Способ пассирования клеток животных и устройство для его осуществления Советский патент 1993 года по МПК C12N5/00 C12M3/00 

Изобретение относится к технике культивирования клеток вне организма и может найти применение в биологии, медицине и биотехнологии.

Изобретение предназначено преимущественно для облегчения техники пасси- рования без использования протеолитичес- ких ферментов и хелатирующих агентов при непрерывном ведении культуры клеток для исследовательских работ на культурах кон- тактзависимых клеток. Кроме того, предлагаемый способ может быть использован в биотехнологии для получения биомассы клеток с целью последующего выделения из них биологически активных веществ и вирусных препаратов.

Целью изобретения является увеличение выхода и уменьшение травмируемое™

клеток в процессе их отделения и снятие с носителя.

На чертеже изображено устройство для реализации предлагаемого способа.

Устройство содержит флакон 1 с пробкой 2, в которой с помощью стержней 3 закреплены эластичные трубки 4, соединенные с волокнами 5, свободно расположенными на дне флакона.

Изобретение реализуется следующим образом.

Суспензию клеток в питательной среде вводят во флакон 1, закрывают его пробкой 2, в которой закреплены носители волокна (капилляры) 5. Клетки оседают на дно флакона 1 и волокна 5. После прикрепления клеток к волокнам 5 (контроль осуществляют при помощи микроскопа) пробку 2 с волокнами 5 вынимают и переносят во флакон со

XI

Ю Ю Ю О VI

свежей питательной средой, соблюдая условия стерильности. Дальше клетки растут на волокнах до образования мультислоя.

Для отделения клеток флакон несколько раз встряхивают вручную. При этом слабо прикрепленные верхние-слои клеток отделяются от волокон, обнажая 1«1онослой распластанных на волокнах клеток. Контроль за ростом и отделением клеток осуществляют визуально и с помощью микроскопа. Затем пробку 2 с волокнами 5, покрытыми монослоем оставшихся клеток переносят во флакон со свежей питательной средой для выращивания нового мультислоя и осуществления последующего цикла пассирования.

Пример. Фибробласты китайского хомячка лини В-11-d-ii-FAF-28 клон 431 выращивали в смеси сред Игла и 199 (1:1) с добавлением сыворотки крупного рогатого скота (10%) и гентамицина (150 мкг/мл). Суспензию клеток объемом 7 мл с концентрацией 4 105 клеток/мл заливали во флакон Карреля с волокнами, диаметром 1 мм и длиной 2 до 3 см. После прикрепления клеток к волокнам примерно через 10ч культивирования при 37°С пробку с прикрепленными к ней волокнами перенесли в культуральный флакон со свежей питательной средой. Легким встряхиванием волокна располагали во флаконе так, чтобы они были отделены друг от друга. Далее проводилось культивирование при 37°С до образования мультислойных структур кле0

5

0

5

0

ток на волокнах, через 2-3 дня встряхиванием снимали по (5-6) -106 клеток с одного флакона в объеме среды 7 мл.

Предлагаемые способ и устройство пассирования клеток позволяют увеличить выход клеток снимаемых с подложки в 10-20 раз по сравнению со способом механического съема клеток с сохранением 97-98% жизнеспособных клеток.

Формула изобретения

1. Способ пассирования клеток животных, включающий культивирование клеток на носителе с последующим их механическим снятием, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода и уменьшения травмируемое™ клеток, в качестве носителя используют волокна, клетки культивируют до образования мультислоя, затем верхние слои клеток снимают, а носитель с монослоем клеток культивируют в свежей питательной среде до образования мультислоя.

2. Устройство для пассирования клеток животных, включающее флакон с горловиной и пробкой, отличающееся тем, что, с целью увеличения выхода жизнеспособных клеток за счет снижения их травмируе- мости в процессе деления и снятия, во флаконе размещены волокна-капилляры, служащие носителем для клеток, расположенные свободно на дне флакона и соединенные с пробкой посредством гибких эластичных трубок и стержней.

Использование: биотехнология и техническая микробиология. Сущность изобрете- нияжлетки культивируют до прикрепления к носителю. Затем носитель с монослоем клеток переносят в свежую питательную среду и культивируют до образования мультислоя. Верхние слои клеток снимают встряхиванием, монослой клеток вновь культивируют до образования мультислоя в свежей питательной среде. Устройство содержит емкость с размещенным в ней носителем клеток в виде волокон, закрепленных в крышке ёмкости. 2 с.п. ф-лы, 1 ил.