Питательная среда для определения индекса стафилококков в морской воде Советский патент 1993 года по МПК C12N1/20 C12Q1/14 

| Изобретение относится к медицинской (санитарной) микробиологии и может быть использовано в бактериологических лаборана:

КЗ

ориях при контроле морской воды в зо- рекреации для гигиенической оценки ее ества с целью исключения риска заражени:1 при купании.

В применяемых в настоящее время методических материалах для выделения ста- фи юкокков как из морской, так и из пресной воды предложено использовать 1% пептон- нуп воду с 10% хлорида натрия или мясо- пептонный бульон (МПБ) с 8% хлорида нэт рия. Повышенная концентрация хлорида натрия вереде продиктована галотолерант- ными свойствами стафилококков и вносится для обеспечения элективное™.

В настоящее время во многих прибреж- ны:с зонах морей наблюдается процесс эвт- рооикации, для первой стадии которой характерно бурное размножение собствен 1

ной аутофлоры моря. При использовании в этих условиях вышеуказанной среды или других сред, содержащих хлорид натрия, для индикации стафилококков возникает ряд методических затруднений, Это обусловлено тем, что на солевых средах активно размножается обширная группа галотоле- рантной микрофлоры моря, большая часть которой представлена галофильными вибрионами.

Количество галотолерантной микрофлоры, по нашим данным, в. и юле-августе месяцах в зонах рекреации Черного и Азовского морей достигало 10 10 и более в 1 дм воды, что значительно превышает возможное количество стафилококков в воде пляжей (103-104). Кроме того, многие из представителей этой микрофлоры обладают как и стафилококки лецитовителлазной активностью и имею близкие к ним морфологические и культургльные свойства. В связи

ю

4 К N

Сл5

с этим определение индекса стафилококков в морской воде при обильном развитии га- лотолерантной аутофлоры моря становится практически невозможным.

Целью изобретения явилась разработка питательной среды накопления, пригодной для выделения и учета количества стафилококков в воде моря в летний период года,

Для этого предварительно в экспериментальных условиях изучения сравнительные свойства стафилококков (S. aureus № 208, 1426а, № 4266, № 716) и галофильных микроорганизмов (табл.1). Группа последних состояла из восьми часто встречающихся видов, которые отличались по характеру роста на МЖСА(мрлочно-желточно-солевом агаре), пигментообра-зованию и морфологическим признакам. Среди них были идентифицированы 2 вида: V.parahaemolyticus, V.alginolyticus.

Приведенные в табл.1 результаты исследований показали, что существенным дифференциальным, признаком стафило- к окков и галофильных микроорганизмов явился лишь рост в пептонной воде без хлорида натрия. Это и было положено в основу разработки среды накопления для определения индекса стафилококков в морской воде.

В сравнительном аспекте изучена интенсивность размножения указанных штаммов галофильных микроорганизмов и стафилококков в официальной и разработанной видах питательных сред. Морскую воду в объеме 100 см3 контаминировали смесью штаммов галофильных микроорганизмов и одним из штаммов стафилококков. Концентрация галофилое в десятки и сотни раз превышала концентрацию стафилококков. Индексы микроорганизмов определяли методом разбавлений с использованием указанных вариантов сред накопления и последующим высевом из них микроорганизмов на подтверждающие элективные среды: для стафилококков - МЖСА с 6% NaCI, галофильных микроорганизмов - среда Ли- бензон,

В табл.2 приведены результаты, полученные при посеве опытных образцов морской воды в разработанную среду и общепринятую солевую среду.- 1 % пептон- ную воду с 10% NaCI. pH 7,2-7,4, которая вошла в научно-техническую документацию.

Прежде всего, обращают на себя внимание низкие индексы аутохтонных галофильных микроорганизмов при посеве воды в разработанную среду по сравнению со

стандартной средой (t2,4 4,8-11,22). Тем самым создавались благоприятные условия для развития стафилококков и все изученные штаммы стафилококков интенсивно размножались в разработанной среде. В

официальной среде активно размножалась галофильная микрофлора, вто время какдва штамма стафилококков вообще не удалось обнаружить, а два других размножались значительно менее активно, чем в разработайной среде (ti,4 6,79 и 6,3).

Чувствительность предлагаемой среды достигает десятков клеток в 1 дм 3 морской воды в условиях ее обсеменения галофиль- ной микрофлорой до 105-106 в том же объеме, что является вполне достаточным с учетом существующего допустимого норматива содержания лецитиназоположитель- ных стафилококков - 100 микробных тел в 1 дм3-воды.

Использование предлагаемой среды накопления позволило определить стафилококки в морской воде в индексах, близких к фактическому обсеменению. Среда значительно повышает эффективность санитарно-бактериологического контроля морской воды в зонах рекреации в летний период, что необходимо для своевременного проведения профилактических мероприятий по оздоровлению моря.

Приготовление среды. 10 г ферментативного пептона, 20 г глюкозы растворяют при нагревании в 1 дм tстерильной дистиллированной воды. После растворения инг- редиентов устанавливают рН 7,4-7,6.

Разливают в стерильную посуду. Стерилизуют в автоклаве при 112°С 12 мин. Перед употреблением в среду вносят полимиксин из расчета 200 ЕД на 1 см3 и разливают в стерильные пробирки о 10 см .

Формула и.зобретения

Питательная среда для определения индекса стафилококков в морской воде, включающая пептон и водопроводную воду, о т- личающаяся тем, что, с целью повышения элективных свойств среды, она дополнительно содержит глюкозу и полимиксин при следующем соотношении компонентов: пептон 10,0 г; глюкоза 20,0 г; полимиксин 200000 ЕД; водопроводная вода до 1 л.

Таблица 1

Использование: медицинская (санитарная) микробиология, бактериологический контроль морской воды. Сущность изобретения: предлагаемая среда состоит из следующих компонентов: пептон 10,0 г; глюкоза 20,0 г; полимиксин 200000 ЕД, водопроводная вода до 1 л. Использование среды накопления позволяет определить стафилококки в морской воде в индексах, близких к фактическому,обсеменению. Среда значительно повышает эффективность санитарно-бактериологического контроля морской воды в зоне рекреации в летний; период, что необходимо для своевременного проведения профилактических мероприятий по оздоровлению моря. 2 табл.

Сравнительная характеристика свойств группы галофильных микроорганизмов и стафилококков

Условные обозначения: + - положительная реакция

± - положительная реакция у более

половины изученных штаммов - - отрицательная реакция филлококков-МЖСА

с 6 %NaCI, галофильных микроорганйзмов-среда Либензон.

Индексы стафилококков и галофильных микроорганизмов

Таблица 2

Условные обозначения: А-МСЖА с 6 %NaCI; Б-среда Либензон; 0-отрицательный результат; -не исследовали.

Продолжение табл. 2