Способ определения глюкозы в крови Советский патент 1992 года по МПК G01N33/66 

Изобретение относится к биохимии, а именно к лабораторной практике для количественного определения содержания глюкозы в биологических пробах.

Известен способ количественного определения глюкозы в биологических пробах (О.Д.Кушманова, Г.М.Ивченко. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии. Москва, Медицина, 1983), недостатком которого является необходимость завершить анализ в день забора биологических проб, поэтому данный способ не может быть использован для отсрочного определения глюкозы в биологических пробах.

Цель изобретения - повышение точности способа при длительном хранении биологических проб.

Это достигается за счет стабилизации глюкозы в биологических пробах добавлением к ним 0,2%-ных водного раствора 9,10- бисметилтрифенилфосфонийантраценхло рида (ДФА).

Способ осуществляют следующим обра-

СО

с

зом.

В три пробирки вносят по 1 мл 0,2%-но- го водного раствора ДФА. Далее в опытную пробирку приливают 0,1 мл крови, в стандартную 0,1 мл стандартного раствора глюкозы, в контрольную 0,1 мл дистиллированной воды Пробирки закрывают пробками и хранят в холодильнике при 2-8°С.

В последующие 60 дней аналогично подготовленные пробы накапливат в холодильнике На 60-йденьили влюбойудобный для работника день, но не позже 60-го дня, определяют количество глюкозы во всех накопившихся пробах.

Например. В три пробирки вносят по 1 мл 0,2 %-ного водного раствора ДФА Далее в опытную пробирку приливают 0,1 мл крови, в стандартную 0 1 мл стандартного раствора глюкозы, в контрольную 0,1 мл дистиллированной воды. Пробирки закрывают пробками и помещают на хранение в

XI

о

2

СА О

холодильник при 2-8°С. В последующие 60 Дней аналогично подготовленные пробы накапливают в холодильнике. На 60-й или в любой удобный для работника день, но не позже 60-го дня, определяют количество глюкозы во всех накопившихся пробах, для чего добавляют с ним по 1 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, центрифугируют гТереносГят по 1,5 мл центрифуга- та в химические пробирки, приливают по 4 мл орто-толуидинового реактива, перемешивают содержимое, помещают на 10 мин в кипящую водяную баню, охлаждают до комнатной температуры и колориметриру- ют опытную и стандартную пробы против контроля в кюветах с толщиной рабочего слоя 10 мм при длине световой волны 590- 650 нм. Расчет проводят по известной формуле.

Проведенные исследования показали, что ДФА в концентрациях 0,1-0,3% обеспечивает сохранность глюкозы в пробах сыворотки крови неизменной на протяжении 75 суток (табл. 1). В табл. 2 представлены результаты содержания глюкозы в крови, ко- торые хранились на протяжении 1-60 дней после добавления к ним 0,2% раствора ДФА в сравнении с результатами глюкозы в аналогичных пробах, хранившихся без ДФА. Как видно из этих данных этот пока- затель значительно отличается начиная с 3-го дня хранения.

Средняя относительная ошибка заявляемого способа определения глюкозы, вычисленная из 200 определений исследуемого показателя (по 100 определений в крови и в сыворотке крови) в сроки, указанные в табл. 2 равнялась 4,57%.

В табл. 3 приведены определения глюкозы в сыворотке крови доноров, у которых наблюдались минимальные, средние и максимальные отклонения от величин полученных по способу-прототипу в день забора крови, которые показывают, что ни одна из величин полученных по заявляемому способу, не отличается от величин полученных по способу-прототипу в день забора крови, которые показывают, что ни одна из величин полученных по заявляемому способу, не отличается от величин полученных по способу-прототипу более чем на 5%. Формула изобретения Способ определения глюкозы в крови, включающий добавление к пробе 3%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, центрифугирование с последующим добавлением к нздосадочной жидкости орто-толуидинового реактива, перемешиванием, нагреванием инкубационной смеси на кипящей водяной бане в течение 10 мин, охлаждением и колориметрированием в кювете с толщиной слоя 10 мм при 590-650 нм, о т л и ч а- ю щ и и с я тем, что, с целью повышения точности способа за счет стабилизации глюкозы, к пробе предварительно добавляют 0,2%-ный водный раствор 9,10-бисметилт- рифенилфосфонийантрацен хлорид в соотношении проба: реактив 1:10.

Т а 6 л и ц а 1

Использование: медицина, биология для количественного определения глюкозы в крови. Цель изобретения - повышение точности способа при длительном хранении проб. К пробам крови добавляют предварительно 0,2%-ный водный раствор 9,10-бис- метилтрифенилфосфонийантраценхлорида в соотношении проба:реактив 1:10,3%-ный раствор трихлоруксусной кислоты, центрифугируют с последующим добавлением к надосадочной жидкости орто-толуидиноЁо- го реактива, перемешиванием, нагреванием инкубационной смеси на кипящей водяной бане в течение 10 мин. охлаждением и колориметрированием в кювете с толщиной слоя 10 мм при 590-650 нм.

Использованная концентрацм О 0,01 0,015 0,02 0,025 0,оТ

До прибавления раствора Д«А т.е. по 5,48 --...

15 нин хранения с раствором 5,35 5,67 5,41 5,56 5,27 5,58 5,29 5,44 5,41

5 суток хранения с раствором ДОА .« . 2,95 j.W з.86 3,92 4,56 5,37 5,44

10 суток хранения с раствором ДОА 0,34 0,66 0,71 0,90 0,98 1,82 4,48 ,74 5,60

20 суток хранения с метеором Д«А +++ + м„

30 суток хранения с раствором Ht )36

40 суток хранения с раствором ДОА + +++++«++++«,3, Ji98;)50

50 суток хранения с раствором ДНИ ++++«. )22

60 суток хранения с раствором ДОА +++ . w 3i36 5)5„ 5(Л

75 суток хранения с раствором Д«А +++ . +„. Ор67 Jfg, 5)H

-вместо Д«А к биологическим пробам приливали 1 мл дистиллированной воду и хранили их 75 суток

-подчеркнуты показатели проб, в которых содержание глюкозы уменьшилос в процесса хранения по сравнении с реэупьтатом полученным по способу-прототипу 5,48 мм/л

-пробы разложились

ИЛ и 0,075 0,1 0,15 0,2 0,25 о Г

способу прототипу

Использован-)СР°КИ Ранения биологических жидкостей а сутках

ньй способ k---. Г- Г- 1 60

определения 1 3 5/

глюкозыIJ | |JJL1L.

Сыворотка крови

По заявляемому способу

% ОТЛИЧИЙ ОТ

показателей, полученных по способу- прототипу (,12 0,21 им/л)

Сыворотка хранившаяся без ДФА

% отличия от показателей, полученных по способу- прототипу 0,21 им/л)

4ЙЮ.21 Ii.07i0.l8 43010,22 4,.21 3.9510.17 3,9810,17 4210,2 «,,32 ,16 4°310.21

0.5

1,2

4ч

1,2

3,9

З.Ч

2,2

,5

3,2

2,2

26,9

3,01tO,20 0,5310,03

87,1

Сыворотки разложились

Кроаь

По эаявляе- нону способу

% отличия от показателей, полученных по способу-прототипу 0,9 (3,23Я,23«м/л)

}.26t0.17 3,0910.1. 3,3410.10 3,1310,17 },21tO,09 3.1ам,Й 3,32«,1б 3,,17 3.31tO,15 3,l9tO,2l.

43

ЗЛ

3,1

0,6

4

49

ппыивиание. +- содержание глюкозы в пробах уменьшилось из-за продолжительного хранения их.

Примечание. „держание глокозы а сыворотке крови по способу-прототипу, равнялось 412 0.21 кч/л и опреяелялось в день заоора сыворотки у доноров.,,,.,,

- содержание глюкозы в цельной крови по способу-прототипу равнялось 3,23 0,23 мм/л и определялось а день забора крови у донора

н-и. - средняя величина отличия по данной горизонтали 2,37 +++++ - средняя величина отличия по данной горизонтали 2,70 п- количество доноров, в крови которых определялось содержание глокози.

++ - в строке указано отклонение в процентах от показателя, полученного по способу-прототипу

Т«блич 2

З.Ч

2,2

,5

3,2

2,2

Сыворотки разложились

4

49

1.2