Способ определения антикоагулянтной активности низко- и среднемолекулярной фракции плазмы крови Советский патент 1992 года по МПК G01N33/86 

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным способам диагностики нарушений свертывания крови, и может использоваться в клинических и научных лабораториях по изучению системы гемостаза.

Известен способ определения антикоа- гулянтной активности плазмы крови путем определения ее антитромбиновой активности, заключающийся в том, что к субстратной донорской плазме добавляют исследуемую плазму, предварительно прогретую при 56°С в течение 15 мин (исследуемый компонент). Полученную смесь добавляют к стандартному раствору тромбина и определяют время свертывания смеси.

Недостатками способа являются ограниченные диагностические возможности способа, так как определяются только анти- тромбиновая активность плазмы, свойственная высокомолекулярному веществу - антитромбину III.

Известен способ определения анти-Ха фактора (т.е. субстанции, инактивирующей активный X фактор свертывания крови).

Способ заключается в том, что к субстратной плазме добавляют исследуемую плазму, предварительно прогретую при 56°С в течение 15 мин и смешанную с активированным X фактором (исследуемый компонент), и определяют время свертывания всей смеси путем ее рекальцификации.

Недостатком способа является возможность оценки антикоагулянтной активности только высокомолекулярных субстанций, а именно антитромбина 111, антител к X фактору и т.д. Однако информация только об активности высокомолекулярных антикоагулянтов не дает представления об активности низко- и среднемолекулярных субстанций. Информация об активности низко- и среднемолекулярных антикоагулянтах чрезвычайно важна. Считается, например, что накопление их в крови при уремии служит главной причиной геморрагического синдрома. Обнаружено действие низко- и среднемолекулярных антикоагулянтов на функциональную активность тромбоцитов. Действие этих субстанций на процесс свертывания плазмы без тромбоцитов не изучалось Выявление способносо

с

v| СП СО

ел о о

сти низко- и средмемолекулярных субстанций влиять на процесс свертывания такой плазмы, а также создание способа оценки данной способности, могли бы иметь большое практическое значение, так как способы исследования плазменного компонента системы гемостаза доступны для практического здравоохранения.

Целью изобретения является разработка метода определения антикоагулянтной активности низко- и среднемолехулярной фракции плазмы.

Способ осуществляют следующим образом.

Для получения ультрафильтрата плазмы, содержащего только низко-и среднемо- лекулярные субстанции, исследуемую плазму фильтруют через мембрану Купро- фан, используемую в аппаратах искусственная почка и способную пропускать через себя только низко- и среднемолеку- лярмые вещества. Разрежение, подаваемое на мембрану для получения ультрафильтрата из плазмы, 400 мл рт.ст. После получения ультрафильтрата его в количестве 0,26 мл добавляют к 0,40 мл стандартной донорской бедной тромбоцитами плазмы, которую используют в качестве субстрата, содержащего все необходимые факторы свертывания крови. Смесь прогревают на водяной бане при 37°С в течение 3 мин. Методом рекаль- цификации определяют время свертывания смеси. Параллельно определяют время свертывания смеси, где вместо ультрафильтрата к субстратной плазме добавляют дистиллированную воду. Дистиллированная вода лучше всего подходит для подобных сравнительных исследований процесса свертывания. По степени удлинения времени свертывания смеси, содержащей ультрафильтрат плазмы, по сравнению со смесью, содержащей дистиллированную воду, судят об антикоагулянтной активности ультрафильтрата (т.е. об антикоагулянтной активности низко- и среднемолекулярных субстанций исследуемой плазмы).

Была исследована антикоагулянтная активность ультрафильтрата плазмы 28 здоровых доноров. Несмещенные оценки степени удлинения времени свертывания смеси в

результате действия ультрэфильтрата составили 108,2 ±25,9%.

Для подтверждения диагностической значимости способа исследовали группу больных с почечной недостаточностью (28 человек). Известно, что в крови этих больных содержится геморрагический фактор, способный оказывать выраженные изменения в первичном гемостазе и быть причиной массивных кровотечений. Все исследуемые больные имели уремическую интоксикацию и всем им была показана терапия гемодиализом. Несмещенные оценки удлинения (по сравнению с нормальными величинами) 5 времени свертывания смеси в результате действия ультрафильтрата составили 191.0 ±33,7%. .01.

С помощью предлагаемого способа было с большой достоверностью выявлено на- 0 личие повышенной энтикоагулянтной активности низко- и среднемолекулярной фракции плазмы крови (ультрафильтрата) по сравнению с нормой.

Способ впервые позволяет выявить ан- 5 тикоагулянтную активность низко- и среднемолекулярной фракции плазмы, это позволяет отдифференцировать основную причину геморрагического синдромч в случаях эндогенной интоксикации организма 0 {например, при уремии и т.д.) и правильно выбрать метод терапии геморрагического синдрома (удаления указанной фракции плазмы путем гемодиализа, пяэзмафереза и т. д.). 5 Формула изобретения

Способ определения антикоагулянтной активности низко- и среднемолекулярной фракции плазмы крови, включающий получение ультрафильтрата плазмы, содержа- 0 щего низко- и среднемолекулярную фракцию, с последующим смешиванием его с субстратной донорской бедной тромбоцитами плазмой в соотношении 0,26:0,40 по объему, определением времени свертыва- 5 ния смеси после ее рекальцификации и расчетом антикоагулянтной активности по степени удлинения времени свертывания е опытной пробе по сравнению с контролем, где вместо ультрафильтрата используют ди- 0 стиллированную воду.

Использование: медицина, лабораторные способы диагностики нарушений свертывания крови. Сущность изобретения: субстратную донорскую бедную тромбоцитами плазму смеши ва юте ультрафильтрэтом плазмы, содержащим низко- и среднемолекулярную фракцию, определяют время свертывания полученной смеси после ее рекальцификации