Способ определения устойчивости картофеля к резиновой гнили Советский патент 1992 года по МПК A01N63/00 C12N1/14 C12Q1/00 

Изобретение относится к области сельского хозяйства, преимущественно к картофелеводству, и может быть использовано в селекции картофеля при получении устойчивого селекционного материала к резиновой гнили.

Известен способ искусственного заражения клубней путем погружения их в суспензию спор возбудителя резиновой гнили на несколько часов, приготовленную из 7- 14-дневной культуры гриба на твердой пита- тельной среде. После этого клубни закладывают в плотные полиэтиленовые пакеты с проавтоклавированным увлажнен-,- ным песком и выдерживают в термостате 6-21день при 18. 20, 22, 24°С.

Цель изобретения - ускорение способа.

Способ заключается в том, что получают инфекционный материал путем культивирования грибе Geotrlchum candidum на картофельно-глюкозном отваре в течение 3-4 сут. при 26°С, инфицируют клубни путем помещения их в марлевую салфетку, смоченную в культуральной среде, или методом укола клубня культуральной средой с помощью шприца, затем инкубируют инфицированные клубни при 26-40°С и оценку заболевания осуществляют по характерным признакам проявления болезни на клубнях эластичности и резиноподобности паренхимы, появления поверхностных коричневых пятен с черной каймой через 1-4 дня после инфицирования. К восприимчивым образцам относят образцы с указанными признаками заболевания, к устойчивым те. у которых эти признаки отсутствуют.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

П р и м е р 1. Получение инфекционного начала.

х|

Јь

ч

О СЛ

Питательную среду получают путем приготовления картофельного отвара (на 1 л воды 200 г измельченно-нарезанных клубней), добавляют 20 г глюкозы и автоклави- руют при 1,7 атм 40 мин. Жидкий отвар разливают в колбы и охлаждают. Посев гриба осуществляют в жидкую питательную среду. Исходный инокулум патогена берут из колоний гриба, выросших на твердой питательной среде в чистой культуре. После посева гриба инокулированную жидкую питательную среду в колбах объемом 0,5-2,0 л выдерживают 3-4 сут. За 1-2 сут не происходит достаточного накопления биомассы гриба и выделяемых им ферментов. На 3-4 сут вся поверхность среды покрывается белым налетом спороношения возбудителя, что свидетельствует о зрелости среды. Среда на протяжении 10-15 дней остается стабильной.

П р и м е р 2. Инокуляция клубней картофеля.

Полученную по примеоу 1 культураль- ную среду используют для инокуляции картофеля. Продолжительность экспозиции от заражения до получения признаков заболевания составляет 3-4 дня в зависимости от температуры Мытые и стерилизованные спиртом клубни обворачивают в марлевые тампоны, смоченные в культуральной ере- де.

После инокуляции клубни термостати- руют при влажности воздуха 90-100% и 26- 40°С. При инфицировании в марлевых салфетках инокулируемые клубни приобре- тают типичные свойства резиновой гнили: эластичность и резиноподобность паренхимы, появление поверхностных коричневых пятен г черной каймой. При разрезании больного клубня пораженная ткань окраши- вается в грязно-розовый цвет, затем постепенно буреет, чернеет с образованием спороношения возбудителя. Оценку устойчивости клубней проводят на 1-4 день инкубирования.

В табл.1 приведены результаты различных способов инфицирования клубней: по известному способу (прототипу) намачивание в водной суспензии спор с дальнейшим выдерживанием в автоклавируемом песке и по предложенному способу- путем обвора- чивания клубней в марлевую салфетку, смоченную в культуральной среде гриба.

Из табл.1 видно, что по предлагаемому способу можно определять устойчивость сорта в 2-3 раза быстрее, чем по известному, кроме того, повышается степень достоверности; устойчивость можно определить по вегетирующим растениям.

В табл.2 приведена оценка 62-х образцов различных сортов гибридов картофеля на устойчивость к резиновой гнили.

Из табл.2 видно, что ранние сорта картофеля сильно восприимчивы к резиновой гнили и составили 43%, среднеранние 14%, среднеспелые 15%. Среднепоздние и поздние сорта обладают повышенной относительной устойчивостью до 50% и среднеустойчивостью 37-50% по сравнению с ранними сортами картофеля (до 13%). Поэтому при выращивании картофеля необходимо обращать внимание на группу спелости сорта, что оказывает влияние на развитие болезни.

При инокуляции клубней методом укола проявляются такие же признаки, как описано выше, но более локально расположенные, что дает возможность использовать его также для оценки устойчивости вегетирую- щих растений.

Способ осуществляется введением иглой медицинского шприца в клубень 0,1 мл жидкой культуральной среды на глубину 1- 1,5 см. Место укола заклеивают расплавленным парафином.

Этот метод позволяет провести наблюдения за временем проявления и поражения картофеля в период вегетации. Первые симптомы поражения в зависимости от степени заражения проявляются довольно рано. Образуются большие выпады растений в месте посадки больных клубней. Инфекция передается от больного клубня к соседнему, поражая ростки, которые темнеют и загнивают. Если ростки не погибли, то взошедшие растения угнетены, отстают в росте и развитии. В процессе вегетации на стеблях образуются коричневые пятна, на нижней части- стебля иногда со слабым спороношением возбудителя, в месте которого стебель надламывается и загнивает.

От потемнения до загнивания проходит 3-5 дней.

П р и м е р 3. Изоляция патогена в чистую культуру.

Целые или разрезанные пополам клубни помещают в эксикатор при 20-24°С на 36-48 ч. По истечении данного периода на пораженных участках клубней развивается белый мицелий гриба в виде отдельных скоплений подушечек. Спороношение быстро исчезает и плохо проявляется на стеблях и ростках.

Гриб трудно изолируется при помещении органов растений во влажную камеру, которые быстро зарастают мукоровыми грибами и бактериями. Учитывая это обстоятельство, производят изолирование, производя посев на агаровые среды.

Основными правилами работы для успешного изолирования возбудителей грибов Geotrfchum candldum являются следующие. Поверхность стеблей, столонов, клубней отмывают проточной водой, дезинфицируют спиртом, промывают стерильной водой, высушивают (промакают) фильтровальной бумагой, разрезают на кусочки 2-4 см, расщепляют вдоль пополам зону пораженного участка и помещают в чашки Петри с питательной средой. Рост и идентификацию производят в течение 2-5 дней при 20-26°С.

В табл.3 показана интенсивность роста мицелия гриба на различных питательных средах, а в табл.4 - рост различных штаммов гриба при различной температуре на 7-й день культивирования.

П р и м е р 4. Влияние концентрации инокулюма и метода заражения на развитие резиновой гнили картофеля на клубнях. .

Инокуляцию клубней проводят так, как описано выше. Результаты инокуляции приведены в табл.5.

Учет поражения клубней по разработан- ной шкале для резиновой гнили картофеля:

О - отсутствие болезни:

1- начальное появления пятен;

2- поражена 1/4 часть клубня;

3- поражена от 1 /3 до 1 /2 части клубня;

4- поражено более 1/2 части клубня;

5- размягчение всего клубня;

6- клубень сгнил.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет провести оценку картофеля на устойчивость к резиновой гнили в течение 1-4 сут против 6-21 по известному способу.

Формула изобретения Способ определения устойчивости картофеля к резиновой гнили, включающий дезинфекцию поверхности клубней картофеля, инфицирование клубней грибом Geotrichum candldum, инкубирование и оценку устойчивости по характерным при-, знакам проявления болезни, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, инфицирование осуществляют путем помещения клубней в марлевый тампон, смоченный культуральной средой, полученной при выращивании гриба на картофельно-глю- козном отваре в течение 3-4 сут при 26°С, а инкубирование инфицированных клубней осуществляют при 26-40°С.

Использование: сельское хозяйство. Сущность изобретения: получают инфекционный материал путем культивирования гриба Geotrlchum candidum на картофельноглюкозном отваре в течение 3-4 сут при 2б°С, инфицируют клубни путем помещения их в марлевую салфетку, смоченную в куль- туральной среде, или методом укола клубня культуральной средой с помощью шприца. Затем инкубируют инфицированные клубки при 26-40 С и оценку заболевания осуществляют по характерным признакам проявления болезни на клубнях: эластичности и резиноподобности парахимы, появления поверхностных коричневых пятен с черной каймой через 1-4 дня после инфицирования. К восприимчивым образцам относят образцы с указанными признаками заболевания, к устойчивым те, у которых эти признаки отсутствуют. Способ позволяет провести оценку картофеля на устойчивость к резиновой гнили в течение 1-4 сут. против 6-21 по известному способу. 5 табл. сл С

Эффективность различных способов инфицирования клубней

Таблица 1

Распределение сортов и гибридов картофеля разных групп спелости по устойчивости к резиновой гнили

Интенствность роста мицелия гриба на различных питательных средах

Питательная среда

Капустная

Картофельная

Томатная

Морковная

Свекольная

Мясо-пептонная

Гороховая

Овсяная

Чапека

Гаузе

Ржаная

Голодная (без сахара) Аммонийно-аммиачная

Таблицэ4 Рост различных штаммов гриба Geotrichum candldum при различных температурах, мм

Таблица2

ТаблицаЗ

Размер колоний грибэ на 7-й день при 24 С,

51,8

60,0

54,4

52,1

31,8

57,0

41,7

47,0

5,0

19,0

20,0

4,9

,Таблица 5

Влияние концентрации инокулюма м метода заражения на развитие резиновой гнили картофеля на клубнях, балл

Варианты

Контроль

10-20 шт. спор

в поле зрения микроскопа

50-60

100-110

лубни, помещенные в тампоны с культуральной жидкостью

25 мл культуральной среды

+ 75 дистиллированой воды 1:2

50 мл культуральной среды

+50 мл дистиллированной воды 1:1

100 мл культуральной среды

Продолжение табл. 4

Инокуляция суспензий спор, балл

О

2,4

3,6 4,0

3,0

4,0 5,0