Способ определения антиоксидантной активности лекарственных веществ Советский патент 1992 года по МПК G01N33/15 

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии.

Наиболее близким по техническому решению к изобретению является способ определения природных антиоксидантов и синтетических ингибиторов методом хеми- люминесценции.

Свечение возникает при инициировании окисления этилбензола очищенным кислородом, инициатор дициклогексилпе- роксидикарбонат. Для усиления свечения в систему добавляется люминофор - 9,10- дибромантрацен. Природные антиоксидан- ты, содержащиеся в липидных вытяжках, добавляются в систему в концентрации 0,1- 2 мг/мл, а синтетические (ионол) в концентрации -50 10 ммоль/мл.

Однако такой способ имеет ряд существенных недостатков: он сложен в исполнении, т.к. для его реализации необходимо использование очищенного кислорода; способ не позволяет исследовать лекарственные вещества, трудно- или нерастворимые в этилбензоле, что ограничивает возможности РГО применения.

Целью изобретения является упрощение способа и расширение круга анализируемых объектов.

Изобретение осуществляется следующим образом.

В кювету хемилюминометра добавляют 4 мл раствора люминола 30 мкМ в смеси диметилсульфоксида (ДМСО) и К+-фосфат- ного буфера 0,005 М рН 7,6 в соотношении 60:40, 0,2 мл 100 мкМ раствора перекиси водорода, 0,2 мл 60 мкМ раствора гемина и 0,1 мл раствора лекарственного вещества в смеси ДМСО-фосфатный буфер. В контрольную пробу вместо 0,1 мл раствора лекарственного вещества добавляют 0,1 мл смеси ДМСО-фосфатный буфер без исследуемого вещества. Затем измеряют светосумму хе- милюминесценции исследуемой пробы за 5 мин при постоянной температуре. Антиок- сидантную активность лекарственного вещества рассчитывают как отношение величины светосуммы хемилюминесценции люминола о пробе, содержащей исследуемое лекарственное вещество, к светосумме хемилюминесценции контрольной пробы по формуле

А(%) -100%

СО

VI VI

00

о

00

о

где Г - светосумма хемилюминесценции в присутствии исследуемого вещества, ад- светосумма хемилюминесценции без исследуемого вещества.

Пример 1, Определение антиокси- дантной активности ортофена.

В пробу длп исследования и контрольную пробу вносят все необходимые компонент ы согласно предлагаемого способа. Определяют светосумму ХЛ люминола в опытной и контрольной пробах.

Светосумма ХЛ люминола в контрольной пробе (.) равна 15.10 имп/5 мин. Светосумма ХЛ люминола в пробе с добавлением ортофена в концентрации 50 мкМ (Л) равна 17,1.10 имп/5 мин. Актиок- сидантную активность определяют по формулеvr

А(%) -100%

±7.1 0 имп/5м.100% я 15 104 имп/5 м.

Следовательно, ортофен в данной концентрации не обладает антиоксидантной активностью.

Пример 2. Определение антиоксидантной активности бутадиена.

Согласно предлагаемого способа определяют 2. и 15104 имп/5 мин. Г 10,2-104 имп/Бмин.

Антиоксидантную активность вычисляют по формуле

А(%) -§Ј 100% 10,2-104 имп/5 M10Q% 63%

15 10 имп/5м

Следовательно, бутадиен в концентрации 50 мкМ проявляет признаки антиоксидантной активности.

Формула изобретения Способ определения антиоксидантной активности лекарственных веществ, включающий регистрацию изменений в пробе уровня индуцированной HzOz хемилюминесценции при инкубации в ней раствора исследуемого вещества в присутствии люминофора с последующим сравнением с контролем, отличающийся тем. что, с целью упрощения способа и расширения круга анализируемых лекарственных веществ, проба дополнительно содержит 5 ДМСО в конечной концентрации 60% и 60 мкМ гемина, исследуемое вещество растворяют в 60%-ном водном растворе ДМСО. а в качестве люминофора используют люми- нол,

0

5

0

Использование: медицина, фармакология. Сущность изобретения: оценивают влияние лекарственных веществ на светосумму сенсибилизированной люминолом хемилю- минесценции, сопровождающую свободно- радикальные реакции, при каталитическом разложении перекиси водорода 60 мкМ ге- мина в 60% водно-диметилсульфоксидном растворе. Способ позволяет оценивать ан- тиоксидантную активность любого лекарственного вещества.