Вещество с антиоксидантной активностью Советский патент 1993 года по МПК A61K31/19 

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной фармакологии и может быть использовано для фарма- коррекции патологических процессов, сопряженных с активацией перекисного окисления липидов (ПОД).

В качестве антиоксидантов в экстремальных исследованиях находят применение токоферола ацетат и ионол.

. Цель изобретения - расширение арсенала средств, обладающих антиокислительной активностью в эксперименте.

Поставленная цель достигается применением малабена (N, М-малонил-бис-пара- аминобензоата натрия) впервые в качестве вещества, обладающего антиокислительными свойствами. Малабен является производным малановой кислоты и имеет следующее химическое строение: (1).

0 -NH-0-COONa

СНг OC-NH-0-COONa ТИзвестно применение малабена в качестве антисклеротического, противоинфарктного и коронаролитического средства в экспериментальной фармакотерапии сердечно-сосудистой патологии (2). В патентной документации и научно-технической литературе не выявлен прототип малабену по технической сущности, каким является наиболее близкий по химической структуре аналог. Для сравнения с малабеном взяты токоферола ацетат и ионол, являющиеся прототипами по назначению (функциональными аналогами). Малабен - новое производное малоновой кислоты, производные которой не были известны как носители антиокислительных свойств, что соответствует критериям новизна и существенные отличия.

Антиокислительную активность (АОА) малабена выявляют следующим образом.

В системах in vitro или in vivo инициируют процесс ПОЛ и оценивают интенсивность развития ПОЛ в присутствии (при введении животным) и в отсутствии препарата (у животных, не получавших препарат). Интенсивность ПОЛ оценивают по накоплению продуктов ПОЛ -диеновых конъюгатов (ДК), гидроперекисей липидов (ГП) и малоXI00 XI

О

СО

о

5

нового диальдегита (МДА) в инкубационной смеси в экспериментах in vitro или в крови и тканях животных. Об антиокислительной активности препарата (АОА) судят по уменьшению образованию продуктов ПОЛ при добавлении препарата в инкубационную смесь или при введении экспериментальным животным.

Величина, АОА может быть выражена в процентах:

АОА продукт ПОЛ ) к -(продукт ПОЛ ) о

( продукт ПОЛ ) к х100%,

где (продукт ПОЛ) к - содержание продуктов ПОЛ при индукции ПОЛ в отсутствии препарата;

(продукт ПОЛ) о - содержание продуктов ПОЛ при индукции ПОЛ в присутствии препарата.

В качестве систем индукции ПОЛ in vitro используют железо + аскорбат - зависимое ПОЛ в микросомах печени крыс. Для выявления АОА малабена его концентрацию в инкубационной смеси поддерживают в пределах моль/л. АОА малабена в опытах in vitro выявляется и при меньших концентрациях (до моль/л), но в этом случае эффект выражен в значительно меньшей .степени и уменьшается достоверность полученных результатов.

В опытах in vitro ПОЛ инициируют введением крысам вещества, обладающего прооксидантной активностью - четыреххло- ристого углерода в дозах 0,5-5 г/кг массы животного ежедневно в течение трех дней. АОА малабена выявляют при его внутри- брюшинном введении животным в виде водного раствора в дозах от 5 до 50 мг/кг массы животного ежедневно в течение трех дней. По окончании опыта животных забивают и определяют содержание продуктов ПОЛ в крови и тканях общепринятыми методами.

АОА малабена, выявленная в системе in vitro при индукции железо-аскорбат-зави- симого ПОЛ в микросомах печени крыс и в системе in vivo при индукции ПОЛ введением четыреххлористого углерода крысам поясняется примерами конкретного выполнения.

Пример 1. Пол в суспензии микросом печени крысы на 50 мМ трис-HCI буфере, рН 7,6 с концентрацией по белку 0,8 мг/мл инициируют внесением 12 мкМ двухвалентного железа и 1 мМ аскорбата. Объем инкубационной смеси равен 1 мл, содержит 0,2 мМ пирофосфата натрия. Одновременно готовят две пробы - контрольную, содержащую указанные выше компоненты, и опытную, содержащую указанные компоненты и ма- лабен в концентрации М. Пробы инкубируют в течение 10 минут при 37°С.

Реакцию останавливают добавлением 1 мл 15 % трихлоруксусной кислоты и определяют содержание малонового диальдегида по реакции с тиобарбитуровой кислотой и рассчитывают АОА малабена, которая составляет95 %.

Пример 2. ПОЛ в условиях in vivo инициируют введением 50 % масляного раствора четыреххлористого углерода (ССЦ) крысам подкожно в дозе 2 г/кг массы животного в течение трех дней. В контрольную и опытную группы входят по 6 животных. Животным опытной группы ежедневно за 2 ч до введения ССЦ вводят малабен в дозе 10 мг/кг массы животного внутрибрюшинно

в течение трех дней. На четвертый день животных забивают декапитацией и определяют содержание ДК, ГП и МДА в крови и гомоногенах печени. Содержание этих продуктов ПОЛ у животных, получавших малабен, на 30-70 % ниже, чем у контрольных животных.

В табл. 1 и 2 приведены сравнительные данные по АОА малабена и его функциональных аналогов -токоферола и ионола,

измеренной при индукции железо + аскорбат- зависимого ПОЛ в микросомах печени крыс (табл. 1) in vitro и при индукции ПОЛ введением ССЦ крысам (табл. 2).

Экспериментальные данные свидетельствуют о высокой активности малабена, превосходящей АОА ионола в опытах in vitro и АОА токоферола в опытах in vivo. Это дает возможность говорить о новом биохимическом действии малабена и внушает

обоснованную надежду, что арсенал антиокислительных средств, имеющихся в распоряжении общества, будет расширен.

Формулаизобретения

Применение N, N-малонил-бис-пара- аминобензоатя натрия в качестве вещества, проявляющего антиоксидантную активность.

Таблица 1

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакотерапии нарушений вследствие повышения перекисного окисления липидов (ПОЛ). Цель изобретения - повышение специфической антиоксидант- ной активности. Для этого при индукции ПОЛ применяют N, N-малонил-бис-пара- аминобензоат натрия в качестве вещества, проявляющего антиоксидантную активность, 2 табл.

- показатели, достоверно отличающиеся от таковых у интактных животных (р 0,05).

- показатели, достоверно отличающиеся от таковых у контрольных животных (р 0,05).

Таблица 2