Способ определения активности комплемента Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическим способам исследования комплемента человека при различных заболеваниях, а также для изучения влияния на него каких-либо факторов.

Цель изобретения - повышение точности.

Способ осуществляется следующим образом.

В термостатированную при 37°С кювету спектрофотометра помещают 0,1 мл сыворотки крови, добавляют мединаловый буфер (рН 7,4), содержащий 0,1 % желатина до объема 0,8 мл. После прогревания в течение 3 мин в инкубационную смесь добавляют 0,02 мл буфера, содержащего 0,36-106 сенсибилизированных эритроцитов барана (СЭБ). Регистрируют скорость лизиса эритроцитов при 800 нм. После завершения лизиса в инкубационную смесь добавляют следующую, равную предыдущей, порцию СЭБ, регистрируют скорость лизиса и/ipo- должают последовательно добавлять равные порции СЭБ до полного истощения

сыворотки. Строят график зависимости скорости лизиса СЭБ от количества добавляемых клеток. Путем экстраполяции графика на соответствующую ось регистрируют активность комплемента, которую сначала определяют как количество СЭБ полностью истощающих 0,1 мл сыворотки (Е), а затем рассчитывают активность комплемента; ко(Л

С

торая равна

0,1 0,9 10°

(ед. СНбо). где

0,1 - количество сыворотки в инкубационной смеси; 0,9-106-количество СЭБ, равное половине от стандартного, принятого при определении СНво; CHso - величина, обратная количеству сыворотки, лизирую- щей 50% стандартной взвеси эритроцитов. Пример1.В термостатированную при 37°С кювету помещают 0,1 мл сыворотки крови донора, мединаловый буфер (рН 7,5), содержащий 0,1% желатина до объема 0,8 мл. После прогревания смеси в течение 3 мин вносят 0,02 мл буфера, содержащего 0,36 -106 эритроцитов, регистрируют скорость лизиса при 800 нм, после завершения лизиса вносят следующую порцию эритроцитов и продолжают процедуру до полного истощения комплемента, регистрируемое по отсутствию возобновления лизиса после добавления очередной порции.

Результаты представлены в таблице.

Количество СЭБ, лизированных 0,1 мл сыворотки крови составляет 13,750,36х ,95-10В клеток

СНат 4 95 1°

55.

0,1 0,9 106

Степень истощения комплемента малой порцией зимозана (0,5 мг), определяемая по прототипу, изменяется в гораздо больших пределах, чем при регистрации ее по предлагаемому способу.

Точность предлагаемого способа определения активности комплемента повышается в 2-3 раза.

Предлагаемым способом можно определить в данном источнике комплемента компонент, который лимитирует процесс лизиса гетерологичных клеток. С этой целью после полного истощения комплемента в

исследуемой пробе необходимо добавить в инкубационную смесь какой-либо компонент комплемента. Если при этом источник комплемента восстанавливает свою литическую активность, значит данный момент в исходном материале был истощен первым, т.е. он лимитирует процесс лизиса гетерологичных клеток. Этим способом, кроме того/можно оценивать качество приготовляемых для клинических целей реагентов для определения отдельных компонентов комплемента. Реагент должен обладать достаточным резервом литической активности. С помощью метода можно определять

оптимальный способ приготовления реагента.

Формулаизобретения Способ определения активности комплемента в сыворотке крови, включающий

инкубацию сыворотки с порцией эритроцитов барана, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, инкубацию сыворотки осуществляют при последовательном добавлении порций

эритроцитов барана. .

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическим способам исследования комплемента человека при различных заболеваниях. Цель изобретения - повышение точности Способа. Выделенную сыворотку крови инкубируют с последовательно добавляемыми порциями эритроцитов, а активность комплемента определяют по их лизису. По сравнению с прототипом увеличивается точность способа в 2-3 раза..,

Количество добавляемых порций зрит. поО.36-106 Кл Скорость лизиса, V-10fr IOi/MHH

1 234 5 6 7 89 10 11 12 13 6.8 6.2 5,7 5,2 4.9 4.2 4.1 3.4 3,1 2,6 2,3 1,8 0,6