Способ получения карбоксилсодержащих полимерных носителей для иммобилизации белковых антител Советский патент 1992 года по МПК C08F212/14 A61K39/44 C08F212/14 C08F212/36 

Изобретение относится к химии высокомолекулярных соединений, а именно к получению полимерных носителей для иммобилизации белковых антител, и может быть использовано в биотехнологии и медицине для создания иммуносорбентов, аффинных сорбентов и биокатализаторов.

Известен способ получения карбоксил- содержащих носителей для иммобилизации белковых антител обработкой оксиэтилме- такрилатного геля бромцианом и последующим взаимодействием с аминокапроновой кислотой.

едостатками известного способа являются сложность получения, необходимость использования высокотоксичного бромциа- на.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемым результатам является способ получения кар- боксилсодержащих полимерных носителей для иммобилизации белковых антител, включающий обработку реакционноспособных сополимеров на основе стирола и диви- нилбензола азотной кислотой.

Недостатком этого способа является низкая специфическая активность белковых антител, иммобилизованных на носителе.

Цель изобретения. - повышение специфической активности иммобилизованных белковых антител.

Пр-имер1.20г хлорметилированного макропористого сополимера стирола и 15% дивинилбензола, полученного в присутствии 120% бензина и содержащего 4,51 ммоль хлора на 1 г, загружают в колбу, заливают 100 мл этиленгликоля, нагревают до 160°С и выдерживают при этой температуре и перемешивании 12 ч. Затем сополимер отделяют, промывают водой до нейтральной реакции, переносят в колбу и заливают 100 мл водного 10%-ного раствора азотной кислоты. Реакционную смесь выдерживают 8 ч при 40°С и перемешивании, после чего полимерный носитель отделяют и промывают водой до нейтральной реакции промывсл

с

VI СЛ 4 х| Ю XI

ных вод. Полученный носитель содержит 1,6 ммоль/г карбоксильных групп.

В ИК-спектрах носителя имеются характеристические полосы поглощения при 1290 (валентные колебания карбониль- ного кислорода), 1700 (карбонильный кислород), 1360 (деформационные колебания ОН-группы карбоксила), (1110см 1) (группы простых эфиров).

Пример 2. 20 г хлорметилированного сополимера стирола и 15% дивинилбензо- ла, полученного в присутствии 100% бензина и содержащего 17,2% хлора, загружают в колбу, заливают 100 мл диэтиленгликоля, нагревают до 180°С и выдерживают при этой температуре и перемешивании 10 ч, Затем сополимер отделяют, промывают водой до нейтральной реакции, переносят в колбу, заливают 100 мл 20%-ной азотной кислоты и выдерживают при 50°С и переме- шивании 4 ч, после чего сополимер отделя- ibt, промывают водой до нейтральной реакции. Полученный продукт содержит 0,82 ммоль/г карбоксильных групп. В ИК-спектрах продукта имеются характеристические полосы поглощения карбо- нильного кислорода карбоксильных групп (1290 и 1700 ), ОН-группы карбоксила (1360см 1), группы простого эфира (1110см

. Пример 3. 20 г макропористого хлор- метилированного сополимера стирола и 15% дивинилбензола, полученного в присутствии 100% бензина и содержащего 17,2% хлора, загружают в колбу, заливают 100 мл триэтиленгликоля, нагревают до 200°С, выдерживают при этой температуре и перемешивании 7 ч, затем сополимер отделяют, промывают водой до нейтральной реакции, переносят в колбу, заливают 100 мл 30%-ной азотной кислоты и выдер- живают 1ч при 60°С и постоянном перемешивании. Затем сополимер отделяют, промывают водой до нейтральной реакции. Полученный носитель содержит 0,48 ммоль/г карбоксильных групп,

В ИК-спектрах носителя имеются характеристические полосы поглощения карбонильного кислорода карбоксильных групп

1-1

(1290 и 1700 см ), ОН-группы карбоксила

5

0 15 0

5

0 5 0 5

0

(1360 ), группы простого эфира (1110см 1).

Для получения иммуносорбентов кар- боксилсодержащие носители активировали обработкой эпихлоргидрином и затем им- мобилизовывали соответствующие белковые антитела. Готовые иммуносорбенты отмывали от непрореагировавших антител последовательной обработкой 5%-ным раствором альбумина, 3%-ным раствором Твин-100 и 0,14 М раствором хлорида натрия.

Результаты сорбции показаны в таблице.

Как видно из данных таблицы, применение полученных по предлагаемому способу карбоксилсодержащих носителей позволяет по сравнению с прототипом существенно увеличить специфическую активность иммобилизованных белковых антител, что выра-- жается в способности связывать находящиеся в плазме крови соответствующие иммуноглобулины.

Носители, полученные по предлагаемому способу, механически прочны, не набухают в биологических жидкостях и могут быть применены для приготовления иммуносорбентов, применяемых в биотехнологии и медицине для очистки крови больных.

Формула изобретения

Способ получения карбоксилсодержащих полимерных носителей для иммобилизации белковых антител, включающий обработку реакционноспособных сополимеров на основе стирола и дивинилбензола азотной кислотой, отличающийся тем, что, с целью повышения специфической активности иммобилизованных белковых антител, в качестве реакционноспособных сополимеров используют хлорметилиро- ванные сополимеры стирола и дивинилбензола, которые предварительно подвергают взаимодействию с гликолями формулы НО(СН2СН20)ПОН, где , при 160 - 200°С в течение 7-12 ч, при молярном соотношении количеств хлорметильных групп и гликолей 1:7,8-20, а обработку производят водным раствором азотной кислоты с концентрацией 10-30% при 40-60°С до содержания карбоксильных групп 0,48- 1,60 ммоль/г.

Сущность изобретения: взаимодействие с азотной кислотой продуктов реакции макропористого хлорметилированного сополимера стирола и дивинмлбензола с гли- колями формулы НО(СН2СН20)пОН, где , при 10-60°С, концентрация азотной кислоты 10-30% до содержания карбоксильных групп 0,48-1,60 ммоль/r. Условия реакции сополимера с гликолями: 160- 200°С, 7-12 ч, молярное соотношение количеств хлорметильных групп и гликолей 1:(7,8-20). 1 табл.