Способ получения 7-амино-5-имино-2,3-дигидро-5Н-тиазоло[3,2-а]пиримидина, или его фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей, или гидратов Советский патент 1992 года по МПК C07D513/04 A61K31/505 

Изобретение относится к способу получения новых производных тиазоло(3,2- а)пиримидина, обладающих ценными фармакологическими свойствами и которые могут найти применение в медицине.

Цель изобретения - получение новых производных тиазоло (3,2-а)пиримидина, обладающих более высокой иммуностимулирующей активностью.

Поставленная цель достигается способом получения 7-амино-5-имино-2,3-дигид- ро-5Н-тиазоло(3,2-а)пиримидина формулы NH

rfx ««

или их фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей, или их гидратов, заключающимся в том, что 2-аминотиазолин подвергают взаимодействию с динитрилом малоновой кислоты с последующим выделением целевого продукта в виде основания или соли, или гидрата, или переведением соли в основание.

П р и м е р 1. 7-Амино-5-имино-2,3-ди- гидро-5Н-тиазоло(3,2-а)пиримидингидроб- ромид.

Смесь 10,21 г (0.1 моль) 2-аминотиазолина, 661 г (0,1 моль) динитрила малоновой кислоты, 125 мл этанола и 10,12 г (0,1 моль) триэтиламина.выдерживают при комнатной температуре 2 дня. Реакционную смесь ос2

О 00 00

сл

GJ

ветляют и устанавливают величину рН б добавлением 48%-ного раствора бромистого водорода при охлаждении ледяной водой, Получают 18 г названного соединения, Выход 72%, т.пл. выше 300°С.

Вычислено, %: С 28,93; Н 3,64; N 22,49; 512,87; Вг 32,07. C6HgBrN4S

Найдено, %: С 28,23; Н 3,70; N 22,46; S 12,85; Вг 32,80.

П р и м е р 2. 7-Амино-5-имино-2,3-ди- гидро-5 Н-тиазол о(3,2-а)пиримиди н.

Смесь 10,21 г (0,1 моль) 2-аминотиазо- лина, 6,61 г (0,1 моль) динитрила малоновой кислоты и 200 мл диметилформамида нагревают в течение 2б мин при 155°С. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, осветляют и сгущают. Полученный маслянистый остаток кристаллизуют из ацетонитрила и сушат. Получают 5,1 г названного соединения. Выход 30%, т.пл. выше 300°С.

Вычислено, %: С 42,84; Н 4,79; N 33,31; S 19,06.

Найдено, %: С 42,81; Н 4,69; N 33,29; S 19,03.

П р и м е р 3. 7-Амино-5-имино-2,3-ди- гидро-5Н-тиазоло(2,3-а)пиримидингидрок- арбонатдигидрат.

К раствору 224 г бикарбоната натрия в 2500 мл воды добавляют 24,9 г (0,1 моль) 7-амино-5-имино-2,3-дигидро-5Н-тиазоло( 3,2-э)пиримидингидробромида, Реакционную смесь перемешивают 8 ч при комнатной температуре, затем отфильтровывают. Продукт промывают водой и сушат. Получают 17,2 г названного соединения. Выход 75%, т.пл. 146-148°С.

Вычислено, %: С 31,70; Н 4,94; N 21.12; S 12,09.

CyHiaN/iOsS.

Найдено, %: С 32,68, Н 4,70; N 20,69; S 12,18.

П р и м е р 4, 7-Амино-5-имино-,3-ди- гидро-5Н-тиазоло(3,2-а)пиримидин.

Смесь 5,3 г (0,02 моль)7-амино-5-имино- 2, 3-дигидро-5Н-тиазоло(3,2-а)пиридингид- рокарбонатадигидрата и 30 мл уксусной кислоты перемешивают 6 ч. Раствор упаривают, образующиеся кристаллы кристаллизуют из этанола, фильтруют и сушат. Получают 3,6 г названного соединения. Выход 59,5%. т.пл. 158-160°С.

Вычислено, %: С 43,70; Н 6,00; N 18,53; S 10,60.

CiiHieN404S.

Найдено, %; С 43.68; Н 5,97; N 18,17; S 10,56.

Установлено, что предлагаемое соединение и его соли обладают иммуностимулирующей активностью, в частности в модели повышения иммуногенного действия неко-. торых вакцин вируса герпеса со слабым им- муногенным действием.

Результаты модельных опытов на мышах и свиньях иммуностимулирующих свойств приведены в табл.1 и 2 дозы 0,1 мг соединения на 1 мышь и 5 мг соединения на 1 свинью).

В модели с периферическими лимфоцитами используют следующий метод испытания.

Отделение лимфоцитов.

Из обработанных гепарином (для предотвращения свертывания) проб крови выде- ляют лимфоциты диференциальным центрифугированием на фиколлпаке. Концентрацию клеток в растворе Хенкса. содержащем сыворотку коровьего эмбриона,

доводят до 10 млн. клеток/мл. Клеточные суспензии переносят по 1,5 мл в лейтонов- ские пробирки и добавляют соответствующие антигены.

Образование иммунных розеток.

3%-ный раствор эритроцитов Шафена после соответствующей предварительной обработки адсорбируют антигеном Бойде- на. 0,1 мл обработанных таким образом эритгроцитов добавляют в пробирки. Через

16 ч подсчитывают долю (процент) клеток, обралующих розетки, в окрашенных препаратах, используя микроскоп,

Цитотбксические реакции (СТ). Исследования проводят в аллогенной

системе. В суспензию красных клеток крови Шафена, которую делают чувствительной при помощи антигена, вводят 0,1 мл суспензии лимфоцитов с плотностью клеток 106 мл. Величины цитотоксической способности определяют на основании проведенного после 16-часового инкубационного периода гемолиза, который измеряют на приборе Спекола при 540 нм. Размер реакции, отнесенный к контрольным препаратам, выражают в процентах

Как вытекает из данных таблиц, испытуемые соединения, в основном, не влияют на блас /огенез лимфоцитов, однако они повышают эффективность клеточных иммунных

реакций, применение их в иммуноиндук- тивном отрезке ведет к 8-11%-ному повышению RCF-величин и 10-12%-ному повышению СТ-величин.

Данные о фармакологических результатах испытаний 7-амино-5-имино-2,3-дигид- ро-5Н-тиазоло(3 2-а)пиримидингидроброми- да следующие.

Стимуллирующее действие различных доз соединения (l на иммунитет вирусных

вакцин IBR, Merck, New Casfle. далее Boven

adeno и Toga (BVD) испытывалось частично в модельных опытах на мышах, частично в модельных опытах на курочках. У подопытных животных отбирали в указанные в таблицах сроки пробы крови, и определяли реакции ин витро отделенных лимфоцитов (L, ST, RCF, СТ, РНА), а также концентрацию обнаруживаемых в сыворотке крови антител (Vfl, НА).

Полученные с вакиинами IBR(Boviphyl- IBR), Blvalenter Bavlnetdenovlrus, а также Vedevac hST RCF- и СТ-значения указаны в табл.3.

Результаты, касающиеся вакцин Mayek, Phylavac (против куриной мумы), представ- лены в табл.4.

Соединение примера 2 имеет LDso- 20000 мг/кг (суспензия в карбоксиметил- целлюлозе).

Сравнение иммуностимулирующей ак- тивности соединений, получаемых по изобретению (соединение примера 2), и известного соединения б-(п-хлорбенэил)- 2,3,6,7-тетрагидро-5Н-тиазоло(3,2-а)пири- мидин-5,7-диона на мышах, крупном рога- том скоте, свиньях и домашней птице показывает, что соединение примера 2 оказывает положительное действие на иму- ноответ, который может быть вызван с помощью вакцины В19, а также различных вирусных вакцин (вакцины Аужешки, вакци- .ны ВР, аденовакцины, вакцины Нью Кастль), Их стимулирующее действие прояв- ляется главным образом при выработке им- муноответа на клеточном уровне, что выражается в значительно более высоких значениях титров, получаемых в процессе исследований in vitro на клеточном уровне (цитотоксические реакции, образование иммунной розетки, испытание стимулиру- ющего действия лимфоцитов), которые проводят на лимфоцитах иммунизированных животных, взятых в различное время, но при этом имеется также возможность с помощью этого соединения параллельно (ве- роятно, косвенным путем) повысить также

гуморальный иммуноответ, что проявляется в появлении антител более высокого титра, нейтрализующих или агглютинирующих вирусы,

Известное соединение обладает способностью регулировать функции Т-клеток и восстановления активности субпопуляции супрессоров Т-клеток. В отношении определенных антигенов оно способно усиливать так называемую гиперсенситивную реакцию более позднего типа. В результате это соединение может быть применено при лечении определенных аутоиммунных заболеваний, например ревматоидного артрирта или системной красной волчанки.

Действие соединения примера 2 проявляется в том, что оно повышает активность лимфоцитов Т-подавителей и других так называемых лимфоидных К-клеток, благодаря чему достигается клеточная защищенность более высокого уровня и косвенным путем улучшается формирование гуморального иммуноответа. В соответствии с указанным это соединение может быть успешно использовано для повышения эффективности некоторых вирусных вакцин, обладающих слабым иммуногенным действием (напри мер, вакцин вируса лишая, вакцин аденовируса, вирусных вакцин Нью Кастль).

Формула изобретения

Способ получения 7-амино-5-имино-2,3- дигидро-5Н-тиазоло 3,2-а пиримидина формулы

NH

Г&

S N

NH,

или его фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей, или гидратов, отличающийся тем, что 2-аминотиазолин подвергают взаимодействию с динитрилом малоновой кислоты с последующим выделением целевого продукта в виде основания или соли, или гидрата, или переведением соли в основание.

Таблица 1

Таблица 2

Изобретение касается гетероциклических веществ, в частности получения 7-ами- но-5-имино-2,3-дигидро-5Н-тиазоло(3,2-а) пиримидина или его кислотно-аддитивных солей, или гидратов, обладающих иммуностимулирующей активностью, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых более активных веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией 2-аминотиазолина с динитрилом малеино- вой кислоты с последующим выделением целевого продукта в виде основания, нужной соли или гидрата. Новые вещества способны регулировать функции Т-клеток и восстанавливать субпопуляции супрессо- ров Т-клеток, что может быть использовано для лечения ревматоидного артрита, системной красной волчанки, а также для повышения эффективности некоторых вирусных вакцин, обладающих слабым иммуноген- ным действием - вакцин вируса лишая или аденовируса. 4 табл. fe