Способ количественного определения фторафура Советский патент 1992 года по МПК G01N21/78 

Изобретение относится к фармацевтической химии, преимущественно к анализу лекарственных веществ гетероциклического ряда.

Фторафур-Н -(2-Фуранидил-5-фтор- урацил) - цитостатический препарат, относящийся к группе антиметаболитов.

Известны броматометрический метод, микробиологический метод, основанный на способности фторафура подавлять рост Streptococcus faecal is штамм

543.

Недостатком этих способов является неспецифичность и невысокая чувствительность, а при микробиологическом определении - трудоемкость, громоздкость и необходимость в создании специальных условий.

Наиболее- близким по технической сущности к достигаемому результату является способ определения фторафура по поглощению света в УФ-области спектра.

Недостаток способа - невысокая чувствительность и отсутствие специфичности вследствие того, что раствор фторафура бесцветен, а поглощение УФ-света в области 270 нм не отличает его от других веществ, способных поглощадь свет в этой области спектра.

Цель изобретения - повышение чувствительности, точности и специфичности определения фторафураs а также его лекарственных форм.

СО

ю ю

4

ОЭ

Поставленная цель достигается созданием условий для полного взаимодействия минимальных количеств фторафура с резорцином и получение окрашенного соединения, избирательно поглощающего свет в УФ-области спектра.

Сущность способа заключается в том, что под воздействием концентрированной серной кислоты при нагревании происходит разложение фторафура до тетрагидрофурана и 5-фторурацила. Тетрагидрофуран окисляется до янтарного ангидрида, который конденсиру- ясь, с резорцином образует промежуточное соединение. Избыток раствора гидроксида калия разрушает его, при этом образуется вещество желтого цве ta, имеющее хиноидное строение, способное при облучении УФ-светом проявлять зеленую флуоресценцию.

По сравнению с известными предлагаемый способ позволяет быстро и надежно определять препарат в концентрациях от 0,5 мкг в 1 мл и выше в субстанции, лекарственных формах, а также в извлечениях их внутренних органов и в биологических жидкостях.

Преимущества спектрофотометричес- кого метода количественного определения фторафура видны из таблицы.

Способ осуществляют следующим разом.

В термостойкие плоскодонные колбы, вместимостью 50 мл вносят от 0,1 до 2 мл 0,01%-ного водного раствора фторафура, прибавляют по 0,4 мл 2,5%-ного раствора резорцина и выпаривают смесь на водяной бане. К сухим остаткам прибавляют по 0,5 мл концентрированной серной кислоты | марки х.ч. и нагревают колбы на элек-1 троплитке, накрытой асбестовой сеткой при TeMnepajype 130°С в течение

60 с. После охлаждения в колбы вносят по 20 мл 10%-ного раствор а гидроксида калия марки х.ч., хорошо перемешивают и определяют оптическую плотность окрашенных в желтый цвет растворов на спектрофотометре в кювете 10 мм при длине волны 275 нм. Окрашивание полученного раствора

Q устойчиво в-течение 1 сут..

Параллельно с определением исследуемых растворов фторафура проводят определение стандартного раствора препарата, с которым проделывают те

5 же манипуляции. Раствором сравнения служат реактивы, используемые при определении препарата, в тех же количествах и подвергшиеся такой же обработке, что и исследуемое вещество.

0 Оптическая плотность окрашенных растворов подчиняется закону Бугера- Ламберта-Бера в пределах концентраций 0,5-ЮО мкг в 1 мл.

Расчет концентраций проводят по

5 формуле

„ По Сет б В Г х .,„.

ист а

где DO - оптическая плотность раст- 0 вора, полученного при обработке исследуемого препарата;

DCT- оптическая плотность раствора, полученного при обработке стандартного раствора препарата;

Сст- концентрация стандартного раствора препарата;

а - количество исследуемого препарата, г, или объем раствора , мл;

б - разведение исследуемого препарата;,

в - объем стандартного раство- ра фторафура, мл;

г - количество препарата, содержащегося в анализируемой лекарственной форме.

5

0

5

Примечание: для приготовления стандартного 0,01%-ного раствора фторафу1 ра в мерную колбу вместимостью 1 л вносят навеску 0,1000 г препарата, прибавляют 2,6 мл 1 -ного раствора

гидроксида калия, перемешивают смесь до растворения фторафура и доводят водой раствор в колбе до метки, повторив перемешивание раствора. Раствор сохраняют в холодильнике.

51

Для определения фторафура во внутренних органах животных, леченных этим препаратом, часть органов гомогенизируют, берут точные навески, обрабатывают 2-3 мл 95%-ного этанола и оставляют на 1 ч при перемешивании Суспензию центрифугируют, спиртовое извлечение отделяют, а осадок вновь обрабатывают этанолом. Процесс извлечения фторафура и отделение белков повторяют, объединенные спиртовые извлечения доводят до определенного объема, отбирают аликвоту и определяют в ней содержание фторафура.

Пример 1. Определение фторафура в %-ном растворе для инъекций,

1 мл раствора из ампулы переносят в мерную колбу, вместимостью 100 мл, доводят содержимое колбы дистиллированной водой до метки, хорошо перемешивают, отбирают из колбы 1 мл раствора в термостойкую колбу н 50 мл, прибавляют 0, мл 2,5%-ного раствора резорцина и выпаривают смесь досуха. К остатку прибавляют 0,5 мл концентрированной серной кислоты и нагревают колбу на электроплитке, накрытой асбестовой сеткой при температуре 130°С в течение 60 с. После охлаждения в колбу вносят 20 мл 10%-ного раствора гидроксида калия, хорошо перемешивают и измеряют оптическую плотность окрашенного в желтый цвет раствора на спектрофотометре в кювете 10 мм при длине волны 275 нм.

Параллельно проводят определение со стандартным раствором фторафура, для чего навеску препарата 0,1000 г вносят в мерную колбу вместимостью 1 л, прибавляют 2,6 мл 1%-ного раствора гидроксида калия, доводят дистиллированной водой до метки, тщател

но перемешивают и для анализа отбирают 1 мл полученного раствора.

i

Раствором сравнения служат реактивы, используемые при определении препарата, в количествах, используемых при определении фторафура, подвергшиеся такой же обработке.

Оптическая плотность окрашенного раствора, полученного при анализе инъекционного раствора фторафура по описанной методике, равна 0,79 оптическая плотность раствора, полученного при анализе стандартного раствора препарата, равна 0,20.

0

5

0

5

0

5

Концентрацию фторафур-л в растворе для инъекций рассчитывают по формуле

х Ох22:0 °1Л:Ш 3 95% х- 0)20-1 js..

П р и м е р 2. Определение фторафура в капсулах по 0, г.

Около 0,25 г (точная навеска) препарата вносят в мерную колбу вмести- Мостью 250 мл, прибавляют 5 мл 0,01 н. раствора гидроксида калия, перемешивают в течение 5 мин и дово4- дят дистиллированной водой содержимое колбы до метки. Колбу с раствором энергетично встряхивают и для отделения от стеарата кальция раствор фильтруют через бумажный фильтр. Первые 30-50 мл фильтрата отбрасывают, отбирают последующие 10 мл, вносят в термостойкую колбу на 50 мл и далее поступают как описано в методике спектрофотометрического определения препарата,

Одновременно проводят определение с 1 мл 0,01%-ного стандартного раствора фторафура.

Оптическая плотность раствора полученного из капсул фторафура, равна 0,196, окрашенного раствора из стандартного 0,01%-ного раствора 0,200. Навеска препарата 0, г. Содержание фторафура в капсуле рассчитано по формуле

X ОЛ2б10,ОЬ2§0:0

4 0,200-0,2 92-10°

П р и м е р 3° Определение фторз- 4Q фура в печени животных

Навески гомогенизированной печени массой 2 г обрабатывают 5 мл 95%-ного этанола, оставляют на 1 ч

при периодическом перемешивании, белки отделяют центрифугированием при 5000 об/мин в течение 10 мин, спиртовые извлечения отделяют, а осадки вновь обрабатывают 5 мл этанола, и эта процедура повторяется рновь Слитые вместе спиртовые извлечения вносят в термостойкие колбы на 50 мл и проводят определение фторафура спектрофотометрическим методом nov приведенной методике. С целью снижения ошибки из-за экстрактивных веществ из печени параллельно проводят те же операции с 2 г печени животных, которым фторафур не вводят. Величи

ны оптическойk плотности растворов, полученных из спиртовых извлечений печени, не содержавшей фторафура, вычитаются из оптической плотности, полученной в результате определения печени, содержавшей фторафур.

Проведено определение фторафура с 1 мл 0,01%-ного стандартного раствора фторафура. Оптическая плотность раствора, полученного в результате анализа гомогената печени с фторафу- ром, за вычетом значения оптической плотности из гомогената, не содержавшего фторафура, равна 0,06; 0,06; и 0,,05. Оптическая плотность раствора, полученного при анализе 0,01%-ного стандартного раствора фторафура равна 0,20. Содержание фторафура в печени рассчитывают по формуле

W г

(1,25 мг).

8

Предлагаемая методика высокочувствительна, специфична, занимает несколько минут, относительная ошибка составляет ±1,5%.

Формула изобретения

Способ количественного определе- ния фторафура, включающий измерение оптической плотности раствора, о т- личающийся тем, что, с целью повышения чувствительности, точности и специфичности определения, анализируемую пробу обрабатывают резорцином, выпаривают, к остатку прибавляют концентрированную серную кислоту, нагревают, после охлаждения добавляют раствор гидроксида калия и измеряют оптическую плотность полученного раствора.

Изобретение относится к аналитической химии, а именТно к анализу лекарственных препаратов гетероциклического ряда - фторафура, и может быть использовано в фармации. Цель изобретения - повышение чувствительности, точности и специфичности определения. Для этого раствор анализируемой пробы обрабатывают резорцином, выпаривают, к остатку добавляют концентрированную серную кислоту, нагревают, после охлаждения обрабатывают гидроксидом калия и измеряют оптическую плотность полученного раствора при 275 нм. Чувствительность 0,5мкг/мл относительная ошибка 1,5%. 1 табл. 9 IB