Способ выделения иерсиний Советский патент 1992 года по МПК C12Q1/02 

сл

С

Использование: медицинская микробиология, способы бактериологической диагностики артриров, в частности иерсиниоз- ной этиологии. Сущность изобретения: материал из сустава забирают герметически закрытым шприцом. Разводят его дистилл и- рованной водой (рН 6,8-7,0) в соотношении 1:5. Инкубируют в атмосфере 2,5-4,0% углекислого газа, 15-17% кислорода, относительной влажности 94-100% при 38-40°С в течение 24-48 ч. Выросшие колонии пересевают на плотную питательную среду. Выра- щивают в этих же условиях и идентифицируют по биохимическим тестам. Способ позволяет выделить иерсиний из синовиальной жидкости. Положительный ответ получают на 5-6-й отрицательный - на 2-й день обследования. 3 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к бактериологической диагностике артритов.

Известен способ выделения иерсиний с использованием холодового обогащения, состоящий из взятия материала, накопления материала в буферном 0,85%-ном растворе хлорида натрия, помещении в холодильный шкаф при 6-12°С на 15-21-й день и высеве каждые 3-5 дней на плотные питательные среды с общепринятой идентификацией.

По известному способу выделить иерсиний при посеве синовиальной жидкости не. удается.

Цель изобретения - повышение высева- емости иерсиний.

П р и м е р 1. Синовиальную жидкость забирают в стерильный шприц путем прокола кожи и фасций суставной сумки. Если в шприц попал воздух, его обязательно удаляют. Со шприца, не вынимая поршня, снимают иглу и носик его опускают в расплавленный парафин для полной герметизации. При поступлении шприца в лабораторию его содержимое после снятия парафина выдавли- вают поршнем в пробирку с дистиллированной водой (рН 6,8), предварительной прокипяченной и охлажденной. Со- отношение материала и среды 1:5. Пробирку с посевом закрывают рыхлой ватной пробкой и помещают в эксикатор, на дно которого кладут ватный тампон, обильно смоченный водой, и зажигают белую (парафиновую или стеариновую) свечу. Закрывают крышку эксикатора. Для большей герметизации край крышки смазывают вазелиновым маслом. До угасания свечи следят за сосудом, так как разогретый воздух может приподнять и сдвинуть крышку. После угасания свечи эксикатор с газовой смесью 2,5%, С02,15% 02 и относительной

vl СО 00 00 01

VJ

влажностью 94% помещают в термостат при 38°С. После 24 ч инкубации извлекают пробирку с посевом, не встряхивая ее, берут пипеткой 0,2 мл содержимого из верхней трети и переносят на чашки Петри со слабощелочным агаром. Обе чашки помещают в эксикатор и в том же режиме культивируют 18 ч, затем их извлекают из эксикатора и просматривают.

Изолированные колонии (6-8 шт.) пересевают на слабощелочной агар и инкубируют при обычных условиях 20-24 ч (как в известном способе). Выросшую культуру идентифицируют с сыворотками против иерсиний разных видов и по биохимическим местам.

При исследовании синовиальной жидкости 34 больных иерсиниозом, что подтверждается или выделением культур (I группа) или положительными серологическими тестами (II группа), выделены культуры иерсиний и других микроорганизмов (табл. I).

П р и м е р 2. Синовиальную жидкость берут, как в примере 1. Содержимое шприца засевают в пробирку с дистиллированной водой (рН 6,9) в соотношении 1:5, помещают в анаэростат, наполненный 3,5% С02, 16,0% 02 при относительной влажности 96%, и ставят в термостат при температуре 39 С на 36 ч (далее по примеру 1).

П р и м е р 3. Синовиальную жидкость из сустава получают, как в примере 1, Содержимое шприца засевают в пробирку с дистиллированной водой (рН 7,0) в соотношении 1:5 и помещают в анаэростат с газовой смесью, состоящей из 4,0%, из СОа. 17,0% 02 с относительной влажностью 100%. Посев инкубируют 48 ч при 40°С (далее по примеру 1).

При обследовании 83 больных артритами предлагаемым способом было выявлено 44 культуры разных видов микроорганизмов, 17 из которых идентифицированы после первого высева, остальные - после второго (табл. 2).

Десять культур неидентифицированы вообще. Выделенные иерсиний были определены как энтероколитика и псевдотубер- кулезис (табл. 3).

Таким образом, от 34 больных артритами, у которых в разные сроки бактериологически из испражнений, мочи или крови были выделены иерсиний и (или) серологически выявлены специфические антитела, из синовиальной жидкости было выделено 20 культур иерсиний (58,8%). В том числе, в 5 случаях они были выделены в сочетании с ацинетобактером (табл. 1). У больных артритами с отрицательными результатами бакте- риологических и серологических исследований на иерсиниоз из синовиальной жидкости иерсиний не были выделены ни у одного больного.

Таким образом, способ позволяет в короткие сроки (положительный ответ на 4-5- й день, отрицательный - на 2-й день) выделить иерсиний из синовиальной жидкости больных артритами с положительной гемо-,копро- или уринокультурной или серологическим подтверждением иерсини- оза в 58,8% случаев.

Кроме того, способ прост в исполнении и доступен для бактериологических лабораторий СЭС и больниц.

Формула изобретения Способ выделения иерсиний путем забора синовиальной жидкости, разведения

ее, инкубирования с последующими пересевами и культивированием на плотной питательной среде и идентификацией выделенной культуры, отличающийся тем, что, с целью повышения высеваемости

иерсиний, синовиальную жидкость разводят дистиллированной водой при рН 6,8-7,0 в соотношении 1:5, инкубацию осуществляют в атмосфере 2,5-4,0% углекислого газа, 15-17% кислорода, относительной влажности 94-100% при температуре 38-40°С в течение 24-48 ч и культивирование проводят в тех же условиях.

Таблица 1

Таблица 2

Таблица 3