Показать метаданные Скрыть метаданные

(19)

(11)

2 352 631

(13)

(51)

МПК

C12N1/20(2006-01-01)

C12R1/01(2006-01-01)

C12P1/06(2006-01-01)

(21) (22)

Заявка

2007110922/13, 2007-03-26

(24)

Дата начала отсчета патента

2007-03-26

(22)

дата подачи заявки

2007-03-26

(45)

опубликовано

2009-04-20

(72)

авторы

Лапчинская Ольда АнастасьевнаФедорова Галина БорисовнаПогожева Валерия ВладимировнаПреображенская Мария НиколаевнаКатруха Генрих СтепановичПономаренко Валерий ИвановичЛаврова-Балашова Майя ФедоровнаФиличева Валентина Андреевна

(73)

патентообладатели

Государственное Учреждение Научно-Исследовательский Институт По Изысканию Новых Антибиотиков Имени Г.Ф. Гаузе Рамн Ниина Им.Г.Ф.Гаузе Рамн)

(56)

Документы, цитированные в отчете о поиске

ГУАЗЕ Г.Ф, БРАЖНИКОВА М.Г., ЛАЙКО А.Ви дрЭремомицин - новый антибиотик из группы циклических гликопептидовАнтибиотики и медицинская биотехнология, 1987, т.32, N8, с.571-575.

ШТАММ Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-807-ПРОДУЦЕНТ ЭРЕМОМИЦИНА Российский патент 2009 года по МПК C12N1/20 C12R1/01 C12P1/06

Описание патента на изобретение RU2352631C2

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается нового штамма актиномицета, образующего антибактериальный антибиотик эремомицин.

Антибиотик эремомицин по химическому строению относится к полициклическим антибиотикам группы ванкомицина-ристомицина, которые являются антибиотиками резерва для лечения тяжелых инфекций.

Структура антибиотика эремомицина сульфат

Эремомицин эффективен при лечении заболеваний, вызываемых грамположительными возбудителями, включая метициллинрезистентные штаммы золотистого стафилококка (MRSA) и анаэроба Clostridium difficile - возбудителя псевдомембранного колита.

Известен штамм Amycolatopsis orientalis subsp. eremomycini ВКПМ-S892 - продуцент антибиотика эремомицина /1/, принятый в качестве прототипа. Недостатком данного штамма является невысокий уровень биосинтетической активности - не более 1800 мг эремомицина на 1 л ферментационной жидкости.

Сущность изобретения состоит в том, что получен новый штамм-продуцент эремомицина путем мутантного преобразования свойств известного штамма Amycolatopsis orientalis subsp. eremomycini ВКПМ-S892 в результате последовательного трехступенчатого воздействия метилнитрозогуанидина, ультрафиолетовых и гамма-лучей ⁶⁰Со на исходный штамм и отбора оригинального мутантного штамма с повышенной антибиотической активностью.

Полученный новый штамм депонирован в коллекции культур под номером штамм ВКПМ-Ас-807.

Штамм Amycolatopsis orientalis subsp. eremomycini ВКПМ-Ас-807 обладает повышенной продуктивностью эремомицина (2300 мг в 1 л ферментационной жидкости) и характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиологическими признаками.

Культурально-морфологические признаки штамма Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-807

Температура 28°С; длительность выращивания и изучения таксономических признаков - (7-21) сутки. Споровый посевной материал с десятидневной культуры штамма, выращенной на глюкозоаспарагиновом агаре или на среде №2 Гаузе. Цвет определен по таблице Бондарцева и Праузера (таблица 1).

Морфологические признаки. Гифы воздушного мицелия прямые или извилистые, распадающиеся на элементы различной длины; поверхность спор гладкая.

Физиолого-биохимические свойства. Аэроб. Растет при (24-37)°С; оптимум роста 28°С, желатину разжижает, молоко пептонизирует.Сахарозу инвертирует.Крахмал гидролизует. На клетчатке не растет. Восстанавливает нитраты до нитритов. Меланоидные пигменты не образует при росте на провокационной среде Треснера с лимонно-кислым железом.

Использование источников углерода. Хорошо утилизирует фруктозу, арабинозу, инозит; галактозу, манит, глюкозу; умеренно - лактозу, рамнозу, ксилозу; не утилизирует рафинозу.

Антагонистические свойства. Amycolatopsis orientalis subsp. eremomycini ВКПМ-Ас-807 при росте на агаровых средах умеренно угнетает рост грамположительных бактерий Staphylococcus aureus, Bacillus subfilis. Bacillus mycoides, Micrococcus luteus и не действует на грамотрицательные бактерии Escherichia coli, Comamonas terrigena, Providencia stuartii.

Хранение штамма Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-807

Хранится в виде культуры, лиофилизированной в сахарозожелатиновой среде, в апмулах при (5-7)°С.

Антибиотическая активность штамма Amucolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-807

определяется в культуральной жидкости методом диффузии в агар (трехдозный вариант ГФХ, стр.949) с использованием в качестве тест-микроорганизма Bacillus subtilis 6633.

Штамм Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-807 поясняется следующим примером.

Пример 1. Споровым материалом с мицелием культуры Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-807, выращенной в течение (10-14) суток при 28°С на среде Линденбайна, засевают питательную среду (150 мл в колбах Эрленмейера объемом 750 мл) и выращивают при 28°С в течение (24-36) часов на качалке при (220-240) об/мин.

Состав посевной среды, %:

Глицерин 2,0 Соевая мука 0,5 Калий азотно-кислый 0,1 Натрий хлористый 0,3 Вода Водопроводная рН до стерилизации 7,0-7,2

Среду стерилизуют в течение 30 мин при давлении 0,6 атм при 120°С.

Выросшим мицелием в количестве (5-10)% засевают питательную среду (150 мл в колбах Эрленмейера объемом 750 мл) следующего состава,%:

Глицерин 3,0 Соевая мука 0,5 Калий азотно-кислый 0,1 Натрий хлористый 0,3 Магний серно-кислый 0,01 Глицин 0,0025 Мел 0,2 Вода Водопроводная рН до стерилизации 6,8-7,0

Ферментацию проводят при 28°С в течение (120-144) часов на качалке при (220-240) об/мин. Эремомицин накапливается в культуральной жидкости продуцента. Антибиотическую активность определяют методом диффузии в агар с использованием тест-культуры Bacillus subtilis ATCC 6633. Содержание эремомицина в культуральной жидкости штамма Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-807 к концу ферментации составляет 2300 мкг/мл.

С целью выделения эремомицина проводят его сорбцию из нативного раствора (отфильтрованной от мицелия культуральной жидкости) на карбоксильном катионите КБ-2 в солевой форме, элюируют раствором аммиака, элюат нейтрализуют, обеззоливают, пропускают через сорбент ПТФЭ, антибиотик с сорбента вытесняют водой, концентрируют в вакууме до содержания эремомицина (120-140) мг/мл и кристаллизуют в форме сульфата.

Эремомицина сульфат, полученный путем биосинтеза новым штаммом - продуцентом Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-807, представляет собой белый кристаллический порошок, легко растворимый в воде и нерастворимый в органических растворителях. Показатели, характеризующие эремомицина сульфат (физико-химические свойства, антибактериальная активность и токсичность) полностью соответствует показателям, которые определены для эремомицина сульфата, защищенного патентом РФ №2110578 (брутто-формула: C₇₃H₈₉N₁₀C1O₂₆×H₂SO₄. Мол. масса 1656 а.е.м.

УФ-спектр: λ_max(0,01 н. HCl) нм (Е% _{1 см}) 280 (42); λ_max(0,01 н. NaOH) нм (Е^10,0 см) 300 (60);

ИК-спектр (KBr), ν_max, см^-1: 3350, 1650,1500, 1200-1000; [α]²⁰D=-100°(с 1,0, H₂O).

Выход целевого продукта - очищенного (97% чистоты) кристаллического препарата эремомицина сульфата от содержания в нативном растворе составляет (60,0-65,0)%.

Таким образом, создан новый мутантный штамм Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-807, отличающийся от известного по характеру роста на диагностических агаровых средах, по степени усвоения источников углерода (инозит, галактоза) и по способности антибиотикообразования, которая на 78% превосходит активность штамма-прототипа Amycolatopsis orientalis ВКПМ-S892 (Таблица 2).

Антибиотическая активность нового штамма Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-807 составляет 2300 мкг/мл. Использование нового штамма Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-807 как продуцента для биосинтеза эремомицина позволяет увеличить выход целевого продукта. Выход эремомицина составляет 1,2 г с 1 литра нативного раствора.

Источники информации

Патент RU 2110578 С1 от 18.06.97

Таблица 1. Культурально-морфологические признаки штамма Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-807 Агаровая среда Рост воздушно го мицелия* Цвет мицелия Растворимый пигмент Воздушного Субстратного №1 Гаузе Нет Белый (Д-1) Бесцветный Нет Овсяная + - Белый (Д-1) Бесцветный Нет Чапека Нет Белый (Д-1) Бесцветный Желтоватый Глюкозоаспарагиновая + - От белого (Д-1) до желтоватого (Ж-1) Желтый (Ж-6) Желтоватый (Ж-6) Линденбайна (глицерин-нитратная) + + Белый (Д-1), Бесцветный Желтоватый (Ж-6) Глюкозонитратная Нет Белый (Д-1) Бесцветный нет №2 Гаузе + - Треснера (с пептоном и лимонно-кислым железом) Меланоидные пигменты отсутствуют */++- умеренный; +- слабый.

Похожие патенты RU2352631C2

название	год	авторы	номер документа
Штамм Amycolatopsis umgeniensis - продуцент антибиотика эремомицина	2018	Лапчинская Ольда Анастасьевна Катруха Генрих Степанович Терехова Лариса Петровна Погожева Валерия Владимировна Филичева Валентина Андреевна Харитонова Лидия Александровна Лапчинская Мария Юльевна Яковенко Алла Николаевна Пономаренко Валерий Иванович Орлова Галина Ивановна	RU2689699C1
ШТАММ AMYCOLATOPSIS ORIENTALIS SUBSP. EREMOMYCINI ВКПМ-S892 - ПРОДУЦЕНТ АНТИБИОТИКА ЭРЕМОМИЦИНА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА ЭРЕМОМИЦИНА	1997	Бражникова М.Г. Лайко А.В. Федорова Г.Б. Преображенская Т.П. Свешникова М.А. Лапчинская О.А. Сабурова Т.П. Погожева В.В. Ломакина Н.Н. Бердникова Т.Ф. Катруха Г.С. Толстых И.В. Голова Т.П. Архангельская Н.М. Гладких Е.Г. Макарова М.О. Шаповалова С.П. Шепелевцева Н.Г. Филиппосьянц С.Т.	RU2110578C1
Штамм Amycolatopsis orientalis - продуцент антибиотика диметилванкомицина и способ получения антибиотика	2016	Лапчинская Ольда Анастасьевна Катруха Генрих Степанович Погожева Валерия Владимировна Пономаренко Валерий Иванович Филичева Валентина Андреевна Харитонова Лидия Александровна Лапчинская Мария Юльевна Яковенко Алла Николаевна Нифантьев Николай Эдуардович Шашков Александр Степанович Цветков Дмитрий Евгеньевич	RU2633511C1
ШТАММ Amycolatopsis orientalis - ПРОДУЦЕНТ АНТИБИОТИКА ЭРЕМОМИЦИНА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРЕМОМИЦИНА	2016	Джавахия Вахтанг Витальевич Глаголева Елена Викторовна Воинова Татьяна Михайловна Попова Евгения Дмитриевна Овчинников Александр Игоревич Шоболов Дмитрий Львович Балабаньян Вадим Юрьевич Чернобровкин Михаил Геннадьевич	RU2621866C1
ШТАММ AMYCOLATOPSIS FRUCTIFERI SUBSP. RISTOMYCINI - ПРОДУЦЕНТ АНТИБИОТИКА РИСТОМИЦИНА	2008	Лапчинская Ольда Анастасьевна Погожева Валерия Владимировна Филичева Валентина Андреевна Преображенская Мария Николаевна Харитонова Лидия Александровна Пономаренко Валерий Иванович Лаврова-Балашова Майя Федоровна Катруха Генрих Степанович Федорова Галина Борисовна	RU2392325C2
ШТАММ STREPTOALLOTEICHUS CREMEUS SUBSP. TOBRAMYCINI ВКПМ S-1084 - ПРОДУЦЕНТ АПРАМИЦИНА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АПРАМИЦИНА	2007	Лапчинская Ольда Анастасьевна Лаврова-Балашова Майя Федоровна Пономаренко Валерий Иванович Катруха Генрих Степанович Преображенская Мария Николаевна	RU2392311C2
ШТАММ Streptoalloteichus cremeus subsp. tobramycini ВКПМ Ас-1083 - ПРОДУЦЕНТ ТОБРАМИЦИНА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТОБРАМИЦИНА	2010	Лапчинская Ольда Анастасьевна Гладких Елена Георгиевна Погожева Валерия Владимировна Филичева Валентина Андреевна Орлова Галина Ивановна Харитонова Лидия Александровна Лаврова-Балашова Майя Федоровна Пономаренко Валерий Иванович Федорова Галина Борисовна Катруха Генрих Степанович Преображенская Мария Николаевна Макарова Марина Олеговна	RU2433169C1
ШТАММ Streptomyces griseocarneus subsp. bleomycini ВКПМ-S887 - ПРОДУЦЕНТ БЛЕОМИЦИНА A И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА БЛЕОМИЦИНА A	2007	Лапчинская Ольда Анастасьевна Погожева Валерия Владимировна Пономаренко Валерий Иванович Федорова Галина Борисовна Катруха Генрих Степанович Преображенская Мария Николаевна	RU2355758C2
ШТАММ STREPTOMYCES GRISEOCARNEUS SUBSP. BLEOMYCINI ВКПМ-S1086 - ПРОДУЦЕНТ БЛЕОМИЦЕТИНА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА БЛЕОМИЦЕТИНА	2007	Лапчинская Ольда Анастасьевна Погожева Валерия Владимировна Зенкова Валентина Александровна Федорова Галина Борисовна Пономаренко Валерий Иванович Катруха Генрих Степанович Преображенская Мария Николаевна	RU2358008C2
ШТАММ Streptomyces roseolus ВКПМ S-1082 - ПРОДУЦЕНТ ЛИНКОМИЦИНА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИНКОМИЦИНА	2007	Лапчинская Ольда Анастасьевна Погожева Валерия Владимировна Лаврова-Балашова Майя Федоровна Катруха Генрих Степанович Пономаренко Валерий Иванович Преображенская Мария Николаевна	RU2391396C2

Реферат патента 2009 года ШТАММ Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-807-ПРОДУЦЕНТ ЭРЕМОМИЦИНА

Изобретение может быть использовано в медицинской промышленности при производстве антибактериального антибиотика эремомицина сульфата. Штамм Amycolatopsis orientalis subsp. eremomycini ВКПМ-Ас-807 - продуцент эремомицина и может быть использован в качестве источника эремомицина в медицине при лечении тяжелых инфекций. Изобретение позволяет повысить выход эремомицина. 2 табл.

Формула изобретения RU 2 352 631 C2

Штамм Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-807 - продуцент антибиотика эремомицина.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2009 года RU2352631C2

ШТАММ AMYCOLATOPSIS ORIENTALIS SUBSP. EREMOMYCINI ВКПМ-S892 - ПРОДУЦЕНТ АНТИБИОТИКА ЭРЕМОМИЦИНА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА ЭРЕМОМИЦИНА	1997	Бражникова М.Г. Лайко А.В. Федорова Г.Б. Преображенская Т.П. Свешникова М.А. Лапчинская О.А. Сабурова Т.П. Погожева В.В. Ломакина Н.Н. Бердникова Т.Ф. Катруха Г.С. Толстых И.В. Голова Т.П. Архангельская Н.М. Гладких Е.Г. Макарова М.О. Шаповалова С.П. Шепелевцева Н.Г. Филиппосьянц С.Т.	RU2110578C1
АНТИБИОТИК "ЭРЕМОМИЦИН" И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ	1981	Гаузе Г.Ф. Преображенская Т.П. Лайко А.В. Селезнева Т.И. Свешникова М.А. Бражникова М.Г. Федорова Г.Б. Борисова В.Н. Толстых И.В. Прошлякова В.В. Гольдберг Л.Е. Шаповалова С.П. Степанова Э.С.	SU1475150A1
ГУАЗЕ Г.Ф, БРАЖНИКОВА М.Г., ЛАЙКО А.В
и др
Эремомицин - новый антибиотик из группы циклических гликопептидов
Антибиотики и медицинская биотехнология, 1987, т.32, N8, с.571-575.

RU 2 352 631 C2

Авторы

Лапчинская Ольда Анастасьевна

Федорова Галина Борисовна

Погожева Валерия Владимировна

Преображенская Мария Николаевна

Катруха Генрих Степанович

Пономаренко Валерий Иванович

Лаврова-Балашова Майя Федоровна

Филичева Валентина Андреевна

Даты

2009-04-20—Публикация

2007-03-26—Подача