Способ определения активности комплемента по альтернативному пути Советский патент 1993 года по МПК G01N33/53 

Способ относится к медицине, а именно к медико-биологическим способам исследования комплемента человека при различных заболеваниях, а также, для изучения .влияния на него каких-либо факторов.

Целью изобретения является повышение точности способа при определении АПК в сыворотках крови при отравлениях двухвалентными катионами.

Способ осуществляют следующим образом. В термостатированную при 37°С кювету спектрофотометра помещают 0,1 мл сыворотки крови, мединаловый буфер (рН 7,4), содержащий мМ и стандартное количество эритроцитов кролика (ЭК) (1,5 107. Кл/мл). Конечный объем .инкубационной, смеси 0,8 мл. Регистрируют лизис по убыли оптической плотности при 800 нм по методу Халяпина и Прокопьева. После завершения лизиса эритроцитов добавляют следующую равную порцию эритроцитов и вновь опре-.

деля ют скорость лизиса. Активность АПК j рассчитывают по формуле:

Активность АПК 0,3x0,6, где х - скорость лизиса второй порции ЭК.

Пр и ме р 1. В кювету помещают0,1 мл донорской сыворотки, до 5 мМ концентрации в мединаловом буфере, 0.1 мл стандартной взвеси эритроцитов кролика. Конечный объем инкубационной смеси составляет 0,8 мл. После завершения лизиса первой порции эритроцитов, добавляют вторую равную порцию и вновь определяют скорость лизиса, которая составила 16,2. Значение активности АПК составило: 0,3x16,2 + 0,6 5,46. В этой же сыворотке определили активность АПК по прототипу. Значение активности АПК, определенное по прототипу .равно 5,5. В табл.1 приведены (средние из 15 опытов) данные определения активности АПК по прототипу и по изобретению.

XI

Ч СО О

о

ел

Данные таб.л,1 показывают отсутствие существенных различий между этими величинами. По литературным данным (прототип) средняя активность АПК доноров равна- (6,2 ± 0,2)105 ЛЕК/мл, т.е. по значению близка на.шим данным.

При м е р 2. Регистрировали лизис второй порции эритроцитов кролика сывороткой крови II при отравлении солью двухвалентного металла Со По формуле рассчитывали активность АПК. Значение активности АПК составило 2,2. Активность АПК для этой же сыворотки, определенная по прототипу равна 6,0. В табл.2 представлены средние (п 7) значения активности АПК при отравлении.солями двухвалентных металлов (Ni и Со),определенные по прототипу и по изобретению.

По данным табл.2 видно, что в присутствии ЭГТА (прототип) Не обнаруживается эффекта двухвалентных катионов на АПК. По изобретению выявлено значительное снижение АПК, что согласуется с клиническими данными о снижении иммунореактивности у пациентов при отравлениях такого рода

0

5

0

5

(Ю.А.Ершов, Т.В.Плетенева. Механизмы токсического действия неорганических соединений,-19.89 г., ст.131-137).

Использование способа позволяет

- удешевить исследование за счет исключения применения ингибитора классического пути активации комплемента - импортного реактива ЭГТА.

- повысить точность определения активности АПК при отравлении двухвалентными катионами.

Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я Способ определения активности комплемента по альтернативному пути, включающий забор крови, выделение сыворотки, инкубацию ее с эритроцитами кролика с определением активности комплемента по скорости лизиса эритроцитов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа в крови при отравлениях двухвалентными катионами, перед инкубацией сыворотку крови дополнительно инкубируют с эритроцитами кролика до их полного лизиса. :

.Т а б л и ц а 1

Изобретение относится к медицине, а именно к способам исследования системы .комплемента. Цель изобретения - повышение точности способа. У обследуемого берут кровь, выделяют сыворотку, вносят ее в объеме 0,1 мл в термостатированную кювету и добавляют, эритроциты кролика. После завершения лигнина эритроцитов добавляют вновь эритроциты кролика и определяют активность комплемента по альтернативному пути по скорости их лизиса. По сравнению с прототипом способ позволяет определить активность комплемента по альтернативному пути в присутствии двухвалентных металлов, в том числе и при отравлении ими.

Таблица 2