Посевная питательная среда для получения аминогликозидного антибиотического комплекса Советский патент 1992 года по МПК C12P19/50 

Изобретение относится к микробиологической и медицинской промышленности, в частности к способу получения аминогликозидного антибиотического комплекса, со- стоящего из карбамоилтобрамицина (тобрамицин - медицинский препарат, представляет интерес в химиотерапии инфекций, обусловленных грамотрицательны- ми бактериями, в том числе Ps. aeruginosa), карбамоилканамицина и апрамицина (применяется в ветеринарии при лечении желудочно-кишечных заболеваний крупного рогатого скота и свиней).

Известны различные посевные питательные среды для получения аминогликозидного антибиотического комплекса, содержащего тобрамицин и апрамицин.

Наиболее близким к изобретению является процесс, согласно которому вегетативный посевной материал культуры Streptomyces cremeus subsp. nebramycini выращивают на посевной среде следующего состава, мас.%: кукурузный экстракт 2,0; глицерин 2,0; хлористый аммоний 0,2; хлористый натрий 0,3; мел 0,5; животный жир 0,75; водопроводная вода остальное.

Недостатком прототипа является низкая антибиотическая активность культу- ральной жидкости в конце ферментации.

Целью изобретения является увеличение антибиотической активности культу- ральной жидкости.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве источников углерода, азота и фосфора используют соевую муку и глюкозу при следующих количественных соотношениях компонентов, мас.%:

Соевая мука2,4 - 2,6

Глюкоза0,9 - 1.1

Мел0,4 - 0,6

Животный жир0,65 - 0,85

ВодаОстальное.

Соевая мука является источником углерода, азота, фосфсра, микроэлементов. Глюкоза является легкоутилизирующимся источником углерода. Использование этих двух компонентоЕ в заданных пределах позволяет получить в посевной среде опти(Л

С

-ч со ел со о VI

мальное соотношение углерод:азот, что приводит к увеличению антибиотической активности культуральной жидкости. Применение этих двух компонентов в заданных соотношениях позволяет исключить из состава среды дефицитный дорогостоящий глицерин и кукурузный экстракт, который не является стандартным сырьем.

Пример 1 (по известному способу). В качестве объекта исследования используют культуру Streptomyces cremeus subsp. nebramycini (штаммы 2242, 9871). Вегетативный инокулят выращивают при 37±1°С в течение 24 ч в колбах на качалке с числом оборотов 240 об/мин и в посевном аппарате вместимостью 7 л (коэффициент заполнения 0,7) с числом оборотов мешалки 150 об/мин на среде следующего состава, мас.%: глицерин 2,0; кукурузный экстракт 2,0; животный жир 0,75; хлористый аммоний 0,2; хлористый натрий 0,3; водопроводная вода остальное; рН среды до стерилизации 7,4+1,0.

Посевной материал используют при проведении ферментации в аппаратах вместимостью 30 л (коэффициент заполнения 0,5) и в колбах (N/750100 мл среды) на качалке с числом оборотов 240 об/мин, добавляя его в количестве 2% от объема культуральной жидкости. Ферментации проводят при 37 ± ±1°С на регламентной ферметационной среде следующего состава, мас.%: мука соевая 3,5; глюкоза 1,5; животный жир 1,5; хлористый аммоний 0,6; сернокислый магний 1,1; мел 0,7; водопроводная вода остальное, рН среды 6,2 0,1. Количество подаваемого воздуха 1 об./1 об. среды в 1 мин, работа мешалки непрерывная, 150 об/мин. Продолжительность ферментации 72 ч.

Антибиотическую активность культуральной жидкости определяют методом диффузии в агар с использованием тест- культуры Bacillus subtilis штамм 6633 и выражают в единицах на 1 мл. Суммарная антибиотическая активность культуральной жидкости 2800 мкг/мл для штамма 9871 и 1400 мкг/мл для штамма 2242.

Пример 2. Вегетативный инокулят продуцента Streptomyces cremeus subsp. nebramycini (штаммы 2242,9871) выращивают по примеру 1 на среде следующего состава, мас.%: соевая мука 2,5; глюкоза 1,0;

мел 0,5; животный жир 0,75; водопроводная вода остальное; рН среды до стерилизации 6,2±1,0.

При приготовлении этой среды контро- лируют концентрацию фосфора в среде, которая должна быть в пределах 18-20 мг%, в противном случае добавляют фосфат калия. Посевной материал используют на стадии ферментации по схеме примера 1. Сум- марная антибиотическая активность культуральной жидкости составляет для штаммов 9871 и 2242 3340 мкг/мл и 1680 мкг/мл соответственно.

Пример 3-9. Биосинтез аминоглико- зидного антибиотического комплекса проводят по примеру 2.

Концентрации ингредиентов посевной среды и антибиотические активности куль- туральных жидкостей представлены в таб- лице.

Концентрации мела и жира в пределах 0,4-0,6 и 0,65-0,85 мас.%-соответственно, устанавливаемые исходя из их оптимального действия на стабилизацию рН и пенога- шение культуральной жидкости, не оказывают заметного влияния на активность культуральной жидкости.

Из приведенной таблицы следует, что оптимальными являются концентрации му- ки соевой и глюкозы 2,4-2,6 и 0,9-1,1 мас.% соответственно. При этих значениях ингре- диентов активность культуральной жидкости возрастает на 20%, что приводит к увеличению выхода антибиотического ком- плекса и соответственно к снижению его себестоимости.

Формула изобретения Посевная питательная среда для получения аминогликозидного антабиотиче- ского комплекса с помощью продуцента Streptomyces cremeus subsp. nebramycini, содержащая источники углерода, азота, фосфора, мел, жир животный и воду, отличающаяся тем, что, с целью увеличения антмбмо- тической активности культуральной жидкости, в качестве источников углерода, азота и фосфора используют соевую муку и глюкозу при следующих количественных соотношениях компонентов, мас.%: Соевая мука2,4-2,6

Глюкоза0,9-1,1

Мел0,4-0,6

Жир животный0,65 - 0,85

ВодаОстальное

Использование: микробиологическая и медицинская промышленность, способ получения аминогликозидного антибиотического комплекса. Сущность изобретения: посевная питательная среда для получения аминогликозидного антибиотического комплекса с помощью продуцента Streptomyces cremeus subsp. nebramycini, содержащая источники углерода, азота, фосфора и соли. Применение посевной среды позволяет увеличить активность культу- ральной жидкости на 20% за счет использования соевой муки и глюкозы вместо дорогостоящего глицерина и кукурузного экстракта. 1 табл.