.\т:;п';:о --i"^'..:Л!:0'1 Советский патент 1965 года по МПК A61K39/02 

Известны способы очистки дифтерийного токсина для реакции Шика, например, путем обработки сульфатом аммония.

Однако осаждение сульфатом аммония ввиду лабильности токсина дает непостоянные результаты и значительно снижает удельную активность токсина.

Предлагается концентрат токсина фильтровать через гель декстрана, например сефадекс типа Г-75.

Такой метод очистки искотючает воздействие денатурирующих факторов на белки в процессе разделения и позволяет значительно повысить стабильность дифтерийного токсина.

Процесс очистки заключается в концентрации токсина и фильтровании через гель.

Первый этап осуществляют путем вымораживания нри температуре от - 5 до-10°С. Концентрат, составляющий около, 20 o6.Vo, помещают в стерильный целлофановый мещок ц диализуют 18-24 час дистиллированной водой при 2-6°С. После диализа меток кладут на 18-24 час в холодильник для криодиализа. При этом на поверхности мещка образуется ледяная корка, а внутри него - густой сиропообразный концентрат недиализуемых компонентов. Концентрат переносят в стерильную пробирку, а мещок ополаскивают стерильным боратным буферным раствором (3,56 г буры, 5,25 г борной кислоты и 6,18 г хлорида натрия разбавляют до 1 л). Общий выход токсина на стадии концентрирования составляет 70-80%.

Полученный концентрат в количестве 10- 12 мл/час пропускают через хроматографическую колонку, заполненную 10 г геля декстрана (сефадекс Г-75). Фильтрацию проводят порциями по 2,0 мл. Регенерируют колонку боратным буферным раствором.

При всех операциях очистки токсин необходимо оберегать от прямого воздействия света и действия высокой температуры.

Очищенный дифтерийный токсин сохраняет свою активность не менее 12 месяцев.

Предмет изобретения

Способ очистки дифтерийного токсина для реакции Шика, отличающийся тем, что, с целью повыщения его стабильности, концентрат токсина фильтруют через гель декстрана, например сефадекс тина Г-75.