Способ консервирования клеток @ @ @ -7 Советский патент 1984 года по МПК C12N1/00 

о со со

1 11

Изобретение относится к микробиологии и может найти применение при 1)роизводстве гиббереллина, используемого в качестве кормовой добавки в животноводстве.

Известен способ низкотемпературного консервирования микроорганизмов с помощью защитной среды, содержащей 10-50% глицерина, 5-20% сахарозы и 10% буфера 1 .

Однако этот способ не обеспечивает высокой жизнеспособности клеток Pusarium moniliforme Pg-7, так как при наличии в защитной среде лимоннокислого натрия и при некотролируемой скорости охлаждения жизнеспособность клеток снижается.

Известен способ низкотемпературного консервирования бактерий, заключающийся в том, что микробные суспензии замораживают до -19бС со . скоростью 400С/мнн под защитой криопротекторов глицерина или полиэтиленоксида мол.в. 400 в концентрациях 5-10% 2 .

Однако известный способ не обеспечивает высокой жизнеспособности клеток Fusarium moniliforrae Pg-7. При консервировании под защитой ПЭО-400 жизнеспособность клеток 1,2% под защитой глицерина 50%.

: Цель изобретения - повьшение жизнфспособности клеток Fusarium monili forme Pg-7.,

Указанная цель достигается тем, что клетки Fusarium moniliforme Pg-7 замораживают со скоростью 1-2°С/мин от 15-20°С до (-70) - (-90)°С в среде криопротекторов 1 3%-ной сахарозы, или 1-3%-ного глицерина, или 1-5%-ного диметилсульфоксида.

Способ осуществляют следующим образом.

Клетки Fusarium moniliforme Pg-75 отмытые от ростовой среды, ресуспендИруют в 1-3%-ном растворе глицерина или в 1-5%-ном растворе ДМСО, или в 1-3%-ном растворе сахарозы. После 10-15-минутной экспозиции в защитной среде образец охлаждают от 15-20 0 до (-70) - (-90)°С со скоростью 12°С/мин. Затем образец погружают в жидкий азот. Отогревают образец на водяной бане при 28-30°С.

Пример 1. Образцы клеток Fusarium moniliforrae Pg-7 в объеме 1,5 мл, отмытые от ростовой среды (среды Чапека), ресуспендировали в 3%-ном водном растворе глицерина.

07992

Исходная концентрация жизнеспособных клеток в пробе составила (1,7 + 1 0,1425) to клеток/мл. После 15-минутной экспозиции в защитной среде 5 образец охлаждения от 20 до -90°С со скоростью 1 с/мин. Затем образец погрузили в жидкий азот. После хранения в жидком азоте в течение 2 лет образцы отогрели на водяной при

10 , Оценку качества клеток Fusari- urn moniliforme Pg-7 проводили по. количеству жизнеспособных клеток в образцах, морфологической сохранности клеток чашечным методом. Количество

15 жизнеспособных клеток Fusarium moniliforme Pg-7 после хранения в течение 2 лет (1,7iO,2234)10 клеток/мл, т.е. 100%-ная жизнеспособность клеток.

20 Пример 2. Клетки Fusariun moniliforme Pg-7 в объеме 1,5 мл, отмытые от ростовой среды, ресуспендировали в 3%-ном растворе сахарозы. Исходная концентрация клеток в об25 разце (1 ,710, t435)-10 клеток/мл.

После 10 минутной экспозиции .образец охлаждали от 15 до -70°С со скоростью 1°С/мин. Затем образец погрузили в жидкий азот. После хранения в жвдQ ком азоте в течение 2 лет образцы отогрели: на водяной бане при 28°С. Количество жизнеспособных клеток (1,7±0,3013)10 клеток/мл.

Пример 3. Образцы клеток

Fesarium moniliforme Pg-7 в объеме 1,5 мл, отмытые от ростовой среды (среды Чапека), ресуспендировали в 5%-ном водном растворе диметилсульфок;сида (ДМСО). Исходная концентрация

д клеток в образце (1 ,710,2661) «Ю клеток/мл. После t2-минутной экспозиции образец охладили от 18 до -85°С со скоростью 2 С/мин, Затем образец погрузили в жидкий азот. После хранения образца в жидком азоте в течение 2 лет его отогревали на водяной бане при 28°С. Количество жизнеспособных клеток в образце после хранения 1,7 0,2804 10 клеток/МП или 100%.

В таблице показано влияние скорости охлаждения и концентрации криопротекторов на жизнеспособность клеток Fusarium moniliforme Pg-7 Исходная 5 концентрация клеток 1,7.-10.

Из таблицы видно, что высокая жизнеспособность достигается при охлаждении со скоростью 1-2 С в MHHyrv при концентрации 1-3% глицерина, либо 1-3% сХарозы, либо 1-5% диметилсульфоксида.

Таким образом, преимуществом предлагаемого способа является то, что оН обеспечивает 100%-ную жизнеспособность клеток.

СПОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ КЛЕТОК FUSARIUM MONILIFORME Pg-7 путем замораживания в среде криопротектора, отличающийся тем, что, с целью повьшения жизнеспособности клеток, замораживание производят со скоростью 1-2 С в мин от 1520°С до (-70) - (-90)С, а в качестве криопротектора используют 1-3%-ный раствор сахарозы, или 1-5%-ный раствор диметилсульфоксида, или 1-3%-ньй раствор глицерина.