Криопротектор гемопоэтических клеток Советский патент 1992 года по МПК A01N1/02 

Изобретение относится к криобиологии, в частности к низкотемпературному консервированию клеток.

Цель изобретения является повышение сохранности гемопоэтических клеток при их низкотемпературном консервировании.

Цель достигается применением триэти- ленгликоля мол. м. 150 - 150) формулы

НОСН2СН20 - СН2СН20 - С Н2СН2ОН

в качестве криопротектора.

Пример. Гемопоэтические клетки получают из эмбриональной печени 6-12-не- дельных эмбрионов, удаленных из матки во время аборта, путем гомогенизации и фильтрации через систему для переливания крови. Разводят раствором Хэнкса. к полученным 1,5 мл клеток добавляют 10-ный

триэтиленгликоль мол. м. 150 в соотношении 1:1 до получения концентрации в суспензии 5%. Общий объем суспензии с криопротектором составляет 2-3 мл с количеством клеток 10-80хЮ6 в 1 мл, в зависимости от возраста эмбриона. Через 30 мин клетки замораживают на программном за- мораживателе типа УОП 6000000.

Контроль температуры в образце осуществляют медькапелевой термопарой и регистрацией на двухкоординатном самописце Эндим 622.01. Замораживание осуществляют от 20°С до температуры кристаллизации со скоростью 1°С мин, выдерживают 10 мин на плато кристаллизации, затем до - 40°С со скоростью 10°С/мин с последующим погружением в жидкий

4 СО

о

го

азот. Отогрев производят на водяной бане при 37-40°С, Аналогично осуществляют консервирование с криопротектором ПЭО - 400.

После размораживания производят подсчет клеток в камере Горяева и эксплантацию в агаровую среду на заранее подготовленный и вызревший фидер по 100000 ядерных клеток на шесть чашек Петри. Результаты клонирования подсчитывают на постоянных препаратах. Суммарное количество колоний и кластеров (КОЭТМ) и со0

хранность КОЕ-ГМ после консервирования с криопротекторами ТЭГ-150 и ПЭО-400 представлены в таблице,

Из приведенных в таблице данных следует, что после замораживания клеток с ТЭГ-150 их сохранность на 90% выше по сравнению с известным.

Формула изобретения Применение триэтиленгликоля мол, м.

150 в качестве криопротектора гемопоэтических клеток.

Использование: криобиология, медицина. Сущность изобретения: для консервирования гемопоэтических клеток при низкой температуре в качестве криопротектора применяют триэтилентиколь. 1 табл.