Способ разделения и выделения кумаринов Советский патент 1992 года по МПК G01N30/90 

1

(21)4840869/25 (22)23.04.90 (46)23.10.92. Бюл. №39

(71)Кемеровский государственный медицинский институт

(72)П.В.Кузнецов и В.В.Шк.аренда

(56) Микаберидзе К.Г., Мониава И.И. Умбел- лиферон из листьев чая // Хим. природ, соед., 1974, Ms 1, с. 84.

Henke I.H. Praparative adsorpsion - chromatographische Trennung organischer Verblndungen an Sephadex 2H-20 mit Aceton // Labor. Praxis, 1986. V. 10, № 6, S. 668-679.

Гончаров Н.Ф., Ступакова Э.П., Комис- саренко Н.Ф., Гелла Э.В. Кумарины надземной части Potentilla erecta // Хим. природ, соед., 1978, N 2, с. 299-300.

Kumar V., Peiseh I., Wickremaratue D.B.M. Gleinene and gleinadiene, 5,7- dumethoxycoumarins from Murraya bleinee Root // Phytochemistry, 1987, v. 26, p. 511- 514.

(54) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ VI ВЫДЕЛЕНИЯ КУМАРИНОВ

(57) Сущность изобретения: для разделения, выделения кумаринов и их производных используют полимерный абсорбент аффинного типа - КХ-т, с иммобилизированным лигандом полифенольной природы. Хрома- тографический процесс проводят с небольшим объемом адсорбента в режиме жидкостной хроматографии низкого давления, подвижная фаза - дистиллированная вода, водно-органические смеси; детектирование - спектрофотометрическое. 2 ил.

С/1

С

Изобретение относится к химии и фармации, а именно к фитохимическому исследованию кумаринов.

Известны способы выделения и разделения кумаринов на сефадексах, полиамиде, в том числе и методом ВЭЖХ.

Недостатками данных способов являются невозможность аналитического разделения смесей кумаринов, использование токсичных, пожароопасных реагентов.

Известен способ разделения и выделе- ния кумаринов, включающий разделение анализируемой пробы путем пропускания при атмосферном давлении подвижного растворителя через колонку с полимерным адсорбентом, спектрометрическое детектирование разделенных компонентов в области 250-345 нм и их выделение в виде фракций элюата.

Недостатками известного способа являются: низкая устойчивость кремнеземной матрицы сорбента при , применение значительного количества адсорбента (около 160см3), длительность во времени, применение а качестве подвижной фазы органических растворителей.

Цель изобретения - повышение селективности и упрощение способа выделения кумаринов,

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу, включающему разделение пробы смеси кумаринов путем пропускания при атмосферном давлении подвижного растворителя через колонку с полимерным сорбентом, спектрометричеXI

XI

О 00 О XI

ское детектирование разделенных компонентов в области 250-345 им и их выделение а виде фракций элюата, подоижный растворитель, в качестве которого используют дистиллированную воду, или буферные растворы, или 10-60% раствор этанола в воде, пропускают через колонку с полимерным сорбентом аффинного типа - (±) катехип-азобензгидразидо-оксипропил-то йопалом.

На фиг. 1, 2 приведены хроматограммы, иллюстрирующие возможности предложенного, способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Анализируемую пробу разделяют путем пропускания подвижного растворителя, в кзчестпе которого используют дмстиллиро- панную воду, или буферные растворы, или 10-60% раствор этанола в воде, через колонку с полимерным сорбентом аффинного гипа - (±) катехин-азобензгидразидо-ок- сипропил-тойопалом, разделенные компоненты детектируют спекфофотометрически в области 250-345 нм и выделяют в виде Фракций злюата.

Пример 1. Разделение смеси неоди- кумарин-нитрофарин состава 1:1 на (±) ка- техин-эзобензгидразидо-оксипропил-тйо- пале (КХ-т).

Подготовка модельной смеси. Смешивают 1,5 мл 0,0) % раствора нитрофарина (в 0% водном диметилформамиде, ДМФА) с 1,5 мл 0,01 % растиора неодикумарина(о 4% водном или диметилсульфоксиде). Полученную смесь (3 мл) наносила а стеклянную хроматографическую чолонку (15x1 гм), заполненную 2,0 мл ( мм) геля КХ-т и специально подготовленную.

Подготовка хроматографической колонки. После упаковки 2 мл геля сорбента в хроматографическую колонку ее промывают последовательно 5 мл дистиллированной воды, 3 мл 2 М раствора натрия хлорида и отмывают хлорид-ионы дистиллированной водой до отрицательной пробы с нитратом серебра (25-30 мл).

Хроматографированио модельной смеси. Пробу объемом 3 мл хроматографируют на подготовленной колонке, используя в ка- местпе подвижной фазы дистиллированную воду. Элюат собирают фракциями по 3 мл,

скорость хроматографирования 1,1-1,3 мл/ч, детектирование при длине волны 275 нм (спектрофотометр СФ-26).

Хроматографический профиль разделения иллюстрируется графиком на фиг. 1 - хроматограммой разделения смеси неоди- кумарина (I) и нитрофарина (II) на КХ-т. Подвижная фаза-дистиллированная вода. Пример 2. Разделение смеси эскулин-кумарин-эскулетин-метилумбеллифер-он на (±) катехин-азобензгидразидо-оксип- ропил-тойопале.

Подготовка модельной смеси, Смешивают 0,5 мл 0.04% раствора эскулина (в

16% водном диметилсульфоксиде; 0,2мг), 0,325 мл 0,04% раствора (в 16% водном диметилсульфоксиде; 0,13 мг) кумарина, 0,2 мл 0,04% раствора (в 16% водном диметилсульфоксиде; 0,08 мг) эскулетина с 0,2 мл такого

же раствора метилумбеллиферона. Полученную смесь (4 мл) хроматографируют на КХ-т. Хроматографическую колонку готовят по примеру 1.

Условия хроматографирования. Скорость хроматографирования 0,3 мл в минуту, объем фракции 2,5 мл, упакованный объем геля 5 мл, детектирование при длине волны 320 нм.

Хроматографический профиль разделеиия иллюстрируется графиком на фиг, 2 - хроматограммой разделения смеси: эску- лиы (I), кумарин (II), эскулетин (II) и метилум- беллиферон (IV) на КХ-т. Подвижная фаза - дистиллированная вода.

Формула изобретения

Способ разделения и выделения кума- ринов, включающий разделение анализируемой пробы путем пропускания при атмосферном давлении подвижного растворигеля через колонку с полимерным сорбентом, спектрометрическое детектирование разделенных компонентов в области 250- 345 нм и их выделение в виде фракций элюата, отличающийся тем, что, с целью

повышения селективности и упрощения способа, подвижный растворитель, в качестве которого используют дистиллированную воду или буферные растворы, или 10-60%-й раствор этанола вводе, пропускают через колонку с полимерным сорбентом аффинного типа - (±) катехин-азобензгид- разидо-оксипропил-тойопалом.

Я НО

Wнго

0.525 30 75 100 Фиг2

v,w

Фиг.1

Ч, мл