СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАРБОКСИЗАЩИЩЕННЫХ ГЛИКОПЕПТИДОВ ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ Российский патент 1996 года по МПК C07J63/00 

Изобретение относится к новым способам получения гликопептидов тритерпенового гликозида глицирризиновой кислоты (ГК) (I) общей формулы (II), представляющих интерес для медицины в качестве иммуномодуляторов [1 3]

I R OH;
IIa R CH₃SCH₂CH= L-Met (OMe);
IIб R (CH₃)₂CH= L-Val (OMe);
IIв R C₆H₅CH= L -Phe(OMe);
IIг R CH= L-Ala (OMe);
IIд R MeCOOCH₂CH= L-Glu (OMe)₂;
IIж R CHAla (OBZl);
IIз R C₆H₅CHPhe (OBZl);
IIи R (CH₃)₂CHCH(ONB);
IIк R HOC₆H₄CHONB);
IIл R (CH₃)₂CHCH- Leu (OtBu);
IIм R C₆H₅CH₂COOCH₂CHGlu(OBZl)₂
Известен карбодиимидный способ получения карбокси-защищенных гликопептидов ГК [4] общей формулы (V):
Схема 1



заключающийся в конденсации ГК (карбокси-компонент) с эфирами L-аминокислот (метиловыми, этиловыми и бензиловыми), взятыми в виде их гидрохлоридов (амино-компонент) (АК) общей формулы
RNH₂ · HCl (III), где
R=CH₃-), CH₃-б),
CH-CH₂-) CH₂- с помощью N,N'-дициклогексилкарбодиимида (ДЦГК) в присутствии основания-триэтиламина (ТЭА) в среде хлористого метилена (СН₂Cl₂) при комнатной температуре в течение 48 ч при мольном соотношении реагентов ГК:АК:ДЦГК:ТЭА 1,0:4,5:3,0:4,5 ммоль (схема 1) [4]
Выходы продуктов реакции составляют 74-79% (смесь гликопептидв V и N-ацилмочевины VI).

Недостатком данного способа получения гликопептидов ГК является образование в ходе реакции побочной N-ацилмочевины (VI) (схема 1), получающейся в результате перегруппировки активированного интермедиата-0-ацилизомочевины (IV), образующейся из ГК (I) и ДЦГК в ходе реакции, N-ацилмочевина (VI), как правило, устойчива и трудно отделяется от целевых продуктов (V). Для выделения индивидуальных соединений требуется применение колоночной хроматографии. Ограничением способа является и то, что исходное соединение глицирризиновая кислота не растворима в хлористом метилене, что затрудняет проведение процесса из-за гетерогенности реакционной смеси. Метод непригоден для проведения наработочных синтезов (нетехнологичен).

Известен способ получения гликопептидов ГК формулы (VIII) [7] по следующей схеме (2) (прототип):
Схема 2

H

VIIIa R L-Val(OMe);
VIIIб R L-Val(OtBu);
VIIIв R Gly-L-Leu(OMe);
VIIIг R L-Glu(OMe)₂ заключающийся в обработке ГК (I) N-гидроксисукцинимидом (HOSu) в присутствии N,N'-дициклогексилкарбодиимида (ДЦГК) в среде растворителя (ТГФ или диоксан) при соотношении реагентов ГК:HOSu:ДЦГК 2: (10-10,4): (6-6,4) ммоль при 0-5^оС в течение 3 ч, при 20-22^оС в течение 6 ч, 4-8^оС 12 ч и последующем взаимодействии образовавшегося трис-оксисукцинимидного эфира (VII) с гидрохлоридами метиловых (трет-бутиловых) эфиров аминокислот или дипептидов (аминокомпонент) формул R-NH₂ · HCl, где
R (CH₃)₂CH-) (CH₃)₂CH-,
(CH₃)₂CH-CO-CH₂-(в), -H₂)₂-COOMe (г) в присутствии основания триэтиламина (ТЭА) при соотношении аминокомпонента к основанию (6-7):(9,8-10,8) ммоль при 0-15^оС с последующим выдерживанием реакционной смеси при комнатной температуре в течение 24 ч. Выход целевых продуктов (VIII) достигал 75-86%
Недостатком данного способа является то, что при использовании N-гидроксисукцинимида в присутствии ДЦГК возможно протекание побочной реакции, приводящей к образованию сукцинимидоксикарбонил-β-аланина (IX) [5, 6] который может реагировать с аминокомпонентами (эфирами аминокислот), образуя сукцинимидоксикарбонил- β-аланиламиды, а также производные мочевины β-аланина, что снижает выход целевых продуктов (гликопептидов ГК).

N-OH + N-O_

_____→ N-O-CHON
Эта тенденция к образованию побочных продуктов побудила к поиску нового метода получения гликопептидов ГК, позволяющего получать чистые продукты с более высоким выходом.

Целью изобретение является разработка нового селективного способа получения гликопептидов ГК с использованием в качестве стартового вещества гликозида без предварительной защиты гидроксильных групп углеводной части молекулы, позволяющего получать целевые продукты с более высоким выходом в индивидуальном состоянии.

Цель достигается способом получения карбоксизащищенных гликопептидов глицирризиновой кислоты общей формулы (II а-м) без предварительной защиты гидроксильных групп гликозида, заключающимся в том, что гликозид (I) (карбокси-компонент) обрабатывают N-гидроксибензотриазолом (HOBt) и N,N'-дициклогексилкарбодиимидом (ДЦГК) в среде сухого тетрагидрофурана (ТГФ) или диоксана при 0-5^оС в течение 1,0 ч, при комнатной температуре 6-8 ч при мольном соотношении реагентов ГК:HOBt:ДЦГК, равном 1:(3,5-4,0):(3,4-4,0) ммоль, и подвергают взаимодействию с соединениями общей формулы R₁NH₂ · H-X (XI), где
R₁= CH₃SCH₂CHa), (CH₃)₂CHб), C₆H₅CHв),
CH(г), MeOOCCH₂CHд), CH
C₆H₅CH), (CH₃)₂CHCH
HOC₆H₄CH (CH₃)₂CHCH,
C₆H₅CH₂COOCH₂CH; X Cl (для (XI) a-д, з-л); SO₃C₆H₅ (для (XI) и, к); SO₃C₆H₄CH₃ (для (XI) ж, м) (эфиры L-аминокислот:метиловые, бензиловые, n-нитробензиловые или трет-бутиловые, взятые в виде их гидрохлоридов, тозилатов или бензолсульфонатов) (аминокомпонент) в присутствии третичного основания (ОСН) (N-метилморфолина, трибутиламина, триэтиламина) при мольном соотношении реагентов R₁NH₂ · HX OCH, равном (3,5-4,0):(4,2-7,2) ммоль, при 0-5^оС с последующим выдерживанием смеси при комнатной температуре в течение 24 ч (схема 3).

Схема 3


N
Способ заключается в том, что глицирризиновую кислоту (I) (карбокси-компонент) (1 ммоль) обрабатывают при перемешивании сначала N-гидроксибензотриазолом (HOBt) (3,5-4,0 ммоль) и N,N'-дициклогексилкарбодиимидом (3,4-4,0 ммоль) в среде сухого ТГФ или диоксана при 0-5^оС в течение 1,0 ч, при комнатной температуре 6-8 ч, получая активированный интермедиат (Х), который после отделения осадка N,N'-дициклогексилмочевины подвергают взаимодействию с амино-компонентом (АК) общей формулы R₁-NH₂ · HX (XI) (метиловыми, бензиловыми, n-нитробензиловыми или трет-бутиловыми эфирами L-аминокислот в виде их гидрохлоридов, тозилатов или бензолсульфонатов) в присутствии третичного основания (ОСН) (N-метилморфолина, трибутиламина, триэтиламина) в мольном соотношении АК:ОСН, равном (3,5-4,0):(4,2-7,2) ммоль при 0-5^оС с последующим выдерживанием реакционной смеси при комнатной температуре в течение 24 ч. Целевые гликопептиды (II) а-м) выделяют путем разбавления реакционной смеси холодной водой и подкисления лимонной кислотой до рН ≈ 3. Полученный осадок отфильтровывают, промывают водой и высушивают. Для получения аналитически чистых образцов продукты переосаждают или перекристаллизовывают из хлороформа спирта-эфира, ацетона-гексана или метанола-эфира. Выход гликопептидов (II а-м), гомогенных по ТСХ, составляет 82,3-94,4%
Существенные отличия предлагаемого способа заключаются в следующем.

Для активации карбоксильных групп глицирризиновой кислоты используются N-оксибензотриазол (HOBt) и N,N'-дициклогексилкарбодиимид (ДЦГК) (схема 3) вместо N-гидроксисукцинимида (HOSu) и ДЦГК в способе-прототипе (схема 2).

В качестве активированного интермедиата образуется при этом трис-оксибензотриазольный эфир ГК (X).

Преимущества предлагаемого способа:
высокая селективность, не образуется побочных продуктов как в способе-прототипе;
выход целевых гликопептидов (II) выше (82-94%), чем в способе-прототипе (75-86%);
время образования активированного интермедиата (X) (схема 3) составляет 7-8 ч в предлагаемом способе, в то время как по способу-прототипу затрачивается 20-22 ч на получение активированного оксисукцинимидного эфира ГК (VII) (схема 2).

П р и м е р 1. 1-0-[(3β,20β)-11,30-диоксо-30-дезокси-(N-L-метионина метиловый эфир)-олеан-2-ен-3-ил] -2-0-[ β-D-6-оксо-6-дезокси-6-6(N-L-метионина метиловый эфир)-глюкопиранозил]-β -D-6-оксо-6-дезокси-6- (N-L-метионина метиловый эфир)-глюкопиранозид (IIа).

а) К раствору 0,82 г (1 ммоль) ГК в 25 мл сухого диоксана при 0-5^оС прибавили при перемешивании 0,47 г (3,5 ммоль) HOBt, 0,72 г (3,5 ммоль) ДЦГК и перемешивали при этой температуре 1 ч, при комнатной температуре 6 ч, отфильтровали осадок дициклогексилмочевины, а к фильтрату, охлажденному в бане со льдом, прибавили 0,80 г (4 ммоль) гидрохлорида метилового эфира L-метионина L-Met(OMe) HCl (XIa) и 0,5 мл (5 ммоль) N-метилморфолина, выдержали реакционную смесь с периодическим перемешиванием при комнатной температуре в течение 24 ч и вылили в 200 мл холодной воды (+10^оС), подкислили лимонной кислотой до рН ≈3. Отфильтровали осадок гликопептида (IIa), промыли его несколько раз водой, высушили, получили 1,11 г (88,1%) продукта, гомогенного по ТСХ. Для получения аналитически чистого образца часть продукта переосадили из ацетона-гексана. R_f 0,68 (хлороформ-метанол-вода 45:10:1), [α]20D

+28,5^о (с 0,03; спирт). ИК, ν, см^-1: 3600-3200 (ОН, NH); 1740 (COOR); 1660 (С=О); 1540 (CONH).

УФ, λEtOHmax

(lg ε): 249,5 нм (4,12).

Найдено, С 57,22; Н 7,35; N 3,53.

C₆₀H₉₅N₃O₁₉S₃. М.в. 1258,8.

Вычислено, С 57,24; Н 7,62; N 3,34.

б) В условиях опыта (пример 1а) из 0,83 г (1 ммоль) ГК, 0,54 г (4 ммоль) HOBt, 0,82 г (4 ммоль) ДЦГК, 0,8 г (4 ммоль) L-Met(OMe) HCl (XIa) и 0,5 мл (5 ммоль)N-метилморфолина получили 1,19 г (94,4%) гликопептида (IIа) с R_f 0,68 (хлороформ-метанол-вода 45:10:1). После перекристаллизации из хлороформа-спирта-эфира выход 0,96 г (76,6%). [α]20D

+27,5^оС (с 0,07; спирт). Порошок с желтоватым оттенком. Т. пл. 169-171^оС (с разл.).

в) В условиях опыта (пример 1а) из 0,82 г (1 ммоль) ГК, 0,47 г (3,5 ммоль) HOBt, 0,72 г (3,5 ммоль) ДЦГК, 0,80 г (4 ммоль) L-Met(OMe) HCl (XIa) и 1,0 мл (4,2 ммоль) трибутиламина получили 1,05 г (82,3%) гликопептида (IIa), гомогенного по ТСХ. Для получения аналитически чистого образца часть продукта переосадили из хлороформа-спирта-эфира. R_f 0,68 (хлороформ-метанол-вода 45:10:1), [α]20D

+33^о (с 0,02; спирт).

П р и м е р 2. 1-0-[(3 β,20β )-11,30-диоксо-30-(N-L-валина метиловый эфир)-олеан-12-ен-3-ил] -2-0-[ β-D-6-оксо-6-дезокси-6-(N- L-валина метиловый эфир)- глюкопиранозид (IIб).

К раствору 1,64 г (2 ммоль) ГК в 50 мл сухого тетрагидрофурана при 0-5^оС прибавили 0,94 г (7 ммоль) HOBt, 1,44 г (7 ммоль) ДЦГК и перемешивали при этой температуре 1 ч, 7 ч при комнатной температуре. Отфильтровывали осадок дициклогексилмочевины, к фильтрату, охлажденному в бане со льдом, прибавили 1,36 г (8 ммоль) L-Val(OMe) HCl (XIб) и 1 мл (10 ммоль) N-Me-морфолина, выдержали реакционную смесь при комнатной температуре 24 ч, вылили в 400 мл холодной воды, подкисленной лимонной кислотой до рН ≈3. Отфильтровывали осадок, промыли водой, высушили. Выход гликопептида (IIб) 2,16 г (93,1%). Для получения аналитически чистого образца продукт перекристаллизовали из смеси ацетона-гексана, получили 1,70 г (73,3%) гликопептида (IIб) в виде белого порошка, [α]20D

= +31^о (с 0,02, этанол), R_f 0,62 (хлороформ-спирт 5: 1); 0,54 (хлороформ-спирт 7:1); 0,68 (хлороформ-спирт 4:1). ИК, ν, см^-1: 3600-3200 (ОН, NH); 1740 (COOMe); 1670 (C₁₁=O); 1550 (СONH), УФ, λEtOHmax (lg ε): 250 нм (4,23).

Найдено, С 61,63; Н 8,24; N 4,02.

C₆₀H₉₅N₃O₁₉. М.в. 1162,43.

Вычислено, С 61,99; Н 8,23; N 3,61.

П р и м е р 3. 1-0-[(3 β,20β )-11,30-диоксо-30-(N-L-фенилаланина метиловый эфир)-олеан-12-ен-3-ил]-2-0-[(β-D-6-оксо-6-дезо- кси-6-(N-L-фенил- аланина метиловый эфир)-глюкопиранозил] β-D-6-оксо-6-дезокси-6-(N-L-фенилаланина метиловый эфир)-глюкопиранозид (IIв).

К раствору 1,64 г (2 ммоль) глицирризиновой кислоты в 50 мл сухого диоксана при 0-5^оС прибавили 1,0 г (7,4 ммоль) HOBt, 1,40 г (6,8 ммоль) ДЦГК и перемешивали при этой температуре 1 ч, при комнатной температуре 7 ч, отфильтровали осадок дициклогексилмочевины, к фильтрату прибавили 1,50 г (7 ммоль) L-Phe(OMe) HCl (XIв) и 1,0 мл (10 ммоль) N-Me-морфолина, выдерживали смесь с периодическим перемешиванием при комнатной температуре 24 ч, вылили в 400 мл холодной воды, подкисленной лимонной кислотой до рН ≈ 3, отфильтровали осадок, промыли его водой, высушили. Получили 2,45 г (93,9%) гликопептида (IIв). Для получения аналитически чистого образца часть продукта перекристаллизовывали из ацетон-гексана. Белый порошок. [α]20D

+30^о (с 0,02; этанол). R_f 0,69 (хлороформ-метанол-вода 45:10:1); 0,67 (хлороформ-спирт 5: 1). ИК, ν, см^-1: 3600-3200 (OH, NH); 1740 (COOMe), 1650 (C₁₁=О); 1520 (CONH). УФ, λEtOHmax (lg ε): 251 нм (4,11).

Найдено, С 65,68; Н 7,66; N 3,65.

C₇₂H₁₅N₃O₁₉. М.в. 1306,75.

Вычислено, С 66,17; Н 7,34; N 3,22.

П р и м е р 4. 1-0-[(3β -20β)-11,30-диоксо-30-(N-L-аланина метиловый эфир)-олеан-12-ен-3-ил]-2-0-[ β-D-6-оксо-6-дезокси-6-(N-L- аланина метиловый эфир)-глюкопиранозил] β-D-6-оксо-6-дезокси-6-(N-L-аланина метиловый эфир)-глюкопиранозид (IIг).

К раствору 0,82 г (1 ммоль) ГК в 20 мл сухого диоксана при 0-5^оС прибавили 0,47 г (3,5 ммоль) HOBt, 0,7 г (3,4 ммоль) ДЦГК и перемешивали при этой температуре 1 ч, 7 ч при комнатной температуре, отфильтровали осадок дициклогексилмочевины, к фильтрату, охлажденному в бане со льдом, прибавили 0,7 г (4 ммоль) гидрохлорида метилового эфира L-аланина L-Ala(OMe) HCl (XIг), по каплям 0,5 мл (5 ммоль) N-метилморфолина и выдержали смесь с периодическим перемешиванием 24 ч. Вылили смесь в 200 мл холодной воды, подкислили лимонной кислотой до рН ≈ 3, осадок отделили, промыли его водой и высушили. Получили 0,9 г (82,5%) гликопептида (IIг).

Для получения аналитически чистого образца часть продукта переосадили из хлороформа-спирта-эфира. Аморфное вещество желтоватого цвета. R_f 0,75 (хлоро- форм-спирт 7:1). [α]20D

+33^о (с 0,06; MeOH). ИК, ν, см^-1: 3600-3200 (ОН, NH); 1745 (COOMe); 1665 (С=О); 1550 (CONH, амид II), 1230 (CONH, амид III). УФ, λEtOHmax (lg ε): 249 нм (3,93).

Найдено, С 59,77; Н 7,67; N 3,52.

C₅₄H₈₃N₃O₁₉. М.в. 1078,22.

Вычислено, С 60,15; Н 7,75; N 3,90.

П р и м е р 5. 1-0-[(3 β,20 β)-11,30-диоксо-30-(N-L-глутаминовой кислоты диметиловый эфир)-олеан-12-ен-3-ил] -2-0-[β-D-6- оксо- 6-дезокси-6-(N-L-глутаминовой кислоты диметиловый эфир)-глюкопиранозил] β-D-6-оксо-6-дезокси-6-(N-L-глутаминовой кислоты диметиловый эфир)-глюкопиранозид (IIд).

К раствору 0,82 г (1 ммоль) ГК в 30 мл сухого диоксана при 0-5^оС прибавили 0,50 г (3,7 ммоль) HOBt, 0,7 г (3,4 ммоль) ДЦГК и перемешивали при этой температуре 1 ч, при комнатной температуре 6 ч. Отфильтровали осадок дициклогексилмочевины, к фильтрату, охлажденному в бане со льдом, прибавили 0,72 г (4 ммоль) гидрохлорида диметилового эфира L-глутаминовой кислоты L-Glu(OMe)₂ HCl (XIд), по каплям 0,7 г (7,2 ммоль) сухого ТЭА. Выдержали смесь с периодическим перемешиванием при комнатной температуре 24 ч. Вылили смесь в холодную воду, подкислили лимонной кислотой до рН ≈ 3, осадок отделили, промыли водой, высушили и взвесили. Получали 1,10 г (84,5%) гликопептида (IIд) в виде аморфного вещества желтоватого цвета. Для получения аналитически чистого образца часть продукта переосадили из смеси хлороформа-метанола эфиром. R_f 0,65 (хлороформ-спирт 10:1), [α]20D

+42^о (с 0,02, MeOH). ИК, ν, см^-1: 3600-3200 (ОН, NH); 1740 (COOMe); 1660 (С₁₁=0); 1540 (CONH, амид II); 1230 (CONH, амид III). УФ, λEtOHmax (lg ε): 249 нм (4,05).

Найдено, С 58,11; Н 7,40; N 3,14.

C₆₃H₉₉N₃O₂₅. М.в. 1298,4.

Вычислено, С 58,48; Н 7,35; N 3,25.

П р и м е р 6. 1-0-[(3 β,20 β)-11,30-диоксо-30-(N-L-аланина бензиловый эфир)-олеан-12-ен-3-ил] -2-0-[ β-D-6-оксо-6-дезокси- 6-(N-L-аланина бензиловый эфир)-глюкопиранозил] β-D-6-оксо-6-дезокси-6-(N-L-аланина бензиловый эфир)-глюкопиранозид (IIж).

К раствору 1,64 г (2 ммоль) ГК в 50 мл сухого диоксана при 0-5^оС прибавили 1,0 г (7,4 ммоль) HOBt, 1,4 г (6,8 ммоль) ДЦГК, перемешивали при этой температуре 1,0 ч, при комнатной температуре 7 ч, отфильтровали осадок дициклогексилмочевины, фильтрат охладили в бане со льдом и прибавили 2,53 г (8 ммоль) тозилата бензилового эфира L-аланина L-Ala(OBzI) CH₃C₆H₄SO₃H (XIж), по каплям 1,2 мл (12,4 ммоль) триэтиламина (ТЭА) и выдержали с периодическим перемешиванием при комнатной температуре 24 ч. Вылили смесь в 400 мл холодной воды, добавили лимонную кислоту до рН ≈ 3, отфильтровали осадок, промыли его водой, высушили. Получили 2,55 г (97,3%) гликопептида (IIж), содержащего примесь n-толуолсульфокислоты. После перекристаллизации из метанола-эфира получили 2,45 г (93,5%) чистого гликопептида (IIж) (порошок желтоватого цвета). R_f 0,67 (хлороформ-метанол-вода 37:10:1); 0,56 (хлороформ-спирт 4:1). [α]20D

+40,5^о (с 0,01; этанол). ИК, ν, см^-1: 3600-3200 (OH, NH); 1740 (COOR), 1660 (С=О); 1550 (CONH); 1500 (Ph). УФ, λMeOHmax (lg ε): 250 нм (4,14).

Найдено, С 65,50; Н 7,86; N 2,78.

С₇₂Н₉₅N₃O₁₉.

Вычислено, С 66,19; Н 7,33; N 3,22. М.в. 1306,49.

П р и м е р 7. 1-0-[(3 β,20 β)-11,30-диоксо-30-(N-L-фенилаланина бензиловый эфир)-олеан-12-ен-3-ил]-2-0-[ β-D-6-оксо-6-дезокси-6-(N-L-фенилаланина бензиловый эфир)-глюкопиранозил] β-D-6-оксо-6-дезокси-6-(N-L-фенилаланина бензиловый эфир)-глюкопиранозид (IIз).

К раствору 1,64 г (2 ммоль) ГК в 30 мл диоксана при 0-5^оС прибавили 1,0 г (7,4 ммоль) HOBt, 1,40 г (6,8 ммоль) ДЦГК, перемешивали при этой температуре 1 ч, при комнатной температуре 7 ч, отфильтровали осадок дициклогексилмочевины, фильтрат охладили в бане со льдом и прибавили 2,33 г (8 ммоль) гидрохлорида бензилового эфира L-фенилаланина L-Phe(OBzI) HCl (XIз) и по каплям 1,2 мл (12,4 ммоль) сухого триэтиламина и выдержали при комнатной температуре с периодическим перемешиванием 24 ч. Вылили смесь в 400 мл холодной воды, добавили лимонной кислоты до рН ≈ 3, отфильтровали осадок, промыли его водой, высушили, получили 2,77 г (90,8%) гликопептида (IIз), который переосадили из смеси хлороформа-спирта-эфира. Получили 2,68 г (87,9%) чистого продукта (IIз) в виде порошка желтоватого цвета, т. пл. 123-125^оС. [α] 20D

+35^о (с 0,01; метанол). R_f 0,70 (хлороформ-метанол-вода 45:10:1); ИК, ν, см^-1: 3500-3200 (ОН, NH); 1740 (СООСН₂С₆Н₅); 1660 (С=О), 1530 (СONH); 1505 (Ph). УФ, λEtOHmax (lg ε): 251 нм (4,29).

Найдено, С 62,96; Н 7,23; N 2,72.

C₈₉H₁₀₇N₃O₁₉. М.в. 1522,76.

Вычислено, С 70,19; Н 7,08; N 2,76.

П р и м е р 8. 1-0-[(3 β,20β )-11,30-диоксо-30-(N-L-лейцина нитробензиловый эфир)-олеан-12-ен-3-ил]-2-0-[ β-D-6-оксо-6-дезо- кси-6-(N-L-лейцина нитробензиловый эфир)-глюкопиранозил] β-D-6-оксо-6-дезокси-6-(N-L-лейцина нитробензиловый эфир)- глюкопиранозид (IIи).

К раствору 0,82 г (1 ммоль) ГК в 30 мл сухого диоксана при 0-5^оС прибавили 0,47 г (3,5 ммоль) HOBt, 0,72 г (3,5 ммоль) ДЦГК и перемешивали при этой температуре 1 ч, при комнатной температуре 6 ч, отфильтровали осадок дициклогексилмочевины, к фильтрату, охлажденному в бане со льдом, прибавили 1,65 г (4 ммоль) бензолсульфоната нитробензилового эфира L-лейцина L-Leu(ONB) C₆H₅SO₃H (XIи) и по каплям 0,5 г (5 ммоль) N-метилморфолина и выдержали смесь с периодическим перемешиванием при комнатной температуре 24 ч. Вылили смесь в 200 мл холодной воды, подкислили лимонной кислотой до рН ≈ 3, отфильтровали осадок, промыли его водой, высушили, получили 1,45 г (92,4%) гликопептида (IIи). Для получения аналитически чистого образца часть продукта переосадили из ацетона-гексана. Аморфный порошок желтого цвета. R_f 0,69 (хлороформ-метанол-вода 45:10:1); [α]20D

+35^о (с 0,01; MeOH). ИК, ν, см^-1: 3600-3200 (OH, NH); 1740 (COOR); 1640 (С=О); 1610 (Ph), 1530 (СONH). УФ, λEtOHmax (lg ε): 255 нм (4,24).

Найдено, С 61,73; Н 7,41; N 4,87.

C₉₁H₁₁₀N₆O₂₅. М.в. 1567,62.

Вычислено, С 62,05; Н 7,07; N 5,36.

П р и м е р 9. 1-0-[(3 β,20β )-11,30-диоксо-30-(N-L-тирозина n-нитробензиловый эфир)-олеан-12-ен-3-ил] -2-0-[ β-D-6-оксо-6-дезокси-6-(N-L-тирозина n-нитробензиловый эфир)-глюкопиранозил] β-D-6-оксо- 6-дезокси-6-(N-L-тирозина n-нитробензиловый эфир)-глюкопиранозид (IIк).

К раствору 0,82 г (1 ммоль) ГК в 25 мл сухого ТГФ при 0+5^оС прибавили 0,47 г (3,5 ммоль) HOBt, 0,72 г (3,5 ммоль) ДЦГК и перемешивали при этой температуре 1 ч, при комнатной температуре 7 ч, отфильтровали осадок дициклогексилмочевины, к фильтрату прибавили 1,75 г (3,7 ммоль) бензолсульфоната n-нитробензилового эфира L-тирозина L-Tyr(OBzI-NO₂) C₆H₅SO₃H (XIк) и 0,5 мл (5 ммоль) N-Me-морфолина, выдержали смесь при комнатной температуре 24 ч с периодическим перемешиванием и вылили в 200 мл холодной воды, подкисленной лимонной кислотой до рН ≈ 3, отфильтровали осадок, промыли его водой, высушили, получили 1,72 г гликопептида (IIк) с примесью C₆H₅SO₃H, который переосадили из смеси хлороформа-спирта-эфира. Выход чистого продукта 1,45 г (83,6%) (аморфное вещество желтого цвета), [α]20D

+32^о (с 0,025, этанол), R_f 0,66 (хлороформ-метанол-вода 45: 10:1). ИК, ν, см^-1: 3600-3200 (OH, NH); 1760, 1745 (COOR); 1660, 1650, 1640 (С=О); 1610 (Ph); 1540 (CONH). УФ, λEtOHmax (lg ε): 228 нм (4,08); 262 нм (4,42).

Найдено, С 61,93; Н 6,25; N 4,37.

C₉₀H₁₀₄N₆O₂₆. М.в. 1717,8.

Вычислено, С 62,92; Н 6,10; N 4,89.

П р и м е р 10. 1-0-[(3 β,20β )-11,30-диоксо-30-(N-L-лейцина трет-бутиловый эфир)-олеан-12-ен-3-ил]-2-0-[ β-D-6-оксо-6-дезо- кси-6-(N-L-лейцина трет-бутиловый эфир)-глюкопиранозил] β-D-6-оксо-6-дезокси-6-(N-L-лейцина трет-бутиловый эфир)-глюкопиранозид (IIл).

К раствору 1,64 г (2 ммоль) ГК в 30 мл сухого диоксана при 0-5^оС прибавили 1,0 г (7,4 ммоль) HOBt, 1,4 г (6,8 ммоль) ДЦГК и перемешивали при этой температуре 1 ч, при комнатной температуре 7 ч, отфильтровали осадок дициклогексилмочевины, к фильтрату, охлажденному в бане со льдом, прибавили 1,79 г (8 ммоль) гидрохлорида трет-бутилового эфира L-лейцина L-Leu(OtBu) HCl (XIл) и по каплям 1,2 мл (12,4 ммоль) ТЭА и выдержали при комнатной температуре с периодическим перемешиванием 24 ч. Вылили смесь в 400 мл холодной воды, подкислили лимонной кислотой до рН ≈ 3, отфильтровали осадок, промыли его водой, высушили, получили 2,2 г (82,7%) гликопептида (IIл), гомогенного по ТСХ. Для получения аналитически чистого образца часть продукта переосадили из ацетона-гексана. R_f 0,79 (хлороформ-спирт 7:1). [α]20D

+45^о (с 0,02, метанол). Т. пл. 165-167^оС (разл.). ИК, ν, см^-1: 3600-3200 (OH, NH); 1740 (COOR); 1660 (C=O); 1530 (CONH). УФ, λMeOHmax (lg ε): 251 нм (3,95).

Найдено, С 64,73; Н 9,40; N 2,73.

C₇₂H₁₁₉O₁₉N₃. М.в. 1330,68.

Вычислено, С 64,98; Н 9,01; N 3,16.

П р и м е р 11. 1-0-[(3β,20β )-11,30-диоксо-30-(N-L-глутаминовой кислоты дибензиловый эфир)-олеан-12-ен-3-ил] -2-0-[ β-D- 6-оксо-6-дезокси-6-(N-L-глутаминовой кислоты дибензиловый эфир)-глюкопиранозил] β-D-6-оксо-6-дезокси-6-(N-L-глутаминовой кислоты дибензиловый эфир)-глюкопиранозид (IIм).

К раствору 1,64 г (2 ммоль) глицирризиновой кислоты в 50 мл сухого диоксана при 0-5^оС прибавили 0,94 г (7 ммоль) HOBt, 1,4 г (6,8 ммоль) ДЦГК и перемешивали смесь при этой температуре 1 ч, при комнатной температуре 6 ч. Отфильтровали осадок дициклогексилмочевины, к фильтрату, охлажденному в бане со льдом, прибавили 4,10 г (8 ммоль) тозилата дибензилового эфира L-глутаминовой кислоты L-Glu(OBzI)₂CH₃C₆H₄SO₃H (XIм) и 1,2 мл (1,2 ммоль) сухого N-метилморфолина. Выдержали смесь с периодическим перемешиванием при комнатной температуре 24 ч, вылили в 400 мл холодной воды, подкислили лимонной кислотой до рН ≈ 3, отфильтровали осадок, промыли его водой и высушили Получили 4г пpодукта (IIм) с примесью TSOH, который переосадили из хлороформа-спирта-эфиром. Выход 3,0 г (85,7%). R_f 0,70 (хлороформ-метанол-вода 45:10: 1), [α] 20D

+25^о (с 0,02; MeOH). ИК, ν, см^-1: 3600-3200 (ОН, NH); 1740 (COOR); 1650 (С= O); 1620 (С₆Н₅); 1540 (CONH); 1500 (Ph). УФ, λEtOHmax (lg ε): 250 нм (4,11).

Найдено, С 67,60; Н 7,15; N 2,85.

С₉₉Н₁₁₉N₃О₂₅. М.в. 1750,96.

Вычислено, С 67,91; Н 6,85; N 2,40.

Использование: в медицине в качестве иммуномодуляторов. Сущность изобретения: продукт - карбоксизащищенные гликопептиды, которые получают из глицирризиновой кислоты (ГК) без предварительной защиты гидроксильных групп углеводной части молекулы. По предлагаемому способу ГК обрабатывают N-гидроксибензотриазолом и N,N′-дициклогексилкарбодиимидом при 0 - 5^oС в среде тетрагидрофурана или диоксана в течение 1 ч, при комнатной температуре 6 - 7 ч, получая активированный трис-оксибензотриазольный эфир ГК, который в растворе вводят в реакцию с аминокомпонентом - эфирами L-аминокислот (метиловыми, бензиловыми, n-нитробензиловыми или третбутиловыми) в виде их гидрохлоридов, тозилатов или бензосульфатов в присутствии третичного основания (N-метилморфина, триэтиламина, трибутиламина) при 0 - 5^oС с последующим выдерживанием смеси при комнатной температуре в течение 24 ч. Выход целевых соединений 82 - 94%.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАРБОКСИЗАЩИЩЕННЫХ ГЛИКОПЕПТИДОВ ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ общей формулы I

где R = L - Met(OMe), L - Val(OMe), L - Phe(OMe), L- Ala(OMe), L - Glu(OMe)₂, L - Ala(OBzL), L - Phe(OBzL), L - Leu(ONBz), L - Tyr(ONBz), L - Leu(OtBu), L - Glu (OBzL)₂,
этерификацией глицирризиновой кислоты в присутствии N, N′- дициклогексилкарбодиимида в среде диоксана или тетрагидрофурана при 0 - 15^oС с дальнейшим выдерживанием при комнатной температуре и с последующей обработкой полученного продукта солью сложного эфира аминокислоты в присутствии третичного основания при 0 - 5^oС в течение 24 ч, отличающийся тем, что глицирризиновую кислоту подвергают взаимодействию с N-гидроксибензотриазолом при молярном соотношении 1 : 3,5 - 4,0 : 3,5 - 4,0 соответственно с последующей обработкой полученного трис-оксибензотриазольного эфира глицирризиновой кислоты соединением общей формулы
R₁NH₂ • HX,











X - Cl, SO₃C₆H₅ или SO₃S₆H₄CH₃,
в молярном соотношении 3,5 - 4,0 : 4,2 - 7,2 соответственно в присутствии третичных оснований - N-метилморфолина, трибутиламина.