Ферментационная питательная среда для получения аминогликозидного антибиотического комплекса Советский патент 1992 года по МПК C12P19/50 

Изобретение относится к микробиологической и медицинской промышленности, в частности к способу получения аминогли- козидного антибиотического комплекса, со- стоящего из карбамоилтобрамицина (тобрамицин - медицинский препарат, представляет интерес в химиотерапии инфекций, обусловленных грамотрицательны- ми бактериями, в том числе Ps. aeruginosa), карбамоилканамицина и апрамицина (применяется в ветеринарии при лечении желудочно-кишечных заболеваний крупного рогатого скота и свиней).

Известны различные ферментационные среды для получения аминогликозидного янтибиотического комплекса, содержащего тобрамицин и апрамицин.

Наиболее близким к изобретению является процесс ферментации с использованием продуцента Spteptomyces cremeus subsp. nebramycini, который ведется на фер- метационной питательной среде следующе- гр состава, мас.%: соевая мука 3,5; глюкоза

1,5; животный жир 1,5; хлористый аммоний 0,6; сернокислый магний 1,1; мел 0,7; водопроводная вода остальное.

Недостатком прототипа является низкая антибиотическая активность культуральной жидкости в конце ферментации.

Целью изобретения является увеличение антибиотической активности культуральной жидкости.

Поставленная цель достигается тем, что ферментационная среда для глубинного культивирования Streptomyces cremeus subsp. nebramycini дополнительно содержит хлопковую муку и свекловичный порошок при следующем соотношении компонентов, мае %:

Соевая мука1,9 - 2,1

Хлопковая мука1,4-1,6

Свекловичный

порошок2,4-2,6

Сернокислый магний 1,0-1,2

Хлористый аммоний 0,5 - 0,7

Мел0,6 - 0,8

fe

VJ

СО

ел со о

00

Жир животный1,4 - 1,6

ВодаОстальное

Хлопковая мука является источником углерода, азота, фосфора, микроэлементов. Свекловичный порошок преимущественно является источником углеводов. Использование этих двух компонентов в заданных пределах позволяет получить в ферментационной среде оптимальное соотношение углерод:азот, что приводит к увеличению антибиотической активности культуральной жидкости.

Применение нетрадиционных видов сырья позволяет исключить пищевое сырье - глюкозу из состава среды и снизить содержание соевой муки в среде.

Пример 1 (по известному способу). В качестве объекта исследования используют культуру Streptomyces cremeus subsp. nebramycini (штаммы 2242, 9871). Вегета- тивный инокулят выращивают при 37±1°С в течение 24 ч в колбах на качалке с числом оборотов 240 об/мин и в посевном аппарате вместимостью 7 л (коэффициент заполнения 0,7) с числом оборотов мешалки 150 об/мин на среде следующего состава, мас.%: глицерин 2,0; кукурузный экстракт 2,0; жир животный 0,75; хлористый аммоний 0,2; хлористый натрий 0,3; мел 0,5; водопроводная вода остальное. рН среды до стери- лизации 7,4±0,1.

Посевной материал используют при проведении ферментации в аппаратах вместимостью 30 л (коэффициент заполнения 0,5) и в колбах (VvsolOO мл среды) на качал- ке с числом оборотов 240 об/мин, добавляя его в количестве 2% от объема культуральной жидкости. Ферментации проводят при 37±1°С на регламентной ферментационной среде следующего состава, мас.%: соевая мука 3,5; глюкоза 1,5; животный жир 1,5; хлористый аммоний 0,6; сернокислый магний 1,1; мел 0,7; водопроводная вода остальное, рН среды 6,2±0,1. Количество подаваемого воздуха 1 объем на 1 объем среды в 1 мин; работа мешалки непрерывная, число оборотов 150 об/мин. Продолжительность ферментации 72 ч.

Антибиотическую активность культуральной жидкости определяют методом диффузии в агар с использованием тест- культуры Вас. subtilis штамм 6633 и выражают в единицах на 1 мл. Суммарная антибиотическая активность культуральной жидкости 2800 мкг/мл для штамма 9871 и 1400 мкг/мл для штамма 2242.

Пример 2. Процесс ферментации продуцента Streptomyces cremeus nebramycini проводят по примеру 1. В качестве ферментационной среды используют среду следующего состава, мас.%: соевая мука 2,0; хлопковая мука 1,5; свекловичный порошок 2,5; сернокислый магний 1,1; хлористый аммоний 0,6; мел 0,7; животный жир 1,5; водопроводная вода остальное.

Суммарная антибиотическая активность культуральной жидкости 3500 мкг/мл для штамма 9871 и 1750 мкг/мл для штамма 2242.

Пример 3-14. Биосинтез аминоглико- зидного антибиотического комплекса проводят по примеру 2.

Концентрации ингредиентов ферментационной среды и значения антибиотической активности культуральных жидкостей представлены в таблице.

Концентрации мела и жира в пределах 0,6-0,8 и 1,4-1,6 мас.% соответственно, устанавливаемые исходя из их оптимального действия на стабилизацию рН и пеногаше- ние культуральной жидкости, не оказывают заметного влияния на активность культуральной жидкости.

Из приведенной таблицы следует, что оптимальными являются такие концентрации ингредиентов, мас.%: соевая мука 1,9- 2,1; хлопковая мука 1,4-1,6; свекловичный порошок 2,4-2,6; сернокислый магний 1,0- 1,2; хлористый аммоний 0,5-0,7. При этих значениях ингредиентов активность культуральной жидкости возрастает на 25%, что приводит к увеличению выхода антибиотического комплекса и соответственно к снижению его себестоимости. Кроме того, предлагаемая среда позволяет использовать нетрадиционные виды сырья. Формула изобретения Ферментационная питательная среда для получения аминогликозидного антибиотического комплекса с помощью продуцента Streptomyces cremeus subsp. nebramycini, содержащая соевую муку, мел, хлористый аммоний, сернокислый магний, жир животный, воду, отличающаяся тем, что, с целью увеличения антибиотической активности культуральной жидкости, она дополнительно содержит хлопковую муку и свекловичный порошок при следующих соотношениях компонентов, мас.%: Соевая мука1,9-2,1

Хлопковая мука1,4-1,6

Свекловичный

порошок2,4-2,6

Сернокислый магний 1,0-1,2 Мел0,6-0,8

Хлористый аммоний 0,5 - 0,7 Жир животный1,4-1,6

ВодаОстальное.

Использование: в микробиологической и медицинской промышленности для получения аминогликозидного антибиотического комплекса, состоящего из карбамоилтобрамицина,карбамоилканамицина и апрамицина. Сущность изобретения: процесс ферментации продуцента Streptomuces cremeus subsp. nebramycini проводят при 37±1°С в течение 24 ч при перемешивании и аэрации на среде, содер- жащей источники углерода, азота, фосфора и минеральные соли. Ферментационная среда содержит нетрадиционные виды сырья: хлопковую муку и свекловичный порошок. Активность культуральной жидкости увеличивается на 25%. 1 табл.