Способ диагностики саркоидоза Советский патент 1989 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, и может быть использовано для диагностики саркоидоза, а также для оценки активности данного заболевания, контроля эффективности лечения.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Бронхоальвеолярный смыв получают при проведении бронхоальвеолярного лаважа. Через канал бронхоскопа по катетеру медленно вводят стерильный физиологический раствор, подогретый до 37°С, в количестве 150 мл. Объем аспирированной жидкости, получаемой при бронхоальвеолярном лаваже, составляет примерно 40% от количества введенного физиологического раствора , т.е. в данном случае он был равен примерно 60 мл. Первые 50 мл аспирированной жидкости отбрасывают,

поскольку эта порция является бронхиальным, но не бронхоальвеолярным смывом.

Полученный у больного при проведении бронхоальвеолярного лаважа брон- хоальвеолярный смыв фильтруют через капроновое сито для удаления слизи, затем центрифугируют при J500 об/мин 15 мин, отбирают надосадок.

Лимфоциты периферической крови по- .лучают из 3-4 мл гепариннзированной (25 МЕ/мл) венозной крови после центрифугирования ее на градиенте плотности (,077) при 1500 об/мин в течение 35 мин и последующего двухкратного отмывания клеток от плазмы и антикоагулянта средой 199, взвесь лимфоцитов разводят до концентрации 2x10 клеток в 1 мл,

В опытную и в контрольную пробы добавляют по О,1 мл взвеси лимфоцитов, В опытную пробу добавляют О, 1 мл надосадка бронхоальвеолярного смы-

, 00

Ј0 ОЭ vj

ва, в контрольную пробу 0,1 мл физиологического раствора, приготовленного на фосфатном буфере (рН 7,2).

Каждую пробу тщательно перемешивают и инкубируют при 37°С 30 мин.

Б опытную и в контрольную пробы добавляют по 0,1 мл 0,5%-ной взвеси эритроцитов барана, приготовленной на забуференном физиологическом раст- воре. После перемешивания каждой пробы инкубируют их при 37°С 10 мин, затем центрифугируют при 1000 об/мин 5 мин. После этого инкубируют пробы в холодильнике при 4°С 18 ч. Образо- вавшийся осадок ресуспендируют, помещают в камеру Горяева и проводят подсчет розеткообразующих клеток в световом микроскопе. Если процент розеткообразующих лимфоцитов в опытной пробе больше, чем в контрольной, диагностируют саркоидоз.

Пример. Больной 3.,49 лет,, болен с апреля 1985 года, когда появился сухой кашель, одышка, слабость недомогание. При обследовании в стационаре проведена рентгенография грудной клетки, обнаружены мелкоочаговые тени диаметром 2-3 см, увеличенные прикорневые и паратрахеальные лимфатические узлы, усиление легочного рисунка. Было высказано предположение о наличии гранулематозного процесса в легких. С целью уточнения диагноза 30.10.85 года проведена бронхоскопия с бронхоальвеолярным лаважом и пункцией внутригрудных лимфатических узлов. Обследование больного по данному способу дало следующие результаты: процент розеткообра- зующих лимфоцитов в контрольной пробе 39%, в опытной пробе 49%, коэффициент, поедставлягощий собой частное от деления показателя опытной пробы на показгтель контрольной пробы, со- ставлял 1,29 Таким образом, у больного выявлена экспрессия фенотипа лимфоцитов периферической крови над- осадком бронхоальвеолярного смыва, Подобные результаты позволили сформулировать диагноз следующим образом,

Саркоидоз с поражением внутригрудных лимфатических узлов и легких, активная фаза течения,, Изучение гистологической картины пунктата лимфа- тических узлов подтвердило диагноз саркоидоза (обнаружена эпителиоидно- клеточная гранулема), Наличие высокой активности патологического про

Q 5 0

5 0 о

5

0

цесса было подтверждено последующими исследованиями, выявившими наличие выраженного лимфоцитарного альвеоли- та (процент лимфоцитов в бронхоаль- веолярном смыве 28%, норма до 10%), повышенную экскрецию . кальция с мочой (360 мг в сутки, норма до 120 мг), ускоренную СОЭ - 18 мм/ч, высокий уровень иммунного глобулина G в сыворотке (19 г/л, норма до 1Дг/л). Таким образом, обследование больного по данному способу дало возможность поставить правильный диагноз, подтвердившийся при морфологической верификации, а также дать оценку активности течения заболевания, что позволило своевременно начать курс лечения кортикостероидными препаратами.

Приведенный клинический пример подтверждает эффективность и диагностическую ценность предлагаемого способа диагностики саркоидоза.

Было проведено сравнение точности прототипа и данного способа. Точность прототипа составляла 50-60%, однако при морфологической верификации диагноза и сопоставления с уточненными клиническими данными она снижалась до 42%. Точность предложенного способа составляла 92%. Таким образом, предлагаемый способ в 2,19 раз точнее прототипа, что подтверждает его большую чувствительность и диагностическую информативность по сравнению с прототипом.

Предлагаемый способ прост, не требует наличия сложной аппаратуры, все реактивы, необходимые для его . осуществления, производятся в СССР. Он основан на известных теоретических предпосылках и обоснован клиническими исследованиями, что позволяет использовать его в пульмонологических отделениях и клиниках для диагностики саркоидоза, определения его активности и прогнозирования течения, выбора надлежащего лечения и контроля его эффективности

Формула изобретения

Способ диагностики саркоидоза пу- , тем исследования биологических жидкостей больных, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, у больных берут бронхоальвео- лярный смыв, центрифугируют его, вы514833776

деляют надосадок, инкубируют с ауто- зующих клеток и при увеличении их логичными лимфоцитами в течение 30± числа по сравнению с контролем, не .Ј1,0 мин, добавляют эритроциты барана содержащим бронхоальвеолярный смыв, и определяют количество розеткообра- диагностируют саркоидоэ.

Изобретение относится к медицине, в частности к изучению иммунологического статуса у больных саркоидозом. Цель изобретения - повышение точности диагностики саркоидоза. Пробу с надосадком бронхо - альвеолярного смыва больного, а также контрольную пробу инкубируют с лимфоцитами крови больного в течение 30±1 мин. После чего в обеих пробах определяют процент розеткообразующих с эритроцитами барана клеток и при увеличении количества розеткообразующих клеток в опыте по сравнению с контролем диагностируют саркоидоз. По сравнению с прототипом точность диагностики увеличивалась в 2,19 раза.