Изобретение относится к получению новых биологически активных соединений ти- лозинового ряда, применяемых в фармацевтических препаратах, в частности в микробицидных средствах.
Тилозин представляет собой 1б-член- ный макролидный антибиотик, применяемый в ветеринарной практике. Однако это
соединение обладает недостаточно высокой антибактериальной активностью.
Цель изобретения - получение новых производных тилозина, обладающих более высокой антимикробной активностью.
Эта цель достигается способом получения производных тилозина формулы I
ы
4)l
нзсоосн, вду Vp-4 HLF
Ho- Vo--H,r,y о rVHDr0111
Vo н Р0лЛ7 MCHj
где R1 - микарозил или атом водорода; R2 - СНО группа.
R - СНО группа, согласно которому соединение формулы II
п
I 9СН3 Hs(J o-(r7-o-HjC-rh
НэС-чгс-Ь
R
i но я
о-(Гл-ок1 оЧ
СЕ}
|де R имеет указанные значения;
Ri2- СН(ОСНз)2 группа, подвергают ок- симированию действием 1-10-молярного избытка гидрохлорида гидроксиламина в присутствии избытка пиридина, или №2(СОз), в случае необходимости, в среде такого растворителя, как спирт, в токе азота пр -емперагуре от комнатной до температуры кипения реакционной среды а течение времени от 15 мин до 10 ч, и полученное соединение форму пи I, где RI - СН(ОСНз)- группа, подаеогают гидролизу в водном растворе ацетонигрила в присутствии каталитического количества трифторуксусной кислоты или хлористоводородной кислоты при комнатной температуре.
Выделение продукта осуществляют, например, осаждением или экстракцией гало- генированными растворителями из водных растворов щелочей и выпариванием до сухого остатка.
Перед спектральным анализом продукты очищали на колонке с силикагелем.
В 13С-ЯМР спектре тилозин-оксимов исчезает характеристический сигнал карбонильной группы в области 200 ц/млн, и появляется новый химический сдвиг в области 150-165 ч/мпн., характеристичный для группы .
В спектре Н-ЯМР полученных альдок- симов исчезает характеристический сдвиг альдегидов в области 9,6 ч/млн, и появляются новые сдвиги в области 10,0-10.7 чУмлн., соответствующие -NOH группе, которые исчезают после перемешивания с D20.
Изобретение обеспечивает получение тилозин-оксимов, некоторые из которых проявляют значительную биологическую активность.
Антимикробную активность некоторых соединений формулы I испытывали на лабораторном штамме Sarclna lutia и на 50 различных штаммах, выделенных из свежих образцов пациентов. Минимальную ингибиторную концентрацию (MIC) определяли методом разбавления на агаре.
Результаты испытаний представлены в табл.1 и 2.
Соединения формулы I малотоксичны. П р и м е р 1. Тилозин альдоксим (la).
Тилозин (На) А,58 г (5,0 ммоля) растворяли в этаноле (100 мл) и после перемешивания добавляли пиридин (2,5 мл) и гидрохлорид гидроксиламина (0,348 г, 5 ммоля), полученную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 15 мин в атмосфере азота. После охлаждения добавляли 50 мл воды и устанавливали рН системы равным 7,0 с помощью 1N раствора NaOH. Затем смесь концентрировали при пониженном давлении до 1/3 первоначального объема и экстрагировали хлороформом
(2 х 150 мл). Хлороформные экстракты объединяли и сушили над К2СОз. Фильтровали и выпаривали досуха с получением 3,95 г (84,9%) продукта в виде смеси изомера, которую можно разделить на колонке с силикагелем(системаА:
метиленхлорид:метанол:гмдроокись аммония 90-9:1,5). ПК () 1585, 1670, 1705, исчезновение полосы при 2720 см 1. УФ (Et ОН) Дмакс 283 нм, loge 4,3.
Н-ЯМР (ДМСО- de/ б ч/млн.: 10,07)
N ОН, С-20, исчезает после перемешивания с DaO, 7,19 (Н, дублет, Н-11), 6,47 (Н, дублет, Н 10). 5,87 (Н, дублет, Н-13).
ГЗС-ЯМР (ДМСО-de/ ч/млн: 202,72 (С9), 172,46 (С-1), 149,83 (С-20), 147,12 (С-11), 142,14 (С-13), 134,86 (С-12), 118,90 (С-10), 103,89 (С-11), 100,73 (C-f), 96,05 (C-f). М+ 930.
П р и м е р 2. Диметилацеталь-тилозин- оксим (IG).
Диметилацетальтилозина(Нс)4,40г(4,6 ммоля) растворяли в 20 мл пиридина, добавляли гидрохлорид гидроксиламина (2,76
г,39,7 ммоля) и полученную смесь перемешивали в гоке азота при комнатной температуре в течение 9 ч. К реакционной смеси добавляли 200мл воды и 1 л ее подщелачивали 1N раствором NaOH до значения рН 9,
после чего смесь концентрировали при пониженном давлении и экстрагировали хлороформом (1 х 200 мл), Хлороформный слой сушили над К2СОз и фильтровали, фильтрат выпаривали досуха с образованием 3,9 г
(86,9%) сырого продукта. 2,0 г такого продукта очищали методом хроматографии на 200 г силикагеля (система А).
В результате получали 1,50 г чистого целевого продукта, имеющего следующие физико:химические константы:
Rf(A)0,443: Rf(B - хлороформ-метэнол- гидроксид аммония 6:1:0,1)0,786;
ИК(КВЧ) 1710. 1610см 1;
УФ/Е10Н/А«акс;272 пм, log e 4,18;
1Н-ЯМР(ДМСО-с1б), 5ч./млн, 10,51 (-N- ОН), исчезает после перемешивания с D20. 7,07 (1Н, дублет, Н-11); 6,17 (1Н, дублет, Н- 10),5,56(1Н,дублет, Н-13), 3,46(ЗН, синглет, 3 ОСНз): 3,37 (ЗН, синглет, 2 ОСНз): 3.20 (6Н. синглет, 2 х 20)ОСНз, 2,41 (6Н, синглет, NfCHsfc).
М 976.
ПримерЗ. Тилозин-оксим (1C).
Диметилацеталь тилозин-оксима (Ib) 1,91 г, (1,95 ммоля) растворяли в 50 мл аце- тонитрила, после чего добавляли 50 мл воды и 0,2 мл трифторуксуснсй кислоты. После перемешивания в течение 3 ч при комнат- ной температуре реакционный раствор подщелачивали до значения рН 8-8,5 путем добавления насыщенного раствора бикарбоната натрия и полученную смесь экстрагировали хлороформом. Объединенные экстракты промывали насыщенным раствором хлористого натрия и сушили над «2СОз, выделяли 1,15 г сырого продукта, который подвергали хроматографической очистке на колонке с силикагелем.
Выход: 0,65 (35,8%) продукта со следующими характеристиками;
Rf (А) 0.314;
Н-ЯМР (ДМСО-de) б ч./млн. 10,65 (НМ- ОН), исчезает после перемешивания с DaO, 9,65 (1Н. синглет, -СНО).
П р и м е р 4. 4-Демикарозил-тилозин- оксим диметилацеталь (Id) 2,0 г (2,45 ммоля) диметилацетал 4 -демикарозилтилозина (lid) 20 мл пиридина и 1,38 г (19,86 ммоля) гидрохлорида гидроксиламина перемешивали в токе азота при комнатной температуре в течение 4 ч, после чего продукт выделяли в соответствии с методикой примера 2,
Выход: 1,7 г (83,4%) продукта со следующими характеристиками:
Rf(A) 0,253; Rf(D) 0,599.
YO(Et ОН) Дмакс. 272 нм, log E 4,26.
ИК(КВг) 1705, 1615см 1.
1Н-ЯМР (AMCO-de) д ч/млн: 10,65 (N- СН), исчезает после перемешивания с ЬаО, 3,20 (6Н, синглет, 20-) ОСНз (2).
П р и м е р 5. 4 -Демикарозил-тилозин- оксим (е).
Целевой продукт (Id) примера 4 1,34 г (1,72 ммоля) растворяли в 40 мл смеси 0.1NHCI и CHsCN (2,5:1) и перемешивали в
течение 2 ч при комнатной температуре, после чего продукт выделяли в соответствии с методикой примера 3.
Сырой продукт (1.25 г) очищали на колонке с силикагелем.
Выход: 0,95 г (70,3%) продукта со следующими характеристиками:
Rf(A) 0.146; Rf(B) 0,468.
УФ(Е1 ОН) Ямакс. 272 нм, log e 4,26.
1Н-ЯМР (ДМСО-йб)(5 ч/млн: 10,65 (N- ОН), исчезает после перемешивания с D20, 9,65 (Н, синглет.-СНО).
Примерб. Диоксим тилозина (If).
Сырой целевой продукт (la) примера 1 2,93 г (3,15 ммоля) растворяли в 20 мл метанола, после чего добавляли 1,6 мл пиридина и 0,22 г (3,16 ммоля) гидрохлорида гидроксиламина и полученную смесь нагревали с обратным холодильником в токе азота в течение 10ч. После охлаждения к реакционной смеси добавляли 40 мл воды и смесь подщелаиивали 1N раствором NaOH до значения рН 9,0 и далее концентрировали до 1/3 первоначального объема. Суспензию перемешивали в течение 1 ч и фильтровали. Полученный осадок повторно суспендировали в 10 мл воды, перемешивали в течение 10 мин, фильтровали и промывали водой с получением 1,4 г продукта.
Исходный фильтрат и отфильтрованные промывные жидкости объединяли и экстрагировали хлороформом. Объединенные экстракты промывали водой и сушили над К.2СОз с образованием 0,7 г продукта.
Общий выход: 2,1 г (70,6%) продукта со следующими характеристиками:
И К (KB г) 1705, 1630см 1.
УФ (Et ОН) .. 272 нм. log Ј 4,2.
1Н-ЯМР СДМСО-de) д ч/млн, 10,66 и 10,11 (2х N-OH) исчезает после перемешивания с D20.
Пример. Реломицин оксим (Ig).
Реломицин (Не) 15 г, (16,6 ммоля) растворяли в 75 мл пиридина, после чего добавляли гидрохлорид.гидроксиламина 5,64 г (81,2 ммоля), полученную смесь перемешивали в токе азота в течение 7 ч при комнатной температуре. Сырой продукт (13,8 г) выделяли согласно методике, описанной в примере 6.
Сырой продукт (2,9 г) очищали на колонке с силикагелем. Получали 1,2 г чистого продукта со следующими характеристиками;
Rf (А) 0,302, Rf(C)(CH2Cl2:CH3OH -85:15) 0,462,
УФ (Et ОН) Ямзкс.. 272 нм, log Ј4,21.
И К (KB r) 1700, 1630см.
1Н-ЯМР (flMCO-de) 5 ч/млн; 10,66 (-N- ОН), исчезает после перемешивания с DaO.
13С-ЯМР () д ч./млн: 173,99 (С-1). 160.45 (С-9. ), 137,03(0-11), 135,58(0-13), 134,78 (С-12), 117,07 (С-10), 105,21 (С-1), 100,83(0-1), 95,99 (С-Т).
788 (М -микароз).
Примере. 10,11,12,13-Тетрагидро-ти- лозин-альдоксим (Ih) и 10,11,12,13-тетрагид- ро-тилозин-диоксим (И),
10,11,12,13-Тетрагидро-тилозин (llf) 3,68 г (4,0 ммоля) растворяли в 20 мл метанола, после чего добавляли гидрохлорид гидроксиламина 1,39 г, (20,0 ммоля) и Na2COa 1,06 г, (10,0 ммоля) и полученную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 3 ч. К охлажденной реакционной смеси добавляли 40 мл воды, значение рН устанавливали равным 7,0 с помощью 1N NaOH и смесь экстрагировали хлороформом. Сырой продукт (3,2 г) представлял собой смесь двух соединений, которые можно разделить на колонке с силикагелем (система А).
Выход: 0,95 г (25,4%) более полярного продукта (Ih) со следующими характеристиками:
КГ(В) 0,429.
1Н-ЯМР (ДМСО-с б) (5ч/млн: 10,17 (1М- ОН, С-20), исчезает после перемешивания с DaO.
13С-ЯМР(ДМСО-с б)(5ч./млн.213,40(С-9), 171.22 (С-1) 150.9(0-20), 104.91 (С-1 ). 100,57 (С-f), 96,17 (С-U
М+ 934.
Выход. 0,90 г (23 7%) менее полярного продукта со следующими характеристиками:
Rf(B) 0,366.
1Н-ЯМР (ДМСО-de) 5 ч./млн: 10,62 и 10,17 (2х N-OH), исчезает после перемешивания с DaO.
13С-ЯМР (ДМСО-de) 5 ч/млн: 171,17 (С- 1), 150,79 (С-20), 150,18 (С-9), 104,74 (С-1 ), 100,51 (С-1), 96,11 (С-1).
Mf949.
П р и м е р 9. Диметилацеталь 10,11,12,13-тетрагидро-тилозин-оксима (I J).
Из 4,25 г (4,4 ммоля) 10,11,12,13-тетра- гидро-тилозин-диметилацеталь (llg), растворенного в 20 мл пиридина, и 2,76 г (39,7 ммоля) гидрохлорида гидроксиламина получали 3,5 г сырого продукта в соответствии с методикой, описанной в примере 2.
1,5 г сырого продукта очищали на колонке р силикагелем (система А) с получением 1,0 г чистого продукта со следующими характеристиками:
ИК(КВг)1700, 1620 .
1Н-ЯМР (ДМСО-de) б ч/млн: 10.65 (М- ОН, С-9), исчезает после перемешивания с DaO. 3,23 (6Н, синглет, 20-) ОСНз (2).
13С-ЯМР (ДМСО-с1б) д ч/млн: 171,17 (С- 1), 150,23(0-9).
ГГр и м е р 10. 10,11,12,13-Тетрагидро- тилозин-оксим (Ik).
Из сырого продукта (Ij) примера 9 (2,0 г 2,1 ммоля) 50 мл ацетонитрила, 50 мл воды и 0,2 мл трифторуксусной кислоты согласно методике, описанной в примере 3, выделяли 1,6 г сырого целевого продукта. После очистки на колонке с силикагелем получали 1,2 г (61,2%) продукта со следующими характе- ристиками:
1Н-ЯМР (ДМСО-de) б ч/млн: 10,65 (М- ОН, С-9), исчезает после перемещения с DaO. 9,65 (Н, синглет, -СНО).
13С-ЯМР (ДМСО-de) б ч./млн: 202,72 (С- 20). 171,17 (С-1), 150,18 (С-9).
П р и м е р 11. 10,11.12,13-Тетрагидро- реломицин-оксим (II).
Из 3,68 г (4 моля) 10,11.12.13-тетрагид- ро-реломицина (llh), 20 мл пиридина и 1,38 г (19,86 ммоля) гидрохлорида гидроксиламина в соответствии с методикой примера 2 получали 2,86 г (76,4%) сырого продукта.
Сырой продукт (1,5 г) очищали на колонке с силикагелем (СНС1з:С2НбОН:ЫН4 ОАо, 15%, 85:15:1) (система D), с образованием 1,06 г чистого продукта со следующими характеристиками:
ИК(КВг)1700, 1640см.
1Н-ЯМР (ДМСО-de) д ч/млн; 9,95 (М- ОН), исчезает после перемешивания с DaO.
13С-ЯМР (CDCI3) б ч/млн: 172,30 (С-1), 165.06 (С-9. C-N).
М+ 936.
Формула изобретения Способ получения производных тилози- на общей формулы I
НзСО ОСН3 Ґ
(Щ3
о н3с-н2с
Из f
4 нп«
:снз-°-Чг
CHj
«ft ги
J 0 где R1 - , группа (микарозил) или
СИз водород,
R2 - СНО-группа,о тличающийся тем, что соединение формулы II
НОН йвПг-СНз
ihco оснз V Wi H5J№i --ffi
Г0 НзС-Н1С- впЛг -ОН U GHj CHju
где R1 имеет указанное значение;
Ri2 - СН(ОСНз)2-группа, подвергают реакции оксиминирования действием 1-10 М гидроксиламингидрохлорида в присутствии избытка пиридина или карбоната натрия и, при необходимости, в среде растворителя, такого как спирт, в токе азота в течение от 15 мин до 10 ч при температуре от комнатАнтибактериальная активность in vitro и соединений формулы I
ной до температуры кипения реакционной смеси, и полученное соединение общей формулы I, где R2 - CHfOCHafe-rpynna. деа- цетализируют в среде водного раствора ацетонитрила в присутствии каталитического количества трифторуксусной кислоты или хлористоводородной кислоты при комнатной температуре.
Таблица 1 тилозина (На)
Изобретение касается производных ти- лозина, в частности получения соединений общей ф-лы I: .ОН HjCO ООН} ЭД Htt-(r -0-Hjll , Ь Hrtc -fl Из f A HLf4 О-fu-OR1 CHj «я1или водород; R2 , которые обладают высокой антимикробной активностью, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых более активных веществ указанного класса. Синтез ведут оксимиро- ванием соединения ф-лы (I), где в положении 9 имеется кето-группа, и R2 -СН(ОСНзЬ с помощью 1-10 молей гидроксиламиногидрохлорида в присутствии избытка пиридина или карбоната натрия с использованием, при необходимости, растворителя - спирта в токе азота в течение от 15 мин до 10 ч при температуре от комнатной до кипения. В случае получения соединения с R2 -СН(ОСНз)2 проводят деацетализацию в среде водного раствора ацетонитрила в присутствии каталитического количества трифторуксусной кислоты или HCl при комнатной температуре. Новые вещества малотоксичны и проявляют антимикробную активность выше, чем известные аналоги. 2 табл. VI W О Os W
Штамм
IIIC
На la Jlc Jle If jjt
,$b 6,25 0,78 3,125 6,25 50 0,4 6,25 0,4 0,4 0,78 50
100 100
-315 1,560, 0,786,25 12,5
0,78 3,1251,56 1,56 3,125
1,56 SO 1,56 1,56 50 6,25 50 1,56
0,70 1,56 3,125 3,125 50 0,78 0.7D 0,4 0,78 3,125 6,25 0,4 0,73 0,4 3,125 6,25 25
50
50
П p и м с ч а н и e. lla - тилозин; lie - реломицин; la - альдоксим-ти/юзина} 1C - °«™
тилозина: If - диоксим тилозина; le - оксим 4 -демикароэия-тилоэина, Ig - оксим реломицина; IL - альдоксим 10,11,12,П-тетрагиДро-тилозина Ii - „иоксим 10,11,12,13-тетрагилро-тилозина; lЈ - оксим «..
II - ЛИ°КСИМ IU, I I , It, 1Л-ГС1М01 «Н -г . я,я
тетрагидро-тилозиня; R - устойчив, а полученные значения МИК относятся к 90% испытанных штаммов
100 100
| J | |||
| Med | |||
| Chem., 1972, 15, с | |||
| УСТРОЙСТВО ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ЭНЕРГИИ МОРСКИХ ВОЛН | 1923 |
|
SU1011A1 |
