Способ получения аминогликозидного антибиотического комплекса Советский патент 1992 года по МПК C12P19/50 

Изобретение относится к микробиологической и медицинской промышленности. в частности к способу получения аминогли- козидного комплекса, состоящего из карба- моилтобрамицина (тобрамицин медицинский препарат представляет интерес в химиотерапии инфекций, обусловленных грамотрицательными бактериями, в том числе Ps. aerugihosa), карбамоилканамици- на и апрамицина (применяется в ветеринарии при лечении желудочно-кишечных заболеваний крупного рогатого скота и свиней).

Известны способы получения антибиотического комплекса, содержащего тобрамицин и апрамицин.

Наиболее близким к изобретению является способ, согласно которому вегетативный посевной материал культуры Streptomyces cremeus subsp. nebramycini выращивают .на посевной среде следующего состава, мас.%: кукурузный экстракт 2,0: глицерин 2,0; хлористый аммоний 0,2; хлористый натрий 0,3: мел 0,5; животный жир 0,75.

Процесс ферментации ведется на среде следующего состава, мас.%: мука соевая 3.5: глюкоза 1,5: животный жир 1.5; хлористый аммоний 0,6; сернокислый магний 1.1: мел 0.7. водопроводная вода остальное.

До начала процесса ферментации в среду вносят сернокислый марганец в концентрации 0,025%. Количество подаваемого воздуха составляет один объем на один объем среды в 1 мин. работа мешалки непрерывная с числом оборотов 150 об/мин.

Недостатком известного способа является низкая антибиотическая активность культуральной жидкости в конце ферментации.

Целью изобретения является увеличение антибиотической активности культуральной жидкости.

Поставленная цель достигается тем, что сернокислый марганец вносится на стадии ферментации не сразу, а через 30-36 ч роста, в течение вторых суюк ферментации, когда идет интенсивное накопление биомассы.

Ч

W

ел

W

о ю

процент насыщения кислорода в культу- ральной жидкости поддерживается на уровне 6-10%.

Пример 1 (по известному способу). В качестве объекта исследования используют культуру Streptomyces cremeys subsp. nebramycinl (штаммы 2242, 9871). Вегетативный инокулят выращивают при 37±1°С в течение 24 ч в колбах на качалке с числом оборотов 240 об/мин и в посевном аппарате вместимостью 7 л (k3an. 0,7), с числом оборотов мешалки 150 об/мин на среде следующего состава, мас.%: глицерин 2,0; кукурузный экстракт 2,0; животный жир 0,75; хлористый аммоний 0,2; хлористый натрий 0,3; мел 0,5; водопроводная вода остальное, рН среды до стерилизации 7,4 ±0,1.

Посевной материал (рН 5,5-7,0), не содержащий посторонней микрофлоры, в количестве 2% от объема культуральной жидкости используют при проведении ферментации при 37±1°С в аппаратах вместимостью 30 л (kaan.r 0,5) и в колбах ( 100 мл среды; Vioo 25 мл среды) на качалке с числом оборотов 240 об/мин на среде следующего состава, мас.%: соевая мука 3,5; животный жир 1,5; глюкоза 1,5; хлористый аммоний 0,6; сернокислый магний 1,1; мел 0,7; водопроводная вода остальное, рН среды 6,2 ±0,1.

До начала процесса ферментации в среду вносят раствор сернокислого марганца до конечной концентрации 0,025%.

Продолжительность ферментации 72 ч. Антибиотическую активность культуральной жидкости определяют методом диффузии в агар с использованием тест-культуры Bacillus subtllis штамм 6633 и выражают в единицах на 1 мл. Суммарная антибиотическая активность культуральной жидкости 2800 мкг/мл (для штамма 9871 и 1400 мкг/мл для штамма 2242).

Примеры 2-14. Вегетативный инокулят культуры Streptomyces cremeus subsp. nebramecini как в примере 1. Посевной материал культивируют на ферментационной известной среде (примеры 1-7) и на среде, содержащей нетрадиционные виды сырья (примеры 8-14). Время внесения сернокислого марганца в среду варьируют.

Полученные данные по влиянию времени внесения сернокислого марганца вереду на антибиотическую активность культуральной жидкости представлены в таблице.

Из таблицы следует, что оптимальным временем внесения сернокислого марганца является 30-36 ч роста культуры. Внесение сернокислого марганца в культуральную

жидкость на эти часы ферментации приводит к увеличению антибиотической активности культуральной жидкости на 20% по сравнению с прототипом.

Пример 15. Процесс ферментации

проводят,как в примере 1. В течение вторых суток ферментации, когда удельная скорость роста продуцента максимальная, улучшают условия аэрации посредством увеличения расхода воздуха и числа оборотов мешалки, поддерживая процент насыщения кислорода в культуральной жидкости на уровне десяти. Суммарная антибиотическая активность культуральной жидкости на 72 ч ферментации 3360 мкг/мл для штамма

9871 и 1680 мкг/мл для штамма 2242.

Пример 16. Процесс ферментации проводят,как в примере 13, при этом с 24 до 48 ч роста продуцента увеличивают обороты мешалки в аппарате,поддерживая процент

насыщения кислорода на уровне шести, На 36 ч ферментации в культуральную жидкость вносят стерильно раствор сернокислого марганца до конечной концентрации 0,025%. На 72 ч роста суммарная антибиотическая активность культуральной жидкости 4620 мкг/мл для штамма 9871 и 2310 мкг/мл для штамма 2242.

Из полученных данных следует, что увеличение аэрации в течение вторых суток

ферментации приводит к увеличению антибиотической активности культуральной жидкости на 10-20%

Формула изобретения

1. Способ получения аминогликозидного антибиотического комплекса, включающий культивирование продуцента Streptomyces cremeus subsp nebramycini в питательной среде с внесением раствора

сернокислого марганца, отличающий- с я тем, что, с целью увеличения антибиотической активности культуральной жидкости, раствор сернокислого марганца вносят через 30-36 ч после начала культивирования.

2. Способ поп. 1.отличающийся тем, что с 24 по 48 ч культивирования в культуральной жидкости поддерживают уровень насыщения кислорода на уровне 6-10%.

Использование: микробиологическая и медицинская промышленность. Сущность изобретения: культуру Streptomyces cremeus subsp nebramycini выращивают на посевной питательной среде, после чего вносят в питательную среду, содержащую соевую муку, животный жир, глюкозу, хлористый аммоний, мел и водопроводную воду, при этом через 30-36 ч после начала культивирования вносят раствор сернокислого марганца. При этом с 24 по 48 ч культивирования в культуральной жидкости поддерживают насыщение кислородом на уровне 6-10%. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.