СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИЕРСИНИОЗА Российский патент 1994 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунобиологической диагностике иерсиниоза.

Известен способ диагностики иерсиниоза путем выделения возбудителя на специальных питательных средах. Однако бактериологическое исследование занимает значительное время (6-10 дней) и требует много сред и средств. Кроме того, отрицательный результат посева еще не исключает иерсиниоз, так как при приеме антибиотиков рост микробов на средах подавляется (Т. И. Дмитровская и др. Иерсиниозы в Казахстане. Алма-Ата, 1984, с. 131-132).

Известен также другой способ диагностики иерсиниоза с помощью определения титра антител по реакции непрямой гемагглютинации. Но титры антител могут достигать диагностически значимых величин на поздних стадиях болезни, т. е. на 15-20 сутки, что снижает эффективность серологической диагностики. (Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1988, N 1, с. 108-109).

Цель изобретения - повышение точности диагностики на ранней стадии заболевания.

Цель достигается тем, что после инкубации смеси исследуемой крови иерсиниозным антигеном в нее добавляют 0,9 мл изотонического раствора хлористого натрия, центрифугируют и в надосадочной жидкости определяют содержание калия, рассчитывают диагностический показатель (ДК) по формуле:
ДК= 100 % , где О - содержание калия в опытной пробе,
К - содержание калия в контрольной пробе и при его значении 46% и более диагносцируют иерсиниоз.

Способ осуществляется следующим образом. В центрифужную пробирку помещают 0,02 мл иерсиниозного антигена, разведенного 5% цитратом натрия. Для контроля в другую пробирку наливают 0,02 мл цитрата натрия. Добавляют в обе пробирки 0,08 мл крови из пальца, взятой микропипеткой, и содержимое перемешивают. Инкубируют 2 ч при 37^оС. Затем в каждую пробирку добавляют по 0,9 мл изотонического раствора хлористого натрия, содержимое перемешивают, центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин, 0,5 мл надосадочной жидкости отсасывают и определяют содержание калия в жидкости. Диагностический коэффициент (ДК) рассчитывают по формуле:
ДК= 100 % , где О - содержание калия в опытной пробе,
К - содержание калия в контрольной пробе.

Способ испытан при иерсиниозе и других лихорадочных заболеваниях. В качестве антигена использован комплекс полисахаридов и липоидов клеток иерсиний.

П р и м е р 1. Больной А. , 12 лет. Диагноз: псевдотуберкулез. 12.04.89 г. у больного из пальца была взята кровь, 0,08 мл крови помещено в пробирку с 0,02 мл антигена из иерсиний, на 5% растворе лимоннокислого натрия (опыт). Параллельно 0,08 мл крови поместили в пробирку с 0,02 мл лимоннокислого натрия (контроль). Пробирки помещали в термостат при 37^оС на 2 ч, затем в обе пробирки добавляли по 0,9 мл изотонического раствора хлористого натрия, пробирки центрифугировали 20 мин при 1500 об/мин, отсасывали 0,5 мл надосадочной жидкости и определяли там содержание калия на пламенном фотометре в соответствии с инструкцией к прибору. Результаты: опытная проба - 17, контрольная проба - 5. Показатель повреждения клеток (ППК)
ППК= 100 = 240 % Д-з: иерсиниоз.

П р и м е р 2. Больная С. , 20 лет. Диагноз: лихорадка Ку. 28.04.89 г. из пальца взята кровь. 0,08 мл крови было помещено в пробирку с 0,02 мл антигена на 5% цитрате натрия, то же количество поместили в пробирку с 0,02 мл 5% цитрата натрия. Дальнейшее выполнение реакции проводили по описанной методике.

Результаты: опытная проба - 12, контрольная - 10.

ППК= 100= 20 %
П р и м е р 3. Здоровый донор К. , 20 лет. 2.03.89 из пальца была взята кровь и 0,08 мл крови было помещено в пробирку с 0,02 мл антигена из иерсиний, то же количество крови поместили с 0,02 мл раствора цитрата натрия. Дальнейшее выполнение реакции проводили по описанной методике.

Результаты: опытная проба 11, контрольная проба - 10.

ППК= 100= 10,0 %
Для обследования были привлечены 14 больных с иерсиниозом, 45 больных с другими лихорадочными состояниями и 12 здоровых доноров. Данные приведены в табл. 1.

С учетом этих величин были рассчитаны показатели диагностической эффективности исследованных тестов. Результаты приведены в табл. 2.

Приведенные данные говорят о том, что наибольшую диагностическую эффективность и специфичность имеет метод ППК.

Предложенный способ прост и достоверен, так как не требует сложного оборудования, а пламенный фотометр имеется в любой клинической лаборатории.

Предложенный способ позволяет диагностировать наличие иерсиниоза на 5% точнее, чем прототип. Использование изобретения позволяет выявлять заболевание на ранней стадии и своевременно начать лечение. (56) Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 1988, N 1, с. 108-109.

Использование: в области медицины, а именно в иммунохимической диагностике иерсиниоза. Сущность изобретения: кровь больного смешивают и инкубируют с иерсиниозным антигеном, после инкубации в смесь добавляют 0,9 мл изотонического раствора хлористого натрия, центрифугируют и в надосадочной жидкости определяют содержание калия, рассчитывают диагностический показатель /ДК/ по формуле: ДК = 0 - К/К 100% , где 0 - содержание калия в опытной пробе, К - содержание калия в контрольной пробе, и при его значении 46% и более диагностируют иерсиниоз. Способ позволяет повысить точность диагностики. 2 табл.

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИЕРСИНИОЗА путем смешивания исследуемой крови с иерсиниозным антигеном, инкубации полученной смеси с последующим ее исследованием, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, после инкубации смеси в нее добавляют 0,9 мл изотонического раствора хлористого натрия, центрифугируют и в надосадочной жидкости определяют содержание калия, рассчитывают диагностический показатель (ДК) по формуле:
ДК= 100 %
где 0 - содержание калия в опытной пробе;
К - содержание калия в контрольной пробе, и при значении
ДК 46% и более диагностируют иерсиниоз.