Способ определения сенсибилизации организма к антигенам белковой природы при патологии желудочно-кишечного тракта Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии,

Целью изобретения является повышение точности и упрощение определения сенсибилизации организма.

Способ осуществляется следующим образом

Многолуночный планшет для иммунологических исследований, изготовленный из материала, обладающего свойством адсорбировать белок на своей поверхности за счет ковалентной связи, обрабатывают специфическим антигеном (опыт) и нейтральным белком (контроль) Адсорбцию проводят путем внесения антигена, разведенного фосфатным буфером (рН 7,2-7,4), до концентрации белка 10-100 вкг/мл в объеме 0,1-0,2 мл и внесением в контрольные лунки аналогичного объема нейтрального белка (для человека - желатин, бычий альбумин), разведенного до концентрации 0,1-0,5%. Планшеты инкубируют при 18-22°С в течение 16-18 в стерильных условиях при периодическом встряхивании, затем растворы антигена и нейтрального белка удаляют и лунки планшета трижды промывают фосфатным буфером. После высушивания планшеты готовы к использованию. Срок хранения, при условии соблюдения стерильности не менее 1 года.

N

00

J о

;чэ

В исследуемой крови определяют исходную концентрацию лейкоцитов. Любым известным способом выделяют культуру лейкоцитов и считают количество клеток в суспензии. После тщательного, но осторожного перемешивания вносят в опытную и контрольную пробы по 0,1-0,2 мл клеточной суспензии с концентрацией лейкоцитов 200-600 клеток/мкл. Планшет герметично закрывают и инкубируют в течение 10-15 мин при 4-6°С, а затем 30-45 мин при 37°С, после чего проводят подсчет несвязавшихся лейкоцитов в опыте и контроле и опреде- ляют число сенсибилизированных лейкоцитов (ЧСЛ) и показатель сенсибилизации организма (ПС) по формулам

ЧСЛ

(Х-УО-(Х-У2) X

к

пг (х-УО-(х-у2).

IIL Х-У2

100,

X - концентрация лейкоцитов в суспензии, используемой в способе;

Уч - количество свободных (несвязавшихся с антигеном)лейкоцитов в контрольной пробе;

У2- количество свободных (несвязавшихся с антигеном) лейкоцитов в контрольной пробе;

К- концентрация лейкоцитов в цельной крови.

При показателях сенсибилизации (ПС) менее 10% констатируют отсутствие сенсибилизации к изучаемому антигену, от 11 до 20% - слабую сенсибилизацию, от 21 до 30% - выраженную, а при 31% и более - сильную сенсибилизацию организма.

Пример. Больной Б-в, 53 года, поступил в клинику с диагнозом; язвенная бо лезнь желудка, активная фаза с болевым и диспептическим синдромами. Рентгенологически определили наличие ниши по малой кривизне желудка, в РТМЛ с антигенами желудка, печени, тонкого и толстого кишечника были установлены показатели индекса миграции лейкоцитов 0,47; 0,85; 0,90; 0,85 соответственно,

Исследование было проведено с тканевыми антигенами желудка, печени, тонкого и толстого кишечника, которые были предварительно адсорбированы в лунках планшета для иммунологических исследований производства Ленинградского завода медицинских полимеров. В качестве нейтрального белка (контроль) использовали желатин для парентерального введения.

Получены следующие результаты:

Учитывая, что для исследования использовалась суспензия лейкоцитов с концентрацией клеток 2,0х102 в 1 мкл.

Сенсибилизация к антигенам желудка:

5чгл (200-52)-(200-94) .

4UI -200

4500 -945 (ю/мкл);

ПС - (200-52)-(200-94) . IILl200 -94

39,6.

Сенсибилизация к антигенам печени:

urn - (200-81 )- (200 -94) 4UI-200

4500 292,5 (ю/„кл);

пг (20° -81 )-(200 -94) 110200-94

- 100 12,3 % ;

Сенсибилизация к антигенам тонкого кишечника:

urn (200 -93)-(200 -94) 4U1 200

4500 22,5 (к//мкл) ;

пг (200 -93)-(200-94)

200-94

100 0,94%,

Сенсибилизация к антигенам толстого кишечника:

и™- (200-89)-(200-94) ЧЫ1 200

4500 112,5 К„кл);

пг (200 -89)-(200 -94) L200-94

,7%.

5

0

Таким образом, проведенные исследования позволили выявить у больного Б-ва наличие сильной сенсибилизации к антигенам желудка, слабой сенсибилизации к антигенам печени и отсутствие сенсибилизации к антигенам толстого и тонкого кишечника, что соответствует данным клинического течения болезни, а также результатам рентгенологического и иммунологического обследований.

Полученные результаты свидетельствуют о высокой точности способа (не менее 95%) и определяют критерии оценки сенсибилизации указанные выше (ПС). Определение абсолютного числа сенсибилизированных лейкоцитов (ЧСЛ) является дополнительным критерием, индивидуальным для каждого больного и позволяет судить о количественной стороне сенсибилизации организма к конкретному антигену.

Главными преимуществами предлагаемого способа являются его точность и простота выполнения, а также ускорение способа.

Формула изобретения Способ определения сенсибилизации организма к антигенам белковой природы при патологии желудочно-кишечного тракта путем оценки связывания сенсибилизированных лейкоцитов больного со специфическим антигеном, отличающийся тем,

5

что, с целью повышения точности и упрощения способа, в лунки планшет для иммунологического анализа, обрабатываемых специфическим антигеном либо контрольным нейтральным белком, вносят суспензию лейкоцитов, инкубируют в течение 10-15 мин, при 4 - б°С и 30-45 мин при 37°С и оценивают связывание по показателю сенсибилизации, при этом рассчитывают процент сенсибилизированных лейкоцитов в исследуемой суспензии и при показателе от 11 до 20% констатируют - слабую, от 21 до 30% - выраженную и свыше 30% - сильную сенсибилизацию.

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для определения сенсибилизации к антигенам белковой природы при патологиях желудочно-кишечного тракта. Целью изобретения является повышение точности и упрощение определения сенсибилизации к антигенам белковой природы при патологии желудочно-кишечного тракта. Поставленная цель достигается тем, что суспензию лейкоцитов больного вносят в планшет для иммунологических исследований, лунки которого предварительно обработаны специфическим антигеном (опыт) и нейтральным белком (контроль). Инкубируют в течение 10-15 мин при 4 - 6°С и 30-45 мин при 37°С. Далее определяют показатель сенсибилизации организма, как процент сенсибилизированных лейкоцитов в исследуемой суспензии. При показателе сенсибилизации менее 10% констатируют отсутствие сенсибилизации организма к исследуемому антигену; от 11 до 20% - выраженную сенсибилизацию; 31 % и более - сильную сенсибилизацию организма. Для проведения исследования достаточно 0,5 - 1,0 мл гепаринизированной крови. Способ характеризуется высокой точностью результатов и экономичностью. 1 табл. СП С

Лунка, №

Адсорбированный антиген

Желудок Печень

Тонкий кишечник

Толстый кишечник

Желатин (контроль)

Количество свободных лейко- цитов в 1 мкл суспензии

52 81 93 89 94