Способ дифференциальной диагностики саркоидоза легких и фиброзирующих альвеолитов Советский патент 1992 года по МПК G01N33/68 

у

6

Способ дифференциальной диагностики саркоидоза легких и фиброзирующих альвеолитов. Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и может быть использовано при дифференциальной диагностике саркоидоза легких и фиброзирующих альвеолитов. Цель изобретения - повышение точности диагностики. Сущность способа заключается в определении одновременно в жидкости бронхоавельо- лярного лаважа (ЖДАЛ) и в сыворотке крови эстеразной активности эластазы и катепси- на G, причем при увеличении активности этих ферментов в двух исследуемых материалах диагностируют фиброзирующий альве- олит, а при снижении активности ферментов в сыворотке и увеличении в ЖБАЛ диагностируют саркоидоз легких. 2 табл.

Изобретение относится к анализу биоматериала и может быть использовано для дифференциальной диагностики саркоидоза легких и фиброзирующих альвеолитов по результатам биохимического анализа жидкости бронхоальвеолярного лаважа (ЖБАЛ) и сыворотки крови.

Известны способы дифференциальной диагностики фиброзирующих альвеолитов и саркоидоза легких на основании результатов клинического, иммунологического и цитологического исследования.

Широко распространенным и основным в клинической практике является метод диагностики саркоидоза легких и фиброзирующих альвеолитов по суммарным клиническим данным - это комплексный надежный метод, однако его возможности ограничены в результате длительности

предварительного обследования больного и субъективности оценок врача, ставящего диагноз.

Наиболее точным и информативным методом является открытая биопсия легких. Патоморфологическое исследование био- птатов легочной ткани достаточно информативно, но ввиду большой травматичности метода получения материала он применим лишь в редких, особых случаях.

Рентгенологические методы диагностики просты, доступны в любой клинике, однако недостаточно точны и информативны, так как требуют дополнительных исследований для уточнения диагноза.

Наиболее близким к предлагаемому является способ диагностики некоторых дис- семинированных процессов в легких по

XJ

сл

00

СЛ

сл

00

соотношению субпопуляций Т-клеток жидкости бронхоальвеолярного лаважа.

Однако способу-прототипу присущи следующие недостатки: необходимость большого количества материала для анализа и в связи с этим большая травматичносг ; трудоемкость анализа; недостаточная точность - в некоторых случаях не получено достоверных различий.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом

Для обследования у пациента берут капиллярную кровь (на одно определение не- обходимо 5 мкл сыворотки) и при проведении субсегментарного бронхоальвеолярного лаважа (ЖБАЛ) из супернатанта поспе центрифугирования для одного определения отбирают 500 мкл на анализ.

В качестве контрольных групп при исследовании эстеразной активности в сыворотке крови использовали кровь здоровых доноров, прошедших предварительное обследование в Институте переливания крови АМН СССР. Контрольную группу при анализе ЖБАЛ получали лаваж с лечебно-диагностическими целями.

Полученный материал сразу подвергали биохимическому анализу, однако материал мог храниться при температуре около 0°С с предварительной добавкой азида натрия в течение 1-2 суток. Определение активности ферментов проводили с помощью спектрофлуориметра Perkin Solmer 3000 при температуре 20±1°С, длинах волн: возбуждения - 360 нм, испускания - 455 нм, концентрации субстратов в реакционной смеси 1-3- .

Использованы два синтетических флуо- рогенных субстрата: 4-метилумбеллифери- ловые эфиры М-бензилоксикарбонил-Ь фенилаланина (субстрат для катепсина G) и трет.-бутилоксикарбонил-1-аланина (субстрат для эластазы).

В качестве флуорогенной метки применяли 4-метилумбеллиферон А. В ходе определения показания прибора снимали через 3 с, 1 мин, 2 мин. Таким образом, одно определение занимало 3-4 мин.

Калибровочную кривую строили по 4- метилумбеллиферону. Удельную активность ферментов выражали в мкмоль индикатора, отщепившегося от субстрата за 1 мин,и пересчитывали на 1 мл сыворотки или ЖБАЛ и на 1 мг белка.

Экспериментальные данные сведены в табл.1.

Представленные в табл.1 величины активности катепсина G и эластазы в сыворот- яе крови и в ЖБАЛ дают возможность отличить по этим параметрам здоровых людей, страдающих саркоидозом легких и фиб- розирующими альвеолитами.

В табл.2 приведены данные по исследованию ЖБАЛ у больных диссеминированны- ми процессами в легких другими методами.

0 Для сравнения точности предлагаемого способа дифференциальной диагностики и способа прототипа была обследована группа больных с гистологически верифицированными диагнозами при оперативном

5 вмешательстве: саркоидоз легких и фибро- зирующие альвеолиты Дифференциальная диагностика согласно предлагаемому способу подтвердила 65% установленных диагнозов, а при использовании способа0 прототипа - 55%.

П р и м е р 1. Больная Г., 49 лет, поступила в отделение дифференциальной диагностики ВНИИ пульмонологии МЗ СССР. 24 05.89 с жалобами на одышку, сухой ка5 шель, слабость. Заболела в январе 1989, лечилась с диагнозом: острый бронхит, острая пневмония, затяжная пневмония антибиотиками и симптоматическими средствами по месту жительства без эффек0 та, направлена по ВНИИП для обследования и уточнения диагноза. Проводилась дифференциальная диагностика между саркоидозом легких и идиопатическим фибро- змоующим альвеолитом. Результат

5 биохимического исследования крови и жидкости бронхоальвеолярного лаважа: в сыворотке крови определялась повышенная активность эластазы 132 мкмоль/мин/мл (при норме 98±3) и катепсина G; 167

0 мкмоль/мин/мл (при норме 13б±б), в ходкости бронхоальвеолярного лаважа активность ферментов оказалась также повышенной, при этом эластаза: 0,15 мкмоль/мин/мл (при норме 0,00), а катеп5 син G : 0,30 мкмоль/мин/мл (при норме 0,016 ±0,07), Увеличение активности ферментов в сыворотке крови и жидкости брон- хоальвеолярного лаважа (ЖБАЛ) свидетельствовало в пользу идиопатическо0 го фиброзирующего альвеолита. Диагноз в дальнейшем был подтвержден результатами морфологического исследования био- псийного материала (чрезбронхиальная биопсия легочной ткани).

5П р и м е р 2. Больная В., 59 лет, поступила в отделение дифференциальной диагностики ВНИИП МЗ СССР 7.04.89 с целью уточнения диагноза по поводу диссемини- ровзнного процесса в легких. Больна с августа 1987. Заболевание началось с кашля, затем присоединилась слабость, одышка. Терапия кортикостероидами оказала поло- жительный клинический и рентгенологический эффект, однако диагноз оставался неясным, в связи с чем большая была направлена во 8НИИП. При обследовании кроме изменений на рентгенограммах были выявлены отклонения от нормы уровня ферментов в сыворотке крови и ЖБАЛ, свиде- гельстаующие в пользу саркоидоза легких. Активность эластазы крови была ниже нормы: 58 мкмоль/мин/мл (при норме 98±3), уровень катепсина в крови оказался сниженным: 120 мкмоль/мин/мл (при норме 136±6). В ЖБАЛ содержание этих ферментов было значительно больше нормы: зла- стаза составила 0,36 мкмоль/мин/мл (при норме 0,0), а катепсин G 0,10 мкмоль/мин/мл (при норме 0,016±0,07). В дальнейшем диагноз саркоидоза был подСодержание Т-лимфоцитов и их субпопуляций в ЖБАЛ у дольных лиссеминированными процессами в легких.

твержден морфологически при исследовании биопсийного материала, полученного при медиастинотомии.

Формула изобретения Способ дифференциальной диагностики саркоидоза легких и фиброзирующих альзэолитов, включающий биохимический анализ жидкости бронхоэльвеолярного га- важа, отличающийся тем, что, с целью повышения точности диагностики, определяют эстераэную активность эластазы и ка- тепсина G одновременно в жидкости бронхоальвеолярного лаважа и в сыворотке крови и при увеличении относительно нормы активности ферментов в исследуемых биоматериалах диагностируют фиброзиру- ющий идиопатический альвеояит, а при снижении активности а сыворотке крови и одновременном увеличения в альвеолярной жидкости диагностируют саркоидоз легких.

Таблица 1

Таблица 2