Питательная среда для культивирования @ Советский патент 1984 года по МПК C12N1/20 

1 Изобретение относится к микробГйо логической промышленнссти и может быть использовано при производстве энтомопатогенньгх бактериальных препаратов на основе Bacillus thuringiensis. Известна кукурузно-глюкозная питательная среда для культивирования Bacillus thuringiensis lj . Однако известная среда малопроду тивна. Известна также питательная среда для культивирования Bacillus thurin giensis , содержащая дрожжи кормовые, источник углеводов (кукурузную муку, крахмал, отруби или другие), хлористый натрий, хлористый кальций, сернокислый магний или сер нокислый марганец и воду водопровод ную Y , Однако известная среда не обеспе чивает спорообразование в короткие сроки. Целью изобретения является ускорение спорообразования Bacillus thuringiensis. Указанная цель достигается тем, что питательная среда для культивир вания Bacillus thuringiensis, содержащая дрожжи, источник углеводов магний сернокислый или марганец сер нокислый, кальциевую соль и воду во допроводную, дополнительно содержит аммоний фосфорнокислый или аммоний сернокислый, в качестве кальциевой соли - кальций хлористый или кальци углекислый, а в качестве источника углеводов - гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа при сле дующем соотношении компонентов,мас Гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа, % по сахару 0,7-1,2 Дрожжи БВК0,8-1,0 Аммоний фосфорнокислый или аммоний сернокислый0,15-0,2 Кальций углекислый или кальций хлористый 0,15-0,2 Магний сернокисльш или марганец сернокислый0,1-0,15 Вода водопроводная Остально Среду готовят следующим образом 1%-ную водную суспензию дрожжей БВК нагревают до , вьщерживают при этой температуре в течение 30.60 мин,затем охлаждают до 50 С и 07 вводят в нее остальные компоненты. Соль кальция вводят последней. Среду перемешивают, рН до стерилизации устанавливают в пределах 7,4-7,6, стерилизуют при 120-130 С в течение 30-40 мин. рН после стерилизации 6,8-7,2. Пример 1. Готовят среду следующего состава, мас.%: Гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа, % по сахару0,7 Дрожжи БВК0,8 Аммоний фосфорнокислый или сернокисльй 0,15 Кальций углекислый (мел) или хлористый0,15 Сернокислый магний или марганец0,1 Вода водопроводная Остальное Среду после стерилизации и охлаждения засевают Bacillus thuringiensis, культивируют в течение 37 ч при . На среде с указанной минимальной концентрацией компонентов выход целевого продукта (концентрация спор и кристаллов) составляет 3,2 млд. в 1 мл культуральной жидкости с вирулентностью по ЛК5-0 0,003%. Пример 2. Готовят среду следующего состава, мас.%: Гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа, % по сахару1 ,0 Дрожжи БВК0,9 Аммоний фосфорнокислый или сернокислый0,2 Калий фосфорнокислый , 0,07 Кальций углекислый (мел) или хлористый 0,18 Сернокислый магний или марганец0,13 Вода водопроводная Остальное На среде с указанной оптимальной концентрацией компонентов выход целевого продукта (концентрация спор и кристаллов) составляет 3,7 млрд.в 1 мл культуральной жидкости с вирулентностью по nKf(7 0,001%. Пример 3. Готовят среду следующего состава, йас.%: Гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа, % по сахару1 ,25 Дрожжи БВК1,0 Аммоний фосфорнокислый или сернокислый0,25 Калий фосфорнокислый 0,1 Кальций углекислый (мел) или хлористый 0,2 Сернокислый магний или марганец 0,15 Вода водопроводная Остально На среде с указанной максимальной концентрацией компонентов выход целевого продукта (концентрация СПОР и кристаллов) составляет 3,3 млд в 1 мл культуральной жидкости с вирулентностью 0,002%. П р и м е .р 4, Гексозосодержащий гидролизат древесины готовят из древесной стружки путем обработки ее 0,5%-ной серной кислотой сначал при 140-160 С, затем при 180-190°С По окончании гидролиза избыток сер074ной кислоты нейтрализуют известковым молоком . После фильтрации гидролиз ат очищают от летучих и нелетучих примесей (формальдегид, фурфурол, гуминовые вещества и другие) и затем упаривают в вакуумной упаривательной установке при 7Q-8cPc. После упаривания в гидролизате должно содержаться не менее 20-25% редуцирующих веществ, которые представлены глюкозой (80-90%) и незначительным количеством других сахароз: галактозой, маннозой, ксилозой, арабинозой. Кроме сехаров в гидролизате содержатся минеральные компоненты: соли калия, натрия, магния, железа, меди и другие в микроколичествах. Гидролизат торфа, получаемый с гидролизного завода, содержит 16,3% редуцирующих веществ. Данные по использованию гидролизатов для выращивания Bacillus thuringiensis представлены в табл.1,

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Bacillus thuringiensis, содержащая дрожжи, источник углеводов, магний сернокислый или марганец сернокислый , кальциевую соль и воду водопроводную, отличающаяся тем, что, с целью ускорения спорообразования Bacillus thuringiensis, о«а дополнительно содержит аммоний фосфорнокислый или аммоний сернокислый, в качестве кальциевой соли - кальций хлористый или кальций углекислый, а в качестве источника углеводов - гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа при следующем соотношении компонентов, мас.%: Гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа, % по саха(С ру0,7-1,25 (Л Дрожжи БВК0,8-1,0 Аммоний фосфорнокислый или аммоний сернокислый 0,15-0,25 Кальций углекислый или кальций хлористый 0,15-0,2 Магний сернокислый или марганец сернокислый0,1-0,15 Вода водопроводная Остальное

С древесным гйд39ролизатом

С торфяным

49 гидролизатом

Данные табл.1 показьшают, что на среде с торфяным гидролизатом культура штамма 49 растет и развивается нормально с образованием спор и крис- JQ таллов. Культуральная жидкость обладает высокой инсектицидной способностью. Некоторое снижение продуктив0,001 Споры, кристаллы (1:1), заспорованные кл. 5%, вегетативные кл. 1%

0,003

То же

ности культуры на среде с торфяным гидролизатом связано с менее тщательной очисткой гидролизата.

Сравнительные данные по времени ферментации и спорообразованию приведены в Фабл. 2.

Оптимальное47

Минимальное37

Оптимальное37

Максимальное37 Данные табл. 2 показывают, что предлагаемая среда позволяет за более корот кое время достичь 100%-ного спорообразования культуры Bacillus thuringiensia.

Т а б ;i и ц а 2

90

100 100 100 Использование питательной среды позволяет ускорить спорообразование Bacillus thuringiensiS, интенсифицировать производство, улучшить качество биомассы,удешевить производство.